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Estructura y funcin del ADN

M.C. NORARIZBETH LARA FLORES

1869 Friedrich Miescher descubre lo


que hoy conocemos como ADN

Experimento de Griffith (1920)

Streptococcus pneumoniae
*Cepa S
*Cepa R

Qu significaban los experimentos?


Una hiptesis era que las bacterias vivas
haban adquirido molculas de informacin
gentica provenientes de las bacterias
muertas.

Las molculas codificaban las


instrucciones para formar cpsulas; por
lo tanto, transformaban a las bacterias
desnudas en bacterias encapsuladas.

La molcula de la
transformacin era el ADN?

1944 Oswald Theodore Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty aslan ADN como
material gentico

aislaron ADN de bacterias


encapsuladas, las mezclaron con
bacterias desnudas vivas y produjeron
bacterias encapsuladas vivas.
enzimas que destruyen protenas.
Dichas enzimas no afectaron la
capacidad de transformacin de las
muestras de ADN; por otro lado, al
tratar muestras con enzimas que
destruyen el ADN, se impidi la
transformacin.

Colin MacLeod, Maclyn McCarty, Detlev Wulf Bronk,


Theodosius Dobzhansky, and Wendell M. Stanley at
the Avery Memorial Gateway dedication ceremony

Hershey & Chase

Lab rats ... James Watson, above left, and Francis Crick weren't
going to let Rosalind Franklin get in the way of scientific glory.
Photo-illustration: Harry Afentoglou

Rosalind Franklin
Durante 50 aos, la historia de la ciencia ha
sostenido que los descubridores de la doble hlice
del ADN fueron Crick y Watson. En los ltimos
aos, las investigaciones han sacado a la luz la
labor de Rosalind Franklin, sin cuyas radiografas
sus colegas no hubieran llegado tan rpido a la
meta. Hoy se puede decir que si stos son los
padres del hallazgo de la estructura helicoidal
de la molcula, Franklin merece ser considerada la
madre.

El ADN de los
cromosomas se compone
de dos cadenas enrolladas
una a la otra en una doble
hlice.
Los azcares y fosfatos que
unen un nucletido al
siguiente forman el
esqueleto en cada lado de
la doble hlice.
En tanto que las bases de
cada cadena se aparean en
el centro de la hlice.

Solo pares especficos de


bases, llamados pares de
bases complementarias, se
pueden unir en la hlice
mediante enlaces de
hidrgeno: adenina con
timina y guanina con
citosina.

COMPOSICIN DEL ADN


La molcula de ADN est
compuesta de subunidades,
llamadas nucletidos, unidos
en cadenas largas.
Cada nucletido consta de un
grupo fosfato, un azcar de
cinco carbonos, la
desoxirribosa y, una base
nitrogenada.

Las unidades estructurales de los cidos nucleicos se


denominan nucletidos

Bases Nitrogenadas

Propiedades de las bases


Carcter levemente bsico.
Solubilidad escasa en agua.
Posibilidad de formas
tautomricas.
Tipo de isomera que hace
que una sustancia pueda
existir en varias formas con
diferente disposicin
estructural de sus tomos

Cmo estn organizados


los nucletidos en la
molcula de ADN ?

MODELO WATSON Y CRICK DEL ADN

Fosfatos van
unidos al azcar
en el C-5 y el C-3

Hebras
antiparalelas

Punta 3 libre
Punta 5 libre

ACIDOS NUCLEICOS

DIMENSIONES
DEL ADN

ESTRUCTURA DEL CROMOSOMA EUCARIOTICO

REPLICACIN DEL ADN

La replicacin del ADN


Es el proceso mediante el cual la molcula de ADN hace copias de
s misma (cromosoma).
En el ncleo hay muchos nucletidos libres que son los bloques
de construccin del nuevo ADN .

La enzima que lleva a cabo la


replicacin del ADN es la ADN
polimerasa III:
Slo aade nucletidos en la
direccin 5-3.
Necesita para poder empezar a
copiar y unir nucletidos un molde
de ADN.
Utiliza nucletidos trifosfato.

20 kb

La replicacin siempre se
produce en sentido 5' 3',
siendo el extremo 3'-OH libre
el punto a partir del cual se
produce la elongacin
del ADN
Fragmentos de Okazaki
longitud entre 100 y 400
nucletidos.

REPLICACIN
Romper puentes de hidrgeno ---enzimas helicasas.
Eliminar la tensin----topoisomerasas.
Evitar que las dos hebras vuelvan a reunirse y formar los puentes de
hidrgeno----protenas SSB.

Estructura tridimensional de una helicasa: un hexmero con


seis sitios de enlace al ATP. La hidrlisis secuencial de
estos ATPs permite el desenrrollamiento de la doble hlice.

Sintetiza un corto fragmento de ARN de unos 10 nucletidos denominado


primer que acta como cebador---ARN polimerasa (primasa).
A partir de este cebador comienza a sintetizar en direccin 5- 3 una hebra
de ADN partir de nucletidos trifosfato---ADN polimerasa III.
Hebra continua y discontinua.

Discontinua -ARN
polimerasa sintetiza unos
40 nucletidos de ARN en
un punto que dista unos
1.000 nucletidos de la
seal de iniciacin. A
partir de ellos la ADN
polimerasa III sintetiza unos
1.000 nucletidos de ADN,
formndose un fragmento de
Okazaki.
ADN polimerasa I
(exonucleasa y polimerasa)
retira los segmentos de
ARN, y luegorellena los
huecos con nuceltidos de
ADN.
ADN ligasa unir los
extremos

EL ADN es la molcula que permite perpetuar la vida:


REPLICACIN DEL ADN
Hebra molde

Hebra lder

Hebra retardada

El ADN de los eucariontes


est fuertemente asociado a
los octmeros de histonas
(nucleosomas)
Duplicacin de histonas.

CORRECCIN DE ERRORES
La actividad de la ADN polimerasa debe ser
exacta, rpida y fiel------ fidelidad de la
duplicacin del ADN.
Se comete 1 error de apareamiento por cada
10 millones de bases.
Genoma humano que contiene 3 x 109 pares
de bases.
300 equivocaciones en cada duplicacin
teniendo en cuenta que durante el
desarrollo embrionario a partir del zigoto
el genoma humano se duplica casi mil
millones de veces, trescientos mil billones
de errores.

Maquinaria enzimtica que


corrige los posibles errores
cometidos por el ADN polimerasa
en ADN recin sintetizados
(correccin postreplicativa). 1 error
por cada diez mil millones de
bases (1010).
Complejo multienzimtico que
detecta el nucletido mal
emparejado, lo elimina y regenera
la secuencia.

Endonucleasa que corta el


segmento en el lugar donde se
encuentra el error.
ADN polimerasa I rellena el
hueco utilizando como molde la
cadena original, y por ltimo una
ligasa unir los fragmentos.

Estructura de un cromosoma

Telmeros

DNA no codificante.
Son secuencias cortas de 5-8 pb, ricas en G
Localizadas al final de los extremos de los cromosomas
Son necesarios para el mantenimiento y la estabilidad de los cromosomas.
Durante la replicacin debido a que al eliminar el cebador de los fragmentos
de Okazaki del extremo 5' de la cadena retardada del telmero del nuevo
cromosoma lineal se produce un hueco que no puede ser rellenado por accin
de la DNA polimerasa, puesto que solo funcionan en direccin 5' 3.
Se acortan los telmeros a razn de 100 a 150 nucletidos en cada proceso
replicativo.

La telomerasa es una Ribonucleoprotena con actividad DNA polimerasa.


El componente RNA acta como molde para la sntesis de las secuencias
telomricas de DNA que extienden el extremo 3de la hebra molde.

Tipos de dao al ADN


Mecanismos endgenos:

1.
2.

3.
4.

Prdida de bases tipo purinas por ruptura espontnea


del enlace con el azcar 5000/da/clula humana
Molculas con oxgenos reactivos atacan los anillos de
las bases nitrogenadas
La ADN polimerasa puede incorporar bases
equivocadas en la replicacin
Errores en la replicacin o recombinacin provocan
fracturas en el ADN

Agentes extracelulares

1.

Radiaciones ionizantes: rayos gamma y rayos X


causan rupturas en la doble hlice

2.

Luz UV causa la formacin de los dmeros de timina

3.

Qumicos ambientales

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

Hebra molde
Transcripcin

Traduccin

TRANSCRIPCIN

Transmisin de la informacin
La transmisin se lleva a cabo principalmente
gracias a la existencia de los cidos ribonucleicos
o ARNs
ARN mensajero (lineal de hebra simple)
ARN de transferencia
ARN ribosomal
Y a las ARNs polimerasas

URACILO sustituye a la TIMINA

La secuencia correspondiente a una unidad de


transcripcin en el ADN se transcribe en una hebra
complementaria de ARN, llamada transcrito
primario, a partir del cual, por modificaciones posttranscripcionales , se origina el ARN mensajero

ATENCION:
Grupo hidroxilo
en la posicin 2

Ribonucletido

PROCARIOTES

EUCARIOTES

Todo el DNA contenido en una


nica molcula

Genoma dividido en varios o


muchos cromosomas (1-190)

El cromosoma bacteriano se
encuentra libre en el citosol

Los cromosomas se encuentran


dentro del ncleo formando la
cromatina (DNA-protena)

Haploides (una sola copia del


material gentico)

Mayora diploides (dos copias de


un cromosoma)

Transcripcin y traduccin
acopladas

Transcripcin dentro del ncleo y


traduccin en el citoplasma

No tienen intrones

Intrones y exones

CROMATINA
Es un complejo DNA-protenas
Protenas
Histonas pequeas, bsicas, ricas en lisina y
arginina
No histonas polimerasas, protenas
reguladoras, etc.

TIPOS DE HISTONA
HISTONA
H1

FUNCION
Asociacin con el DNA
ligador

H2A

H2B
H3
H4

Dos de cada histona


forman el octmero que
forma el nucleosoma

NUCLEOSOMA
Es la estructura de repeticin que forma la
cromatina
146pb de DNA envuelven un octamero de dos
moleculas de H2A, H2B, H3 y H4

Los nucleosomas se encuentran unidos por DNA


llamado DNA internucleosomico o ligador que se
encuentra unido a la H1

TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS
Es un proceso de mucha discriminacin
(segn el tejido o etapa del desarrollo sern
los genes que se van a transcribir)
La maquinaria de la transcripcin debe tener
en cuenta la compleja estructura de la
cromatina eucariota
La RNA polimerasa requiere de factores
adicionales llamados factores de
transcripcin para iniciar la transcripcin

Tiene que haber un procesamiento complejo


del mRNA que permita escindir los intrones
del mensaje y transportar la molcula al
citoplasma

IMPORTANTE.
Los genes estn fragmentados en zonas sin
sentido o intrones y zonas con sentido o
exones. Antes ha de madurar y eliminar los
intrones.

INTRONES
Dentro de la mayora de los genes eucariotas
existen secuencias que no se expresan en
cadenas polipeptdicas: INTRONES
Los intrones se alternan con los exones (regiones
que si se expresan en polipptidos)

RNA POLIMERASA II
TRANCRIBE LOS GENES ESTRUCTURALES, ES
DECIR, LOS QUE SE TRADUCEN A PROTEINAS
Contiene mltiples subunidades

Intervienen al menos 7 factores de transcripcin: TFIIA,


TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH y TFIIJ
El factor critico es TFIID que se une a la caja TATA que
es el equivalente eucariota a la regin -10

FACTOR DE
TRANSCRIPCION

FUNCION

TFIID

Reconoce la caja TATA

TFIIA

Estabiliza el complejo entre


TFIID y el DNA
Recluta a la RNApol II y
TFIIF

TFIIB

TFIIF
RNA pol II
TFIIE
TFIIH

Ayuda a que la pol II


reconozca el promotor
Cataliza la sntesis de RNA,
recluta a TFIIE
Recluta a TFIIH y regula la
actividad helicasa de TFIIH
Desenrolla la regin
promotora

ELEMENTOS DEL DNA


Secuencias de DNA que unen un factor de
transcripcin
Promotores
Potenciadores: secuencias alejadas del promotor
que interactan con protenas que pueden inducir
la transcripcin

TRANSCRIPCIN

La ARN polimerasa
se activa cuando
forma un complejo
con los factores de
transcripcin o
elementos
trans. La interaccin
de estos entre s, y con
las secuencias
reguladoras del ADN
(los factores cis) es la
que determina donde,
cuando y con qu
rapidez ocurre la
transcripcin

TATAA
A
D

D
A

Inicio de la
transcripcin

RNApol II

B
RNApol II

B
RNApol II

E, F

Inicio de la
transcripci
n
B
RNApol IIE, F

Desenrolla el promotor y empieza la transcripcin

Las protenas del potenciador se unen a las protenas del


promotor induciendo la transcripcin

En la trascripcin de eucariontes se distinguen las siguientes


fases:
a) Iniciacin: la ARN polimerasa II se une a una zona del ADN
llamada promotor (posee secuencias CAAT y TATA)

b) Elongacin: la sntesis continua en sentido 5-3. Al poco se


aade una caperuza (metil-guanosn trifosfato) al extremo 5.
c) Finalizacin: parece que est relacionado con la secuencia
TTATTT. Ahora interviene un poli-A polimerasa que aade
una cola de poli-A al pre-ARNm (ARNhn).
d) Maduracin: se produce en el ncleo y la hace un enzima
llamada RNPpn, que elimina los nuevos intrones
formados.Posteriormente las ARN ligasas empalman los
exones y forman el ARNm.

EL PROBLEMA DE LA INICIACION
La estructura cromatnica plantea el problema
de cmo pueden unirse los factores de
transcripcin al DNA
Se genera lugares hipersensibles en el DNA:
regiones sin nucleosomas que permiten la unin
de protenas a los elementos del DNA. Esto es
probablemente mediado por protenas que
remodelan los nulceosomas

EL PROBLEMA DE LA TRANSCRIPCION
ACTIVA
La estructura cromatnica plantea el problema
de cmo puede pasar la polimerasa a travs de
una formacin de nucleosomas
Parece que los nucleosomas son desplazados
temporalmente pero es un MISTERIO.

TERMINACION DE LA TRANSCRIPCION
La pol II sigue transcribiendo mas all de la seal de
terminacin pasando a travs de varias regiones
AATAAA.
El pre-mRNA que transporta esta seal en forma de
AAUAAA se rompe por una endonucleasa que reconoce
la seal y corta entre 11 y 30 residuos hacia el lado 3
Luego se aade una cola poli-A de hasta 200pb mediante
una polimerasa especial que no esta dirigida por un
molde

FORMACION DE LA CAPERUZA
La 1era modificacin y se
produce en el ext 5.
Se aade un residuo GTP
en una orientacin
inversa
Este GTP junto con los
dos primeros nucletidos
de la cadena forman lo
que denominan caperuza
que servir para colocar
el mRNA en el ribosoma

proteger del ataque de las


exonucleasas, facilitar el transporte
ncleo-citoplasma, y el anclaje del
ARNm al ribosoma

confiere estabilidad y ayuda en la traduccin

PROCESAMIENTO DEL RNA MENSAJERO


El mRNA se produce en el ncleo y debe
transportarse hasta el citosol para la traduccin

El producto inicial contiene todos los intrones


que deben ser eliminados antes de la traduccin

CORTE Y EMPALME
Luego de la formacin de la caperuza hay que
eliminar los intrones
El pre-mRNA forma complejos con
ribonucleoproteinas nucleares pequeas
(snRNPs), que a su vez estan formadas por
snRNA.

Este complejo pre-mRNA-snRNPs se llama


ESPLICEOSOMA

CORTE Y EMPALME
Al formar el espliceosoma , los snRNA
reconocen y se unen a lugares de corte y
empalme intron-exon

CORTE Y EMPLAME ALTERNATIVO


Algunos transcritos gnicos pueden cortase y
empalmarse de distintas formas de manera que
se incluya o excluya determinados exones
dependiendo del tejido o de la etapa del
desarrollo

En lugar de que haya distintos genes que se


expresen en diferentes tejidos , se emplea un
mismo gen pero con patrones de corte y
empalme diferentes

TRADUCCIN

Elementos que intervienen en la


traduccin
RNA-m, RNA-t.
Ribosomas.
Aminoacil RNA-t sintetasa, translocasas,
peptidasas.
GTP, factores de iniciacin y terminacin.
Aminocidos.

RNA-mensajero (RNA-m): es el encargado de transportar la


informacin gentica desde el ncleo hasta los ribosomas con
el fin de que pueda ser expresada en forma de protenas.
RNA-ribosmico (RNA-r): forma parte esencial de las dos
subunidades que constituyen los ribosomas.
RNA-transferente (RNA-t): juega un papel fundamental
transportando a los aminocidos hasta los ribosomas en el
orden correcto en que deben unirse para formar una protena
determinada, segn la informacin gentica.

Aspectos generales
Bsicamente se podra definir como el proceso mediante el cual
la informacin contenida en el ADN se ejecuta a travs de las
protenas.
Para ello requiere la participacin conjunta y coordinada de
macromolculas: ARNm, ARNt, ribosomas y muchas protenas
diferentes.

El ARNm se traduce en sentido 5-3.


Las protenas son sintetizadas desde el grupo amino hacia el
carboxilo por la adicin secuencial de aminocidos al extremo
carboxilo de la cadena polipeptdica.

RIBOSOMA EUCARIOTE

60S

40S

ARNt

BRAZO ACEPTOR
En el extremo 5' es donde se
unir el aminocido que debe
ser transportado hasta el
ribosoma.
BRAZO AMINOACIL RNA-t
SINTETASA o TFIC
Interacciona con la enzima
que va a unir al RNA-t con su
aminocido especfico.
BRAZO ANTICODN.RNA-t
se une a un aminocido
especfico, segn la secuencia
de cada codn del RNA-m.

ARN de transferencia activado:


cargado con el aminocido
correspondiente

Activacin de
aminocidos:
Cada RNA-t busca a su aminocido
especfico segn el triplete de su
anticodn y se une a l por la
accin de una enzima especfica
llamada aminoacil RNA-t
sintetasa, que une al
aminocido con su RNA-t en el
brazo aceptor, gastndose una
molcula de ATP. De este modo,
un gran nmero de
transferentes se encuentran
unidos a su aminocido antes
de iniciarse la traduccin.

CODIGO
GENETICO
ARNm

RNAm

Iniciacin

El RNA-m llega hasta el ribosoma que est separado en sus dos subunidades y se une a la subunidad menor; a
continuacin se une la subunidad mayor. En los ribosomas existen dos lugares en los que pueden caber
transferentes, el llamado LUGAR P (= peptidil) y el LUGAR A (= aminoacil). El RNA-m se une de tal forma que
el primer codn se coloca en el lugar P. Este primer codon siempre es el mismo en todos los RNA-m, es el
AUG ledo desde el extremo 5', que codifica para el aminocido Metionina, con el que se inician todos los
procesos de traduccin celular. A continuacin llega hasta ese lugar P un RNA-t con el aminocido Metionina,
y al lugar A llega otro RNA-t con el siguiente aminocido que corresponda, segn las bases del segundo
triplete. En ese momento una enzima une ambos aminocidos mediante un enlace peptdico y todo el complejo
se desplaza un lugar hacia el primer codn, de tal manera que ahora el dipptido se coloca en el lugar P
(peptidil) y queda libre el lugar A (aminoacil).

TRADUCCIN
ARN --- Protena

Elongacin
Al quedar libre el lugar aminoacil se acerca un nuevo RNA-t, segn la
secuencia de su anticodn, trayendo un nuevo aminocido, volviendo
a crearse un enlace peptdico y repitindose el desplazamiento del
complejo. Estos procesos se repiten siempre que el codn que aparece
en el lugar A tenga sentido.

Cuatro monmeros de aminocidos

Reaccin de
condensacin

Polipptido

Enlace peptdico catalizado por el complejo enzimtico localizado en el ribosoma

Estructura primaria
(Secuencia lineal)

Residuos de los distintos aminocidos

Estructura secundaria

Estructura terciaria

(forma adoptada espontneamente)

(Forma tridimensional: globular,


tubular, como una rueda, etc.)

Las protenas sufren transformaciones post-traduccionales

Estructura cuaternaria: combinacin de monmeros

Proteoma
Es el set de genes que codifican para protenas
Distribucin por su funcin en el GH:

Procesos ADN (replic, trans, trad.)


Metabolismo
Divisin celular
Defensa
Regulacin y seales
Estructura
Funcin desconocida

22%
17%
12%
12%
12%
8%
17%