TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tehuacán

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

EQUIPO 6

PRÁCTICA No. 7

PREPARACIÓN Y SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO

SÓLIDO Y SEMISÓLIDO EN TUBO.

PRESENTAN:

PACHECO FLORES ARELY 20360438

ORTIZ MARTINEZ AIDEE JACQUELINE 20360609

MARROQUÍN REMIGIO ALEJANDRA 19361430
MONFIL CANSECO JULIO LIZANDRO 20360424
CASTRO VILLEGAS JAIR 20360348

ASESORA:
ING. ROSA MARÍA ZAVALETA MARTÍNEZ

ENERO – JUNIO

TEHUACÁN, PUEBLA, FEBRERO DEL 2023

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Instituto Tecnológico de Tehuacán

 Objetivo
Conocer la composición, uso, almacenamiento y aplicaciones de medios de
cultivo.
Conocer técnicas de siembra en placa.

 Fundamento teórico

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y

otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la
variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de
Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación
y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados
obtenidos.
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.
Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al
que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel,
sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente
complementadas por la adición de minerales y otras sustancias.
Los medios de cultivo solido se utilizan para obtener bacterias aisladas por la
formación de colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio
de la morfología de las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se
diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. -
Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar Cerebro Corazón, Agar Saboread, etc. Por
lo contrario los Medios Semisólidos se utilizan para estudiar la motilidad de las
bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican
totalmente a la temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

Los medios sólidos tienen generalmente agar–agar como agente solidificante,

espesante o gelificante. El agar-agar es una sustancia hidrofílica de carácter
coloidal procedente de diversas especies de algas marinas, especialmente del
género Gelidium, que tiene la propiedad de formar un gel. Químicamente el agar-
agar es un polisacárido de cadena larga, dependiendo de su tamaño el poder
gelificante.
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 Materiales
Autoclave
Hot play
Agua destilada
2 matraces Erlenmeyer de 300ml
Mechero Fisher
Papel encerado
2 Pipetas de vidrio
2 jeringas con manguera
1 vaso de precipitado de 250ml
10 tubos de ensaye de 15x125mm con tapón de rosca
Inóculo de la práctica anterior
Asa bacteriológica

REACTIVOS
Agar nutritivo
Agar citrato de Simmons

 Metodología
Esta prática se dividió en dos sesiones la primera para
preoarar nuestro medio y la segunda para inoculación.
1ra Sesión
A.PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

1. Como primer paso fue pesar nuestro agar nutrítivo

considerando que a nuestra caja Petri de vidrio le equivale
20 a 25 ml .

2. Pésamos en una charola de aluminio la cantidad calculada

de medio de cultivo para la cantidad de cajas por cada
integrante.
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3. En un un matraz Erlenmeyer dispersamos el volumen correspondiente de agua destilada.

4. En este caso no hubo necesidad de calentar nuestro agar ya que con tan solo ahitarlo se
disuelve fácilmente. Al saltarnos este paso lo qué haces es colocarlo directamente al
autoclave para su esterilización, colocándole un tapón y gorrito de aluminio

5. Pasado el tiempo lo sacamos con mucho cuidado y ahora esperamos a que se entibie un poco
sin que se solidifiqué para preparar nuestra área donde vaciaremos nuestro agar a cajas petri,
encendiendo el mechero fisher colocando las cajas Petri previamente esterilizadas dentro de
la zona esteril 30 cm alrederor del mechero aproximadamente.
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6. Para comenzar a preparar nuestro agar hacemos lo siguente Destapar el

matraz y flamenar la boca del matraz en el mechero. Tomar la caja de petri y vertir 20mL de
agar nutritivo, tapar la caja y repetir el procedimiento con las demás cajas.
7. Una vez que hicimos eso con nuestras cajas dejamos enfriar para que solodifique nuestro agar
para posteriormente empaquetarlas y meterlas a lo refrigerador boca abajo y las dejamos ahí
hasta presentarnos a nuevamente y continuar con la práctica

2da Sesión
Preparación de la zona aséptica.

1. Antes de comenzar a sembrar nuestros cultivos, como primer paso fue desinfectar nuestra
zona de trabajo, primeramente con jabón y esponja para finalizar con alcohol y dejar desar, así
también lavarnos nuestras manos muy bien.

2. Una vez echo eso encendemos nuestro mechero, para así

colocarnos nuestros guantes de látex e iremos por
nuestras cajas petri al refrigerador

3. Ahora sí ya que tuvimos todo comenzamos con nuestra

siembra en caja petri
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4. Cada integrante de nuestro equipo escogió una técnica para su sembrado con tal de que todos
trabajáramos una, así mismo rotulamos con marcador alrededor de nuestra caja el nombre de
cada integrante, bacteria a sembrar y técnica aplicada.

5. Los pasos para hacer el sembrado fueron los siguientes que utilizamos.

I. 1.-Usando la mano derecha, colocar el asa bacteriológica en la zona azul de la

flama del mechero. Inclinar el asa para permitir que la mayor parte esté en contacto
con la flama hasta que el metal se ponga al rojo vivo.
II. 2.-Con la mano izquierda tomar el tubo de ensayo que contiene la cepa de la
práctica anterior , quitar el tapón de algodón o rosca y flamear la boca del tubo. Se
debe cuidar de no tocar la parte interna del tapón.
III. 3.-Introducir el asa bacteriológica al tubo,tocar una zona del medio de cultivo en la
que
IV. no haya crecimiento para enfriar el asa.
V. 4.-Tomar un poco de inóculo de la zona en la que hay crecimiento
VI. 5.-Flamear la boca del tubo y colocar el tapón de algodón.
VII. 6.-Colocar el tubo en la gradilla.
VIII. 7.-Tomar la caja petri en la que se sembrará el inóculo.
IX. 8.-Usando la mano izquierda (si es diestro), abrir la caja.
X. 9.-Con la mano derecha descargar el inóculo en la superficie de la caja petri
haciendo estrías (FORMA DE S) y abarcando la mayor área posible. Se debe tener
cuidado de pasar suavemente el asa sobre la superficie para evitar hacer surcos
en el agar.
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6. Una vez haber finalizado con nuestra siembra tuvimos que Invertir las cajas para evitar que el
agua de condensación caiga sobre los cultivos e Incubamos las cajas petri de forma invertida
para evitar el agua de condensación, durante 24 h a 37o C.

7. Pasado las 24hrs de incubación observamos si hay crecimiento, en caso de que el

crecimiento sea nulo o escaso incubar nuevamente durante 24 h más.

8. En caso de nuestro equipo a algunos si había crecido y en dos no por lo que dejamos más
días en la incubadora.
9. Después al volver a ver nuestra muestra ya había crecido por lo que procedimos a sacarlos de
la incubadora y meterlos al refrigerados para su conservación.
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10. Ahora solo tuvimos que esperar a la próxima práctica para que nuestra docente pudiera verlos
y así decirnos qué fue lo que hicimos mal o bien.
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 Cuestionario
1.- ¿Cuál es la utilidad de la técnica de siembra por estría en medios de cultivo
solido?
Esta nos ayuda a aislar microorganismos que dan lugar a colonias separadas
para que estas después sean transferidas a una colonia y a su vez un nuevo
medio para que este se convierta en un cultivo puro.

2.-Investigar en qué casos específicos se emplea cada una de las técnicas

ejecutadas.
Sembrado masivo por estrías en caja Petri: Este método es muy utilizado para
obtener un gran número de microorganismos (incremento de inóculo), en la
superficie de un agar.
Estría cruzada (agotamiento en asa): Es un buen método para el aislamiento
de colonias (obtención de colonias aisladas) con el fin de obtener la cepa de
interés.

3.- Investigar y describir otras técnicas de siembra por estría y mencionar

¿Cuál es su aplicación?
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión.
Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria
para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza
para microorganismos anaerobios facultativos y micro aerofílicos.
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y
sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método
se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda
de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por
el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.
Siembra por picadura: con un asa recta, se toma la muestra, se siembra en
agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta que la muestra quede bien
impregnada al agar

Siembra en cajas de Petri por la Técnica de siembra en cuadrantes: El objetivo

de esta técnica, es el de diluir el inóculo a medida que se realizan estrías en la
superficie del agar. Con esta técnica de siembra, se espera que al menos en el
cuarto cuadrante (última estría realizada), se encuentren colonias de la bacteria
aisladas.
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EVANGELINA OLIVAS, ALARCON, (2011).

García-Valdés. et al., PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA, (2009-2010).

 Conclusión
Se concluye en esta práctica que logramos el objetivo de hacer siembra de
cultivo usando está técnica, así mismo desde el pesado de caldo nutritivo, y agar
hasta prepararlos. Primero se elaboró el agar, que es como una gelatina que se vertió
en un matraz, se esterilizo en la autoclave, al sacarlo se entibio y se distribuyó en las
5 cajas Petri, se dejó en refrigeración, después en el siguiente día de práctica ocurrió
la siembra con el caldo.
El caldo se distribuyó en tubos, se incubo 24 horas y después se refrigerio.
Teniendo ambos procedimos a la siembra de los bacillus.
Sacamos las cajas Petri del refrigerador y el cultivo. Destapamos un tubo
flameamos, tomamos el asa se esteriliza, se enfría y hacer el estriado sobre el agar.
No Se explicó los distintos estriados para tomar muestras de las colonias cultivadas,
ya sea estría simple, por cuadrante o degradada. También se incubaban 24 hrs. Por
consiguiente se veía el crecimiento y posterior se introdujo en el refrigerador.
 Referencias web

https://docs.google.com/document/d/1oSjsl8oXh9zhxnriIWXMhnxB2AMZ5Dja/ed
it?rtpof=true&sd=true

https://ttehuacantecnmmy.sharepoint.com/:w:/g/personal/l20360348_tehuacan_t
ecnm_mx/EYE0g9MAkLNCul80tNGqkAcBZHBf57xsFEsPEOMkrL5Ygg?rtime=5
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La práctica fue realizada en dos sesiones el día 21 y 24 de febrero del presente

año, en el laboratorio de biología de las instalaciones académicas.