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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERSITARIO DE SUR OCCIDENTE


INGENIERIA EN ALIMENTOS
MICROBIOLOGIA I

PRACTICA DE LABORATORIO No.3

OMNIPRESENCIA DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCION

Vivimos inmersos en un ambiente compartido con microorganismos que


colonizan el entorno. Los microorganismos están presentes en el ambiente: aire,
superficies, tierra, etc., y se observan en mayor número cuando encuentran las
condiciones que son favorables para su crecimiento y desarrollo.

Además se pueden encontrar en el medio que nos rodea, así como en la


piel, nariz, manos, etc. Esto se debe a la ubicuidad.

En el laboratorio microbiológico es importante mantener lo microorganismos


del ambiente fuera de los materiales de trabajo, para que no interfieran con el
aislamiento de los agentes buscados. Ello se logra mediante una serie de
medidas y cuidados en la manipulación de medios de cultivo y de los implementos
de laboratorio, tendientes a obviar la contaminación ambiental o la que se pudiera
aportar a partir de las manos, respiración u otros. Además la aplicación correcta
de normas de bioseguridad que garanticen un trabajo correcto de laboratorio
evitará la contaminación de los medios de cultivo y las posibles infecciones por
accidente de laboratorio. En conjunto esas medidas son llamadas técnica
aséptica.

Cuando se trabaja en un laboratorio de microbiología es necesario para


todo el desarrollo del trabajo realizar todas las actividades de una forma aséptica
con la finalidad de evitar contaminaciones.

OBJETIVOS

1. Demostrar la ubicuidad de los microorganismos.

2. Conocer las formas de las colonias.

MATERIALES Y CRISTALERIA

4 cajas de petri, (por grupo)


Erlenmeyer
Vidrio reloj
Hisopos
Agua desmineralizada

EQUIPO
Mechero
Incubadora
Autoclave
Plancha de calentamiento y aplicación

REACTIVOS
PCA (Plate Count Agar)

PREPARACION DE PLATE COUNT AGAR

Disolver 22.5 grs. en 1 litro de agua Desmineralizada, calentando en baño de agua


hirviendo o en corriente de vapor, coloque en autoclave (15 min. a 121°C) pH: 7,0 +-o,2 a
25°C.

A. PROCEDIMIENTO

1. Prepare el agar PCA como lo indica las instrucciones. Siga las


instrucciones paso a paso.

2. Luego esterilice tanto el agar preparado, cajas de petri, que va a utilizar e


hisopos (preparados para esterilizarlos). De acuerdo al procedimiento
establecido para esterilización.

3. Enfríe el agar hasta alcanzar aproximadamente 50 ºC.

4. Encienda el mechero (tome las precauciones del caso), retire el papel que
lo cubre y pase la boca del erlenmeyer (en donde se encuentra preparado
el agar) por el mechero, esto con el fin de evitar cualquier contaminación.

5. Luego vierta el agar en cada una de las cajas de petri. Aproximadamente


20 ml en cada una. Coloque la tapadera.

6. Deje en reposo hasta que solidifiquen.

B. Realizar cada uno de los siguientes procedimientos:

1. Quitar la tapa de una de las cajas que contiene el agar y exponerla al aire
del laboratorio durante 15 minutos y volver a cerrarla.

2. Remover la tapa, colocar la cabeza en posición inclinada (de un estudiante


del grupo) sobre la caja de agar y sacudir el cabello. Cerrarla.

3. Con un marcador indeleble trace una línea divisoria a la mitad del fondo
exterior de la tercera caja de agar. Levantar la capa y tocar la superficie de
una mitad de agar con la yema de sus dedos. Lavarse bien los dedos con
agua y jabón, repitiendo luego la operación anterior con la otra mitad del
agar. Marque cada mitad con la leyenda correcta.

4. Con un marcador indeleble trace una línea divisoria a la mitad del fondo
exterior de la cuarta caja de agar. En la primera mitad pase un hisopo
estéril. En la otra mitad pasar un hisopo estéril sobre la superficie de la
mesa de trabajo e inocular sobre la cuarta caja de agar frotando
masivamente. Cerrar la caja

5. Todas las actividades deben trabajarse cerca del mechero (con las debidas
precauciones).
6. Incubar todas las cajas a 37ºC. Observar crecimiento a las 24 horas y
luego a las 48 horas. Las cajas de Petri deben incubarse con el fondo
hacia arriba, para que agua de condensación no caiga sobre el cultivo.

SEGUNDA ETAPA

1. Observar cada caja de Petri y anotar. Puede hacer uso de un


estereoscopio.

2. El número de unidades formadoras de colonias (UFC).

3. Los morfotipos coloniales: tamaño, forma, color, elevación, borde,


transparencia u opacidad de la colonia.

NOTA: SU REPORTE DEBE CONTAR CON UN CUADRO DE CRECIMIENTO,


QUE INDIQUE LO SIGUIENTE:

TIPO DE EXPOSICION CRECIMIENTO


POSITIVO NEGATIVO
++ (cantidad de + de __ no hubo crecimiento
acuerdo al crecimiento
observado)
CUESTIONARIO

1. Que es esterilización (en base a microbiología) y cuáles son las condiciones


de temperatura, presión y tiempo.

2. Cuáles son los métodos de esterilización basados en el calor utilizados en


el laboratorio de microbiología.

3. Realice un diagrama de autoclave indicando cada una de sus partes.

4. Por qué es importante esterilizar los medios y los utensilios a utilizar en el


laboratorio de microbiología.

5. Investigue como se realice el descarte de materiales usados

6. Cuando se abre una placa o caja de Petri, implica crear una corriente de
aire en su interior que puede ocasionar aerosoles, explique. Y cuando
sucede esto.

7. Defina cepa

8. Por qué se condensa el agua en el interior de la caja de Petri

9. Composición química del agar utilizado

10.Ilustre las observaciones con un dibujo de cada caja.

11.Defina que es agua desmineralizada y por qué se utiliza agua


desmineralizada para preparar agar

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