Universidad Central

Programa de Biología
Biología molecular
Prof. Dayana Calderon

​ Integrantes: Daniela Avendaño; Mariana Gutierrez; Josué Avendaño; Mario Acosta;

Sergio Angel Sanchez

TALLER - LABORATORIO DE PCR

● Describa para qué sirve cada uno de los componentes de la PCR

​ Buffer: Solución amortiguadora

​ MgCl2: Cofactor de la polimerasa que influye en la especificidad de la reacción
​ dNTPs: DNA polimerasas van a crear una cadena complementaria a la cadena molde
mediante la incorporación de nucleótidos en forma de dNTPs
​ Primers: Secuencias que delimitan la secuencia blanco que se desea amplificar
​ Taq polimerasa: Una enzima capaz de generar una copia de DNA a partir del DNA
molde
​ ADN: Unidad de información genética a partir de la cual queremos obtener una copia
de un fragmento, es decir, que queremos amplificar.

● Teniendo en cuenta las concentraciones iniciales (stock) y los volúmenes en la

reacción de PCR, calcule la concentración final de todos los reactivos. (No olvide
poner las unidades, volumen final=25µL.
 Universidad Central
Programa de Biología
Biología molecular
Prof. Dayana Calderon

● ¿Cuántas copias del fragmento hay al final del tercer (3) ciclo de una reacción de
PCR? ¿Cuántas de esas copias corresponden al fragmento libre de secuencias
flanqueantes al fragmento?

RRTT/: Se puede detectar que para el 3 ciclo se encuentran 8 copias (Serrato Díaz &
et) del DNA esto ya que por cada ciclo hay el doble que en el ciclo anterior de estas 2
copias serán copias libres ya que el resto de copias tendrán los primers y los otros 6
serán copias segmentos del DNA sin tener los primers.

● Dibuje el proceso para poder responder a estas preguntas.

 Universidad Central
Programa de Biología
Biología molecular
Prof. Dayana Calderon
 Universidad Central
Programa de Biología
Biología molecular
Prof. Dayana Calderon

● ¿En qué consiste el qPCR y cuáles son las ventajas de este tipo de PCR?

La qPCR se caracteriza por monitorear el proceso de la PCR a medida que ocurre. Es

así, que este tipo de prueba consiste en la cuantificación de un fragmento de ADN en
tiempo real para detectar su amplificación mediante el uso de reporteros fluorescentes.
La ventaja de este tipo de prueba radica en un mayor rango dinámico de detección.
También recopila datos en la fase de crecimiento exponencial de PCR, además de
indicar que un aumento en la señal fluorescente es directamente proporcional al
número de amplificaciones generadas. (Thermofisher, s.f).
Por lo anterior, está técnica brinda una serie de datos con gran sensibilidad y
especificidad, evitando contaminaciones por ácidos nucleicos en el laboratorio.

REFERENCIAS

- Fundamentos de la PCR en tiempo real. (s.f). Thermofisher. Recuperado de:

https://www.thermofisher.com/co/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr
-learning-center/real-time-pcr-basics/essentials-real-time-pcr.html
- PCR en tiempo real frente a PCR digital frente a PCR tradicional. (s.f). Thermofisher.
Recuperado de:
https://www.thermofisher.com/co/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr
-learning-center/real-time-pcr-basics/real-time-vs-digital-vs-traditional-pcr.html
- Serrato Díaz, A., Flores, L., Aportela Cortez, J., & Palacios, E. S. (s/f). PCR:
reacción en cadena de la polimerasa. Gob.mx. Recuperado el 4 de abril de 2022, de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf
- Pérez de Castro, A. M. (2011). Reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase
Chain Reaction, PCR).