TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tehuacán

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

EQUIPO 6

PRÁCTICA No. 10

PREPARACIONES EN FRESCO
PRESENTAN:

PACHECO FLORES ARELY 20360438

ORTIZ MARTINEZ AIDEE JACQUELINE 20360609

MARROQUÍN REMIGIO ALEJANDRA 19361430
MONFIL CANSECO JULIO LIZANDRO 20360424
CASTRO VILLEGAS JAIR 20360348

ASESORA:
ING. ROSA MARÍA ZAVALETA MARTÍNEZ

ENERO – JUNIO

TEHUACÁN, PUEBLA, MARZO DEL 2023

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 Objetivo

Realizar preparaciones en fresco y describir las principales características

morfológicas y estructurales.

 Fundamento teórico
El estudio "en fresco" se desarrolló cuando todavía no se habían inventado la
fijación y la tinción. Actualmente se siguen utilizando, sobre todo gracias al
desarrollo de las técnicas de contraste de fases y contraste interferencial. Un
estudio “en fresco" es aquel que no precisa un tratamiento en el que se maten
las células, como es la fijación o la inclusión. No presenta dificultades añadidas
a las de cualquier técnica microscópica, pero sí que requiere la máxima limpieza.
Las bacterias no teñidas muestran pocos detalles morfológicos, el diagnóstico
bacteriológico generalmente se basa en las diferentes afinidades tutoriales de las
bacterias para identificarlos más adecuadamente, Sin embargo, también resultan
útiles las preparaciones no teñidas en la determinación de la movilidad. Las
preparaciones fijas y teñidas son de uso casi universal, tanto a partir de
especímenes recibidos como de colonias cultivadas. En general una muestra del
espécimen original puede ser colocada directamente sobre el portaobjetos o bien
ser recogida con un asa, recordando siempre tener una preparación delgada y
homogénea. Una colonia puede ser examinada haciendo con ella una
suspensión tenue en una gota de solución salina, y luego extendiéndola con un
asa sobre un portaobjetos. Las películas secadas al aire son fijadas con calor
suave sobre la flama de un mechero y luego pasadas a través de ella. Debe
tenerse cuidado para evitar el calor excesivo, que puede alterar la forma
bacteriana. El calor deseable es aquel en el que el portaobjetos sea apenas
caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos.
La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico
es hacer una preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en
fresco simple ("entre porta y cubre"). A partir de cultivos en medio líquido se
procede de la siguiente forma: Cargar el asa bacteriológica con una gota de de
cultivo y depositarla en un portaobjetos limpio. Colocar un cubreobjetos
procurando que no queden atrapadas burbujas de aire. Si la cantidad de cultivo
que recoge el asa es muy pequeña se carga 2 o 3 veces.

Materiales
 Microscopio
 Mechero de Bunsen
 Cinta adhesiva transparente
 5 Portaobjetos
 5 Cubreobjetos
 Asa bacteriológica.
 Pipeta Pasteur.
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 Material biológico:
 Agua de charco.
 Fruta contaminada con hongo (Pulque/tortilla con moho, Yogurt natural.)
 Reactivos
 Lugol.
 Safranina.
 Azul de algodón de
 lacto fenol

 Metodología
1. En este práctica de laboratorio observamos con ayuda del microscopio 3 grupos
microorganismos que fueron: protozoarios, hongos levaduras y bacterias para eso tuvimos
que tomar nuestra muestra de una fruta, agua de estanque y un yakult.

2. Antes de comenzar primero tuvimos que limpiar y desinfectar nuestra área trabajar al igual
que nuestra manos, colocarnos nuestra bata de laboratorio, cofia y pedir el material para
comenzar.

o Protozoarios

1. Comenzamos esterilizando nuestra asa bacteriológica en la flama

del mechero de Bunsen, dejamos enfriamos y colocamos una gota
de agua de estanque en el portaobjetos para así cubrir con el porta
objetos.
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2. Observamos al microscopio con los Objetivos 10X y 40X y hacemos nuestras anotaciones
correspondientes.

o Hongos y levaduras

1. Tomamos una muestra de nuestra fruta contaminada con ayuda de nuestra asa
bacteriológica y colocamos entre el porta y cubreobjetos para así colocarle una gota de azul
de algodón de lactofenol. Trancando de disolverlo bien para que esté se distribuyera bien.

2. Observamos al microscopio con el objetivo 4X y 40X, haciendo las anotaciones

correspondientes.
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o Bacterias

1. Para esta muestra utilizamos nuestro yakult comenzamos

agitando bien la bebida y vaciamos en una vaso precipitado
para proceder a tomar una muestra con ayuda de nuestra
asa bacteriológica y hacemos una extensión delgada sobre
un portaobjetos con una gota de lugol y cubreobjetos.

2. Observamos al microscopio con el objetivo 40X

3. En esta muestra tuvimos que observar que las bacterias se

aprecian como puntos móviles y refringentes en todo el campo.

4. En nuestra caso no pudo observar la movilidad, así que para eso optamos por sustituir el
yakult con un yogurt (alpura) y en este realizamos los mismos pasó y nuestro resultados
fueron más favorables al observar la movilidad es las bacterias. Realizamos nuestra
anotaciones correspondientes.
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 Cuestionario
1.- Mencione un microorganismo intermedio entre hongo y bacteria y uno entre
bacteria y virus.
Un microorganismo “intermedio” entre un hongo y una bacteria, es
Sreptomyces.

2.- Mencione las diferencias entre algas unicelulares y protozoarios.

Una diferencia muy característica, es que las algas son autótrofas, mientras
que los protozoarios, son heterótrofos, otras características, es que las algas
pueden formar colonias, pero los protozoos no, los protozoos pueden ser
patógenos, mientras que las algas no.

3.- Describa las indicaciones de una preparación en fresco en un medio

líquido, de un medio semisólido y observación en gota pendiente.
En un medio liquido:
Primero, se debe flamear el asa, tomar una asada de manera aséptica de la
muestra que se va a inocular, después se debe depositar la muestra en el tubo
con caldo agitando el asa en él para desprender bien el inóculo, y posteriormente,
se debe de incubar a la temperatura indicada.
Medio semi-solido:
Primero, se debe de flamear la aguja de inoculación, después tomar una asada
de manera aséptica de la muestra a inocular, posteriormente se introduce la
aguja en el medio sólido en forma de pico de flauta picando la base del medio
hasta la mitad y estriando el pico del medio, después se flamea de nuevo y se
incuba a la temperatura indicada.
Por su parte, la observación en gota pendiente, se realiza colocando una gota
del material en un cubreobjetos y cubriéndolo con un portaobjetos (invertido) con
una excavación central (portaobjetos excavado)

https://www.ivami.com/es/microbiologia-de-abonos-y-fertilizantes/5440-
actinomicetos-en-suelos-tierras-aguas-sedimentos-fertilizantes-
microorganismos-
eficientes#:~:text=Por%20ello%2C%20se%20consideraron%20un,incluida%20
en%20el%20orden%20Actinomycetales.
MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA, Ramírez Aguilera, et al.,
(enero 2018).
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 Conclusión
Cabe mencionar que una preparación en fresco no utiliza ningún tipo de tinción
para poderse visualizar, aunque puede opinarse por teñir quizá de cristal violeta,
aunque no sea necesario, se observó yakult, agua de estanque y un alimento
descompuesto para ver su estructura y morfología de una bacteria, un
protozoario y un hongo respectivamente. En el yakult se observan sus bacillos,
mientras que en el agua de estanque formas de entonabas o algo parecido y en
el caso del hongo se observó una estructura nodular ya que estaba muy
aglutinado y un parecido a las Sacharomyces.

 Referencias web

Gutierrez Romero A., et,al, 2020.Manual de Microbiologia General I, México, UNAM

http://cdigital.dgb.uanl.mx/la//1020082549/1020082549_023.pdf

http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/02-
MICROSCOPIA.pdf

La práctica fue realizada en dos sesiones el día 9 de marzo del presente año, en el
laboratorio de biología de las instalaciones académicas.