UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE REGENCIA DE FARMACIA

ASIGNATURA: Fundamentos de microbiología

CÓDIGO: 502127
COMPONENTE: Práctico
UBICACIÓN: II Semestre
REQUISITOS: Fundamentos de biología
CRÉDITOS: 3
TOTAL DE HORAS SEMANALES: 2
DOCENTES: Renata Parodi – Gloria Vergara – Cristian Hernández

PRACTICA N° 2
TECNICAS MICROBIOLOGICAS, TIPOS DE SIEMBRA Y UBICUIDAD MICROBIANA

OBJETIVOS
 Conocer el manejo del material empleado en el laboratorio de microbiología.
 Poner en practica las técnicas de siembra mas empleadas en microbiología.
 Comprender la selección del medio indicado para cada tipo de siembra.
 Entender la utilidad de los tipos de siembra en el laboratorio.

COMPETENCIA
Aplicar las normas de bioseguridad establecidas para el trabajo en el laboratorio de microbiología y desarrollar
destreza en el manejo del material empleado en el laboratorio de microbiología, así como Realizar Técnicas
De Siembra Microbiológicas.

INTRODUCCIÓN
Para poder estudiar los microorganismos en el laboratorio es necesario emplear técnicas establecidas para tal
fin, las cuales facilitan entender el comportamiento de los microorganismos en ambientes controlados y
tomar decisiones importantes ya sea a nivel clínico, industrial o ambiental etc.
En este orden de ideas se hace meseraico conocer las técnicas utilizadas para hacer paces entre diferentes
medios de cultivo. Estos medios poseen los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos.

Si los nutrientes están en forma de solución acuosa hablamos de medios de CULTIVO LÍQUIDOS, mientras que
si añaden solidificantes, como la gelatina o el Agar (2-3%), obtenemos medios de CULTIVO SÓLIDOS. A veces
se utilizan medios de CULTIVO SEMISÓLIDOS, si la concentración de Agar es 0,6-1,5%. La siembra de los
inóculos o muestras depende de lo que se quiere investigar en el laboratorio, por lo cual se han empleado
distintas técnicas de siembra, dentro de las cuales encontramos: siembra por agotamiento masiva en medio
semisólido, en medio inclinado, en medio liquido.

JUSTIFICACIÓN
Hay numerosas técnicas con las cuales el estudiante debe familiarizarse antes de comenzar a manejar la
experimentación microbiológica. Asi como diferentes tipos de siembra y medios de cultivos para cada
situación en el laboratorio en las que se hace necesario estudiar a los microorganismos asociados con
procesos infecciosos.
MATERIAL
- tubos de ensayo con agua, tapados con tapa de rosca.
- asa con argolla
- caja de petri
- hoja de papel blanco
- Asas bacteriológicas
- Mechero
- Gradilla
- Guantes
- Medios de cultivo sólidos, líquidos y semisólidos
- Papel Kraft
- Cultivos bacterianos (cepas)

PROCEDIMIENTO
Antes de iniciar el trabajo se debe tener en cuenta lo siguiente:

 Limpiar con un desinfectante el área de trabajo

 Colocar una hoja de papel en el área desinfectada sobre la cual se ubica el mechero y la gradilla con
los elementos de trabajos necesarios. La hoja se descarta al terminar el trabajo, en la bolsa
establecida para material contaminado.

ESTERILIZACIÓN DEL ASA:

Encender el mechero antes de comenzar a trabajar. Al utilizar el asa para siembra, debe calentarse el alambre
de ferroníquel en toda su extensión al igual que la base del mango, a la llama del mechero hasta que se ponga
roja, éste proceso debe realizarse antes y después del uso; el flameado o proceso de esterilización por
incineración destruye cualquier forma de vida sobre la superficie del asa o de las agujas de disección.

HACER PASES DE UNA MUESTRA DE UN TUBO A OTRO.

El método correcto de sostener los tubos mientras se hace una resiembra o pase bacteriano es el siguiente:
Durante las siembras, el tubo debe mantenerse en la mano izquierda y el tapón en la mano derecha sostenido
entre el dedo meñique y la palma de la mano cerca de la llama del mechero, con esta misma mano debe
cogerse el asa entre el dedo índice y el pulgar.
Del correcto manejo de los tubos depende el éxito de los cultivos y por consiguiente de los resultados
microbiológicos.
Flamear las bocas de los tubos después de quitarles el tapón y antes de volverlos a tapar para evitar la
formación de aerosoles o la contaminación del tubo con bacterias del medio ambiente.

MANEJO DE TUBOS

HACER PASES DE UN MEDIO LÍQUIDO A UNA CAJA DE PETRI.

Destapar las cajas de petri manteniendo la base y la tapa simultáneamente en la mano izquierda, abriendo la
caja parcialmente y cerca de la llama del mechero. Para tener esta posibilidad la caja debe estar sobre la mesa
con el medio hacia arriba, esta se debe coger con la mano izquierda y voltear para destaparla con el dedo
pulgar de la misma mano.
El material se debe marcar con cinta de enmascarar antes de llevarlo a la incubadora. Las cajas de petri se
marcan en el borde de la base para evitar que tapen la superficie de los cultivos.

MANEJO DE CAJA DE PETRI

  Realizar un diagrama de aislamiento de colonias en un círculo de papel de 8 cms, para colocarlo en
el fondo de la caja de petri.

siembra por agotamiento. Siembra masiva: En rejilla Siembra masiva: En espina de pescado

Siembra en medio inclinado:

Siembra en medio semisólido:

 SIEMBRA POR AGOTAMIENTO: Tome una placa de Agar, marque la base de la caja de petri con los
números 1, 2 y 3. Coloque la muestra a sembrar en el número 1, realice estrías hasta la mitad de la
caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el número 2, tome las dos últimas estrías y siga estriando
hasta el número 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar las estrías ya hechas.
  SIEBRA MASIVA: Tome un hisopo estéril e introdúzcalo en el tubo qué contiene la muestra a sembrar,
luego frote toda la superficie del Agar. La evaluación del crecimiento en las placas de Agar se hace a
través de la observación de colonias en la superficie.
 SIEMBRA EN MEDIO SEMISOLIDO: Introduzca el inoculo con el asa recta hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el mismo trayecto de entrada que de salida.
 SIEMBRA EN AGAR INCLINADO: Extienda el inoculo sobre el Agar inclinado deslizando suavemente
el asa por la superficie en forma de zigzag. No olvide flamear la boca del tubo antes y después de la
siembra. Evalué la presencia de crecimiento en el Agar por la formación de una película o por el
crecimiento de colonias en la superficie.
 SIEMBRA DE MEDIO SÓLIDO A MEDIO LÍQUIDO: Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar,
retire la tapa del tubo, flamee la boca del tubo. Introduzca el asa en el tubo sin tocar las paredes y
tome un poco de colonia del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tápelo y déjelo en una
gradilla. Tome el tubo de caldo nutritivo estéril en el cual va a colocar la muestra obtenida. Realice
movimientos de rotación con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del tubo.

PRE - LABORATORIO

1- Cuál es el principio fundamental de la asepsia en el laboratorio?

2- Qué es el asa recta y para qué se utiliza.
3- Qué es el asa redonda y para qué se utiliza.

PRE - LABORATORIO

4- De ejemplo de los medios que se utilizan en cada tipo de siembra.

5- Investiga que otros tipos de siembra existen en microbiología.

MATERIALES SOLICITADOS AL ESTUDIANTE EN LAS PRÁCTICAS MICROBIOLÓGICAS:

1 caja de colores, 1 sobre de papel para lentes, rollo de cinta de enmascarar, 1 tijera, 1 pinza, 1 frasco de cloro,
guantes, tapaboca, jabón líquido, toalla de manos, 1 encendedor, 10 palillos.

EVALUACIÓN

Antes de presentarse al laboratorio debe leer y estudiar detenidamente la guía y desarrollar el prelaboratorio.
Después del laboratorio debe registrar los resultados obtenidos en su cuaderno de laboratorio.

BIBLIOGRAFIA

PUMAROLA y Cols. Microbiología y Parasitología Médica, segunda edición, editorial Reverte. España .
SÁNCHEZ, María. Manual de Procedimientos de Bacteriología Clínica.
KONEMAN y cols. Diagnostico Microbiológico, Texto y Atlas Color. Editorial Médica Panamericana 3ª. Edición
VOLK, B. Microbiología médica. Interamericana, 1997.

SANTIAGO DIONISIO. Manual de Practicas del Laboratorio de Microbiologia I y II: diversidad y estructura de
los microorganismos