LDFB 01

PROCESOS
BIOLÓGICOS Cap. 7 Replicación del
ADN

Equipo Docente de Procesos

Biológicos
 Estructura del ADN
• Elcientífico estadounidense James Watson y el científico británico Francis
Crick, trabajando ambos en Inglaterra, propusieron un modelo para su
estructura que tenía un poder explicativo extraordinario.
• Cadabloque básico del ADN es un nucleótido que consiste en la azúcar
pentosa desoxirribosa, un fosfato, y una de las cuatro bases nitrogenadas.
• Los carbonos en una base se designan con números, pero los carbonos en un
azúcar se distinguen de los de la base por medio de símbolos primos.
• La base nitrogenada está unida al carbono 1´ del azúcar, y el fosfato está unido al
carbono 5´.
• Las bases incluyen dos purinas, adenina (A) y guanina (G), y dos pirimidinas, timina (T)
y citosina (C).
Componentes de los ácidos nucleicos
• El carbono 3´ de un azúcar está unido al 5´ fosfato del azúcar adyacente para
formar un enlace 3´, 5´ fosfodiéster. El resultado es un polímero de longitud
indefinida, con los nucleótidos enlazados en cualquier orden.
• No importa que tan larga pueda ser la cadena, un extremo, el extremo 5´, tiene
un carbono 5´ unido a un fosfato y el otro, el extremo 3´, tiene un carbono 3´
unido a un grupo hidroxilo.
• Cada molécula de ADN consiste en dos cadenas de polinucleótidos
dispuestas en una doble hélice enrollada.
• Las dos cadenas corren en direcciones opuestas, son antiparalelas entre sí.
• Entre adenina y timina se forman dos enlaces de hidrógeno, y tres entre
guanina y citosina.
Apareamiento de bases
 La cantidad de citosina debe ser igual a la cantidad de guanina porque
cada citosina en una cadena debe tener una guanina emparejada en la
otra cadena.
 Cada adenina en la primera cadena debe tener una timina en la segunda
cadena.
 Las secuencias de bases en las dos cadenas muestran el apareamiento de
bases complementarias.

 El modelo de doble hélice sugiere firmemente que la secuencia de bases

en el ADN almacena la información genética y que esta secuencia se
relaciona con las secuencias de aminoácidos en las proteínas.
REPLICACIÓN DEL ADN
 Replicación del ADN
• Dos características evidentes y distintivas del modelo de Watson y Crick
hicieron parecer factible que el ADN es el material genético.
• La primera ya se ha mencionado, es el hecho de que la secuencia de bases
en el ADN puede portar información codificada.
• La segunda hace referencia en el modelo a la forma en que la secuencia de
los nucleótidos del ADN podría ser copiada exactamente, en un proceso
conocido como la replicación del ADN.
• El
modelo sugirió que debido a que el par de nucleótidos entre sí se
complementan, cada cadena de la molécula de ADN podría servir como
una especie de guía o plantilla para la síntesis de la cadena opuesta.
• Simplemente sería necesario que los enlaces de hidrógeno entre las
dos cadenas se rompan y las dos cadenas se separen.
• Cada cadena de la doble hélice se podría aparear con los nuevos
nucleótidos complementarios para sustituir a su par faltante.
• Elresultado sería dos dobles hélices de ADN, cada una idéntica a la
original y que consiste en una cadena original de la molécula
progenitora y una cadena complementaria recién sintetizada.
• Estetipo de copia de información se denomina replicación
semiconservativa.
Meselson y Stahl (1958)
• ADN marcado
• 15N→ pesado
• 14N→ ligero (más abundante),

• Vieron con se comportaba al

duplicarse estudiando la densidad.

• Proceso semiconservativo
• Los primeros investigadores necesitaban descartar otras posibilidades.
• Con la replicación conservativa ambas cadenas de ADN progenitoras podrían
permanecer juntas, y las dos cadenas recién sintetizadas podrían formar una
segunda doble hélice.
• Como tercera hipótesis, las cadenas progenitoras y las recién sintetizadas
podrían llegar a mezclarse al azar durante el proceso de replicación, esto es, la
replicación dispersiva.
• Aunque la replicación semiconservativa por apareamiento de bases parece
simple y directa, el proceso real está altamente regulado y requiere de una
“máquina de replicación”, que contiene muchos tipos de moléculas de
proteínas y enzimas.
• La replicación del ADN comienza en sitios específicos de la molécula del
ADN, llamados los orígenes de replicación, donde se desenrollan pequeñas
secciones de la doble hélice.
• Las ADN helicasas son enzimas desestabilizadoras de la hélice que se unen
al ADN en el origen de replicación y rompen los enlaces de hidrógeno,
causando la separación de las dos cadenas.
• Una proteína SSB o ligante de ADN monocatenario, realiza la unión de las
cadenas simples de ADN y las estabiliza, lo que impide la formación de una
nueva doble hélice hasta que las cadenas terminan su replicación.
REPLICACIÓN DEL ADN
• Proceso semiconservativo:
• “se originan dos moléculas de ADN, cada una de ellas
compuesta de una hebra de el ADN original y de una hebra
complementaria nueva. En otras palabras el ADN se forma
de una hebra vieja y otra nueva. ”

• Eucariotas: fabricas de replicación→ maquinaria de

traducción en compartimento nucleares o nucleoides.
• Procariotas: fabricas de replicación → asociada a la
membrana celular.
• Con el fin de reducir tal tensión, las enzimas llamadas topoisomerasas
producen rupturas en las moléculas de ADN y después se vuelven a juntar las
cadenas, aliviando la tensión y evitando eficazmente el superenrollamiento y
la formación de nudos durante la replicación.
• Le dan a la replicación del ADN una configuración más relajada.
• Las enzimas que catalizan la unión de las subunidades sucesivas de
nucleótidos se conocen como ADN polimerasas.
• Estas enzimas agregan nucleótidos sólo al extremo 3´ de una cadena
polinucleotídica creciente, y esta cadena se debe complementar con la cadena
molde o plantilla de ADN.
• Debido a que la cadena de polinucleótido se alarga, por la unión del grupo
fosfato 5´ de la siguiente subunidad del nucleótido al grupo hidroxilo 3´ del
azúcar en el extremo de la cadena existente, la nueva cadena de ADN
siempre crece en la dirección 5´ 3´.
• Síntesis del ADN se da en el extremo 3´
• Dirección 5´→ 3´
• Ataque nucleofílico del 3´-OH al fosfato
α del dNTP
• Catalizado por enzima: ADN polimerasa
• La síntesis de ADN procede sólo en la dirección 5´3´,lo que significa
que la cadena que se está copiando se está leyendo en la dirección 5´
3´.
• Por
lo tanto, podría parecer necesario copiar una de las cadenas
comenzando en un extremo de la doble hélice y copiar la otra cadena
comenzando en el extremo opuesto.
• Dos moléculas idénticas de ADN polimerasa catalizan la replicación.
• Debido a que esta cadena se sintetiza de forma suave y continua, se
conoce como la cadena líder.
• La otra se conoce como cadena retrasada, debido a que sólo se pueden
sintetizar piezas cortas llamadas fragmentos de Okazaki.
• La
ARN primasa periódicamente cataliza la síntesis de un cebador de
ARN en la cadena retrasada.
• Los fragmentos se unen entonces por acción de la ADN ligasa, una enzima que une
el extremo 3´ hidroxilo de un fragmento de Okazaki al extremo 5´ fosfato de la
cadena de ADN que está junto a ella, formando un enlace fosfodiéster.
• Cuando se separa la doble cadena de ADN, forma dos tenedores de
replicación, y la molécula se replica en ambas direcciones desde el origen de
la replicación.
• Durante la replicación, las ADN polimerasas confrontan cada
nucleótido recién agregado con el molde o plantilla de nucleótidos.
• Cuando se encuentra un error en el apareamiento de bases, la ADN
polimerasa elimina inmediatamente el nucleótido incorrecto e inserta
el correcto.
• Cuando los errores se han quedado sin corregir por las actividades
normales de reparación de la ADN polimerasa durante la replicación del
ADN, las células hacen uso de otros mecanismos de reparación.
• En la reparación de parejas de bases incorrectas, enzimas especiales
reconocen los nucleótidos apareados incorrectamente y los eliminan;
las ADN polimerasas entonces completan los nucleótidos que faltan.
MECANISMO GENERAL DE
REPLICACIÓN
SINTESIS DEL ADN EN PROCARIOTAS
Control del superenrollamiento del ADN
• Topoisomerasas: reducen la torción (fuerza de rotación).
• Tipo I: roturas transitorias de cadena individual.
• Tipo II : roturas transitorias de doble cadena.
Desenrrollamiento del ADN
• Sitios de inicio → OriC
• Oric reconocidos por Dna A
• Dna recluta a Helicasa
• Helicasa = Dna B
• Forman una horquilla de
replicación
• SSB → proteínas que se unen al
ADN simple y lo mantienen
estable.
Síntesis de primers (cebadores)
• En procariotas los primers se
sintetizan por la enzima primasa
que es una ARN polimerasa
• El primer es un pequeño fagmento
de ARN
• La ADN polimersasa no puede
reconcoer hebra simple es por esto
que se deben de sintertizar los
primers.
• Primosoma: primasa + proteínas
axiliares.
SINTESIS DEL ADN
• Dirección de 5´→3´
• Una hebra continua y una discontinua con
fragmantos de Okazaki
• Catalizada por la ADN pol III
• ADN Pol III se une a otras proteínas para
formar una holoenzima
• Α, е, θ→ CENTRO
• β → PROTEINA EN ENGANCHE DELIZANTE O
PINZA
• γ → CARGADOR DE PINZA
Replisoma: dos copias de Pol III,
primosoma y proteínas de
senrrollamonto
 γ

OTRO β
MODELO
Unión de fragmentos de ADN

Fragmentos ARN eliminados con Pol I y al mismo

tiempo lo reemplaza por ADN

El espacio resultante lo rellena la enzima ligasa

Finalización
• ADN tus y topoisomerasa II
SINTESIS DEL ADN EN EUCARIOTAS
Tipos de polimerasas EUCARIOTAS
 (alfa)  (beta)  (gamma)  (delta)  (épsilon)

Núcleo Núcleo Mitocondria Núcleo Núcleo

Síntesis ADN en Síntesis ADN Síntesis ADN en Síntesis ADN en

ambas cadenas, mitocondrial ambas cadenas ambas cadenas
se une a la (retrasada) (líder)
primasa

Reparación ADN Reparación Exonucleasa Reparación ADN Reparación ADN

ADN 3’→5’ (actividad y Exonucleasa y Exonucleasa
correctora) 3’→5’ (actividad 3’→5’ (actividad
correctora) correctora)

2000 pb/min
Control del superenrollamiento del ADN
• Topoisomerasas: reducen la torción (fuerza de rotación).
• Tipo I: roturas transitorias de cadena individual.
• Tipo II : roturas transitorias de doble cadena.
Síntesis de primers (cebadores)
• En eucariotas los primers se
sintetizan por la enzima
primasa+polimerasa α

• El primer es un pequeño fagmento

de ARN

• La ADN polimersasa no puede

reconcoer hebra simple es por esto
que se deben de sintertizar los
primers.
SÍNTESIS
DEL ADN
RFC
Polimerasa ε

Polimerasa δ
PCNA
Unión de fragmentos de ADN

Fragmentos ARN eliminados con ARNasa (Dna 2 y

FEN1) y la polimerasa δ

El espacio resultante lo rellena la enzima ligasa

 Finalización y telomeros

• En el extremo de la cadena retrasada el cromosoma se acorta ya que un

fragmento de okazaki quedará sin replicar, al no existir un iniciador al final de
la cadena.
Telómeros y telomerasa
Debido a que las ADN polimerasas sólo extienden los cebadores en sentido
de 5' a 3', son incapaces de copiar los extremos 5' de las moléculas lineales de ADN.
Como consecuencia, se requieren mecanismos especiales para replicar las
secuencias terminales de los cromosomas lineales de las células eucariotas.

Estas secuencias (telómeros) se

componen de repeticiones en tándem
de secuencias simples de ADN. Son
replicadas por acción de una enzima
única llamada telomerasa, que es capaz
de mantener
a los telómeros catalizando de su
síntesis en ausencia de una hebra molde
de ADN.

La telomerasa es una transcriptasa inversa

La utilización de este ARN como molde
permite a la telomerasa extender el extremo 3'
del ADN cromosómico una unidad de
repetición detrás de longitud original.
FIN