Universidad Autónoma de Nuevo León

Facultad de Ciencias Biológicas

RT PCR y RT qPCR
Integrantes:
Berlanga Vallejo Ileana Gabriela 1661875
De la Garza Luna Cristian Enrique 1825269
Guillot López Emiliano 1920135
López Reyna Isabel 1621202
Mata Vázquez Natalia Margarita 2075718
Ortiz Rodríguez José Ramon 1825099

Docente: Dra. Katia Jamileth González Lozano

Grupo: 461
San Nicolás de los Garza, N.L
RT PCR
Historia
• David Baltimore y Howard Temin 1970
Retrotranscriptasa aislada Virus de la leucemia murina y del Virus del
sarcoma de rous
• 1971- uso de enzimas para replicar in vitro una secuencia pequeña de ADN
utilizando cebadores
• Kary Mullis 16 de diciembre de 1985

• 1980- Roche a invertido en el desarrollo y la mejora de la tecnología de la

reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• 1991- adquiere los derechos a la PCR

• 1991- desarrolla la PCR con transcripción inversa (RT-PCR

 Reacción en cadena de la polimerasa
con transcriptasa inversa

Retrotranscripción o RT acoplada a la

¿Qué es?
PCR

Determinar el número de moléculas

ARNm

Mide los cambios en el estado basal de

un gen de interés vs un gen de expresión
constante que actúa como control.
Fundamentos

•
Componentes
 Metodología
•
•
•
•

•
Aplicaciones
• Detección de los genes que se expresan en un momento particular
• Examen de las variaciones de los transcritos
• Generación de plantillas de ADNc para su clonación y secuenciación.
• Diagnostico de enfermedades convencionales y genéticas
• Control del tratamiento farmacológico
• Caracterización de organismos (general)
• En las ciencias forenses
• Para el apoyo en la solución de problemas ambientales
RT qPCR
 Historia
•

•
¿Qué es?

•
Fundamento • La qRT-PCR- implica varias etapas

• 1ª ETAPA: OBTENCIÓN, AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DEL mRNA contenido en la célula, mediante

extracción con solventes orgánicos (por ejemplo, derivados del fenol).
 2ª ETAPA: RETROTRANSCIPCIÓN. El mRNA servirá
como plantilla para la acción de la retrotranscriptasa,
que sintetizará moléculas de cDNA.
3ª ETAPA: AMPLIFICACIÓN DEL cDNA: mediantela utilizaciónde oligonucleótidosespecíficos(PRIMERS FORWARD Y
REVERSE) que actuaráncomocebadoresde la acciónde la polimerasa, se amplificaráel cDNA de aquellos genes cuya
expresiónnos intereseanalizar.
• La qRT-PCR se diferencia de la PCR
convencional en varios puntos. El más
importante es que mediante la amplificación
con PCR sólo podemos observar el punto
final. Es decir, podemos observar si hay o no
expresión del gen de interés (CUALITATIVA).
La qRT-PCR nos permite saber cuánto hay de
cada gen estudiado (CUANTITATIVO).
• La línea de base se define como los ciclos de PCR en los
que se acumula una señal fluorescente del reportero
pero que está por debajo de los límites de detección del
instrumento.

• ΔRn es un incremento de la señal fluorescente en cada

punto de tiempo. Los valores de ΔRn se representan en
función del número de ciclos.

• El umbral es un nivel arbitrario de fluorescencia elegido

en función de la variabilidad de la línea base. Una señal
que se detecta por encima del umbral se considera una
señal real que puede utilizarse para definir el ciclo
umbral (Ct) para una muestra. El umbral puede ajustarse
para cada experimento de manera que se encuentre en la
región de amplificación exponencial en todas las
gráficas.

• El Ct se define como el número de ciclo de PCR

fraccionario en el que la fluorescencia del reportero es
mayor que el umbral. El Ct es un principio básico de la
PCR en tiempo real y es un componente esencial para
producir datos precisos y reproducibles.
Componentes
Costo Certifica
ción:
CE, ISO13485

Grupo: Adult and Children

Pantalla Con la exhibición del LCD

LCD:

Product Real Time PCR Machine

Name:

Applicati Hospital, Clinic, Lab

on:

Sample 48 Wells*0.1ml
Block
US$ 10.800,00-13.500,00 / Pieza Capacity:
 Metodología
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https://www.thermofisher.com/mx/es/home/brands/thermo-scientific/molecular-biology/molecular-biology-learning-
center/molecular-biology-resource-library/spotlight-articles/basic-principles-rt-qpcr.html
 Aplicaciones
Análisis de expresióngénica multiplexaciónCuantificac
ión absoluta

Detección de mutaciones

Detección de patógenos

Detección viral

Caracterización de organismosgenéticamente modifica

dos (OGM)

Perfil genético
Referencias