UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOQUÍMICA Y FARMACIA
BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA

Tema: Clonación acelular: reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Integrantes:
● Vanessa Aguiño Hurtado
● Julio Andrade Ramos
● Carla Domínguez Arreaga
● Henry Reyes Tituana
● Angelo Trujillo Campozano
 RESUMEN
La PCR es hoy día una herramienta imprescindible en los laboratorios de biología molecular e
ingeniería genética. El objetivo de esta técnica es la amplificación directa de un gen o un fragmento de
DNA, presente en muestras muy diversas, sin necesidad de una purificación previa. Cuando el objetivo
es un RNA, puede aplicarse la PCR de forma indirecta, si previamente se sintetiza su DNA
complementario. Se pueden emplear como muestra para hacer PCR homogéneos, extractos crudos de
tejido, sangre completa, mezclas de fragmentos de DNA obtenidos con enzimas de restricción,
muestras resultantes de la extracción y aislamiento de DNA, etc. Las aplicaciones de la PCR son muy
numerosas y variadas. Pueden citarse: clonación acelular de fragmentos de DNA, detección de
secuencias sin purificación previa, preparación de muestras para secuenciación de ácidos nucleicos,
establecimiento de polimorfismos de secuencia, rastreo de mutaciones, tipificación de DNA para
trasplantes, diagnóstico de enfermedades genéticas (incluido el diagnóstico prenatal), determinación de
secuencias específicas de DNA relacionadas con situaciones patológicas definidas, resolución de
problemas forenses o arqueológicos, estudios evolutivos, detección de microorganismos infecciosos,
detección de células tumorales, amplificación de DNA para su posterior clonación celular, etc.
 PRINCIPIO DEL MÉTODO
La PCR es una metodología, resultante de la aplicación práctica de tres
conceptos:

Mediante la aplicación en forma cíclica de estos tres procesos se

consigue un número muy alto de copias del fragmento de ácido nucleico
en un corto espacio de tiempo
ETAPAS DEL PROCESO
CARACTERÍSTICAS
 AUTOMATIZACIÓN
La automatización de la PCR es sencilla y de bajo coste, dado el
carácter cíclico repetitivo del proceso, el empleo de componentes
estables al calor, la necesidad de añadir reactivos únicamente al
comienzo y el desarrollo de sistemas electrónicos para programar
los cambios de temperatura. Al mismo tiempo es imprescindible,
pues sólo mediante la automatización se hace factible la
realización de un número elevado de ciclos y se aumenta la
precisión del proceso. Ello facilita un empleo cada vez más
específico y sensible en el laboratorio clínico. Los instrumentos
diseñados para el desarrollo de reacciones de PCR se denominan
termocicladores y suelen admitir varias decenas de muestras
simultáneas, con volúmenes comprendidos entre 25 y 100 ml.
 VARIANTES DEL MÉTODO

● PCR en tiempo real

● RT-PCR: amplificación de RNA
● PCR con "comienzo en caliente"
● PCR "larga"
● PCR "anidada"
● PCR inversa
● PCR con adaptadores
● PCR asimétrica
 CONCLUSIONES
Mediante el uso de la PCR, una secuencia de ADN se puede amplificar
millones o miles de millones de veces y producirá suficientes copias de
ADN para que se analicen mediante otras técnicas. Por ejemplo, el ADN se
puede visualizar por electroforesis en gel, enviar a secuenciar o
digerir con enzimas de restricción y clonar en un plásmido.
La PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación, y también
tiene aplicaciones prácticas en medicina forense, pruebas genéticas y
diagnósticas. Por ejemplo, la PCR se utiliza para amplificar genes
asociados con trastornos genéticos a partir del ADN de los pacientes (o
de ADN fetal, en el caso de pruebas prenatales). La PCR también puede
utilizarse para detectar el ADN de una bacteria o un virus en el cuerpo
de un paciente: si el patógeno está presente, es posible amplificar
regiones de su ADN de una muestra de sangre o tejido.