Práctica # 4 & 5

Esterilización
&
Preparación de medios de cultivo

Maestra: Anayanci Torres Favela

Integrantes:
Jorge Alejandro Granados Neyra
María Renée García García
Ana Victoria Avila Monroy
Cristina Roberta Flores Galarza
Fecha: 31 de octubre
Escuela: Colegio de Bachilleres del Estado de Chihuahua Plantel No.3
Materia: Química Clínica
Grupo: 528
 Introducción
Esterilización
En el reporte de esta práctica hablaremos sobre la esterilización de material
para los medios de cultivo.

La esterilización es un proceso fundamental en el ámbito de la microbiología,

ya que nos ayuda a la eliminación de microorganismos no deseados que
puedan contaminar los medios de cultivo y las muestras biológicas usadas.
Es muy importante la eliminación de microorganismos ya que puede interferir
con los resultados del experimento.

En el reporte de esta práctica de laboratorio nos centramos en cómo se

esterilizan los materiales necesarios para el cultivo de microorganismos, así
como en la preparación y esterilización de los propios medios de cultivo.
En este caso utilizamos la técnica de esterilización con la autoclave; pero
existen diversas técnicas como la filtración y la radiación ultravioleta.

La autoclave es capaz de eliminar todo tipo de microorganismos, como

bacterias, virus e incluso esporas, que se sabe que sobreviven a altas
temperaturas y solo pueden eliminarse a temperaturas de alrededor de 130
°C.

La ventaja de los autoclaves es que puede controlar libremente y fácilmente

el nivel de calor y presión para desinfectar a fondo el material y asegurarse de
que esté libre de todos los microorganismos innecesarios.

Materiales generales y a esterilizar

➔ Autoclave
➔ Agua
➔ Mechero
➔ Papel kraft
➔ Cinta testigo
➔ Masking Tape
➔ Materiales a esterilizar:
Cajas petri, pipetas, matraz, hisopos, agitador.
 Metodología:
1. Envolver los materiales con papel kraft evitando dejar espacios vacíos, pegar con
cinta masking
2. El matraz no es cubierto totalmente si no se hace una bolita de algodón envuelta
en gasa ( unir las esquinas de la gasa hasta que queden las orillas arriba como
especie de sujetador) como función de tapa que al introducirla, no debe salirse, al
levantar cuidadosamente. Hacer una especie de barco de papel (capucha) para
tapar la bolita de algodón.
3. Recortar pedazos de cinta testigo la cual servirá para identificar que los
materiales ya han sido esterilizados.
4. Colocar agua necesaria en el autoclave e introducir los materiales ya listos.
5. Colocar tapa y cerrar herméticamente, cerrar válvula y esperar a que la aguja
marque 1.02 kg/cm2 0 15.1 lb/pul2 a 121 grados centígrados manteniendo esta
válvula de vapor, esta expulsara el aire por 15 minutos.
6. Pasados los 15 minutos, apague y espera a que disminuya la presión hasta que el
manómetro indique 0 grados. Verifica abriendo la válvula de vapor, la cual
expulsa el aire restante.
7. Desinfectar la mesa de trabajo, posteriormente encender el mechero.
8. Sacar el material del autoclave, dejar enfriar el material en la mesa de trabajo
previamente esterilizado y reservarlo para la práctica de siembra de medios de
cultivo.

IMÁGENES

Conclusión
Es muy importante conocer el propósito de la esterilización ya que es un paso
fundamental para los medios de cultivo. En nuestro caso fue muy fácil seguir el
procedimiento y obtuvimos los resultados esperados.
 Introducción
Medios de cultivo
En el reporte de esta práctica hablaremos sobre los medios de cultivo.
Los medios de cultivo desempeñan un papel esencial en la microbiología y la
biología celular al hacerlo en un entorno controlado para el crecimiento y
estudio de microorganismos como bacterias, virus y hongos. Estos medios se
componen de ingredientes específicos que proporcionan los nutrientes y las
condiciones necesarias para el desarrollo de los organismos de interés. El
conocimiento y la preparación adecuada apropiada de los medios de cultivo
son fundamentales para tener éxito al crecer estos.

Esta práctica de laboratorio se enfoca en la preparación y utilización de

medios de cultivo, en nuestro caso el agar macconkey, estaremos enseñando
aspectos clave como la esterilización (vista al inicio del reporte), la
formulación y los ingredientes al preparar el agar, y el manejo aséptico. A
través de esta práctica, adquirimos habilidades esenciales para el cultivo y
estudio de microorganismos, lo que nos puede permitirá realizar
investigaciones y experimentos.

El entendimiento de los medios de cultivo y su correcta preparación es crucial

tanto en la investigación científica como en aplicaciones prácticas en campos
como la medicina, la biotecnología y la microbiología industrial.

Materiales
➔ 1 mechero
➔ 1 tripie
➔ 1 tela de asbesto
➔ 1 matraz Erlen Meyer de 500 ml
➔ 3 matraz Erlen Meyer de 150 ml
➔ 1 piseta
➔ 1 probeta de 100 ml
➔ 1 guante de calor
➔ 1 vidrio de reloj
➔ 1 agitador
➔ Tapones para el matraz erlen meyer de 500 ml y tres tapones para los de
150 ml
 Metodología:
En todos estos pasos es importante siempre trabajar detrás del mechero para que
cualquier tipo de microorganismo requerido pase y contamine los materiales ya
esterilizados o la mezcla del agar.
1. Preparar mezcla
En nuestro caso realizamos el medio de cultivo agar macconkey, sus
instrucciones indican que para 1000 ml de mezcla se requieren 50 gramos de polvo del
cultivo deshidratado ya que nosotros solo necesitábamos preparar 100 ml de mezcla
hicimos una regla de tres lo cual nos indicaba que para 100 ml de agua destilada
requerimos solo 5 gramos.
( ya que nosotros lo hicimos en conjunto con otra equipo nosotros solo hicimos la
mitad)
Primero medimos 45 ml de agua destilada en una probeta. Luego medimos el polvo
colocado en un vidrio de reloj, 5 gramos. En el matraz erlen meyer de 500 ml vertemos
el cultivo deshidratado y cuidadosamente vertemos el agua ya medida. Se mezcla hasta
disolver el polvo y debe tener una textura no tan grumosa pero homogénea del todo.
Esta mezcla se reposa durante 10 minutos con un tapón de algodón igual al que hicimos
al esterilizarlo y después se calienta encima del mechero con agitación constante en
círculos cuidando que no llegue a un punto de ebullición durante alrededor de dos
minutos. Detrás del mechero verter las mezclas de los matraz de 500 ml en cantidades
iguales o casi iguales en los tres matraz de 150 ml y taparlos al instante con sus
respectivos tapones de algodón hechos antes de la preparación de la mezcla.
Dejar reposar en los matraces para verificar que la mezcla quedara bien echa.

Imágenes
 Conclusión

En esta práctica de laboratorio, exploramos cómo se realiza el agar MacConkey

como un medio de cultivo para el aislamiento y la identificación de bacterias gram
negativas, particularmente aquellas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae.

Durante la práctica, hemos aprendido a preparar el agar MacConkey, y a esterilizar

adecuadamente todo el material. Nosotros nos divertimos mucho al conocer su
metodología y seguir los pasos para realizarlo.

No se nos dificulto seguir los pasos aunque nos preocupaba que nuestra mezcla no
se solidifica. Los pasos no son difíciles de seguir y esperamos con ansias seguir
aprendiendo acerca diferentes medios de cultivo y ver colonias de bacterias, hongos
y virus de otros medios de cultivo.