TEMA 4_ RECOMBINACIÓN Y TRANSPOSICIÓN

1. RECOMBINACIÓN
Generación de nuevas combinaciones de fragmentos de ADN

El proceso de entrecruzamiento entre homólogos depende de la

rotura y unión de las cadenas de ADN, y provoca el intercambio
de información genética entre moléculas de ADN.

El intercambio genético en posiciones equivalentes a lo largo de

dos cromosomas con una homología sustancial en su secuencia
de ADN se denomina recombinación generalizada u homóloga.
Tb se pueden producir gametos recombinantes cunado los genes no
están ligados

Hay varios modelos que intentan explicar la recombinación homóloga. Uno de estos modelos es el MODELO
DE HOLLIDAY

Se inicia con dos dúplex de ADN emparejados u homólogos, en cada uno de los cuales una endonucleasa
introduce un corte en una de las cadenas en posiciones idénticas. Los extremos de cadena internos
producidos por estos corte se desplazan y, posteriormente, se emparejan con sus complementos del dúplex
opuesto. A continuación, una ligasa sella los extremos sueltos, formando dúplex híbridos denominados
moléculas de ADN heterodúplex, que se mantienen unidas mediante una estructura cruzada. La posición de
este cruce puede desplazarse por el cromosoma, mediante un proceso denominado desplazamiento del
punto de intersección, que ocurre como consecuencia de un efecto cremallera, a medida que los enlaces de
H se rompen y luego se vuelven a formar entre las bases complementarias de las cadenas desplazadas de
cada bucle. Esta migración produce un incremento en la longitud del ADN heterodúplex en ambos
homólogos.
Si los dúplex se doblan, y la parte inferior mostrada en la figura gira 180º , se forma una estructura
intermediaria plana denominada forma X- o estructura de Holliday. Si ahora una endonucleasa corta las dos
cadenas en homólogos opuestos que previamente no estaban implicadas en el intercambio, y se produce
una ligación, se crean dos dúplex recombinantes.

MODELO DEL CORTE DE DOBLE CADENA

En estos modelos, las endonucleasas eliminan nucleótidos en el

punto de rotura, creando colgantes 3' en cada cadena. Una de
las cadenas rotas invade la doble hélice intacta del otro
homólogo y ambas cadenas se alinean con el homólogo intacto.
Entonces, el proceso de síntesis encargado de reparar el ADN
rellena todos los huecos y se forman dos uniones de Holliday.
Una serie de separaciones y ligaciones a cargo de la nucleasa
finalizan el intercambio. El resultado final es el mismo que en
nuestro modelo original: se produce un intercambio genético
durante el entrecruzamiento en las tétradas meióticas.
Se cree que un mecanismo similar se produce cuando las células reparan las roturas de doble cadena en los
cromosomas.
SZOSTAK (modelo de corte de doble cadena)
 PROTEÍNAS IMPLICADAS EN E. COLI: RecBCD y RecA

Como sucede con la replicación de ADN, los procesos implicados en la recombinación del ADN requieren de
la actividad de numerosas enzimas y otras proteínas. Las mutaciones en los genes que codifican estas
proteínas pueden causar defectos en la recombinación, así como en la reparación y la replicación del ADN.
Una de las proteínas fundamentales implicadas en la recombinación en E. coli es la proteína RecA. Esta
molécula fomenta el intercambio de moléculas recíprocas de ADN de cadena sencilla.
Además, RecA también intensifica la formación de enlaces de hidrógeno durante el desplazamiento de las
cadenas, iniciando así la formación del heterodúplex. Las proteínas RecB, RecC y RecD pueden separar
cadenas de ADN y ayudar a desespiralizar el dúplex. Hay otras proteínas implicadas en el desplazamiento del
punto de intersección y en la resolución de las estructuras de Holliday.
PROTEÍNAS IMPLICADAS EN LEVADURAS:

- Spo11: rotura de doble cadena

- Rad51: formación de estructura de Holliday y migración de la rama
- Yen1: resolvasa

Otras proteínas que partipan: proteínas de unión de cadena sencilla, ligasas, ADN pol, topoisomerasas
2. CONVERSIÓN GÉNICA E INTERCAMBIO DE MARCADORES FLANQUEANTES

La conversión génica se caracteriza por un intercambio genético no recíproco entre dos genes ligados muy
próximos. Por ejemplo, si cruzáramos dos cepas de Neurospora llevando cada una de ellas una mutación
diferente (a+ X + b), la recombinación recíproca entre los genes produciría parejas de esporas de los
genotipos + + y ab. Sin embargo, un intercambio no recíproco produce solo un par, sin el otro.
Trabajando con mutantes de piridoxina, Mitchell observó diversas aseas que contenían pares de esporas con
el genotipo + + , pero no con el producto recíproco (ab). Debido a que la frecuencia de estos sucesos era más
alta que la tasa de mutación predicha y por tanto no podía justificarse por la mutación, se denominaron
conversiones génicas. Se denominaron así porque parecía que, de algún modo, un alelo se había
«convertido» en otro, habiéndose producido también un intercambio genético. Se hicieron descubrimientos
similares al estudiar otros hongos. Actualmente se considera que la conversión génica es una consecuencia
del proceso de recombinación del ADN.

EMPAREJAMIENTOS ERRÓNEOS Y CONVERSIÓN

Si las dos hebras de un heterodúplex provienen de cromosomas con alelos diferentes habrá un mal
apareamiento de bases

Durante la formación del heterodúplex, se produce un mal emparejamiento de bases en uno de los
homólogos que se recombinan (debido a la presencia de un alelo mutante). Durante la reparación por
escisión, se elimina uno de los dos emparejamientos erróneos y se sintetiza el complementario. En un caso,
se conserva el par de bases mutante. Tras quedar incluido en una espora recombinante, se mantendrá el
genotipo mutante. En el otro caso, el par de bases mutante es convertido a la secuencia silvestre. Después
de quedar incluido en una espora recombinante, se expresará el genotipo silvestre, dando lugar a una
proporción de intercambio no recíproco.
FENÓMENOS OBSERVADOS EN TÉTRADAS AISLADAS EN HONGOS

La conversión génica ha ayudado a explicar otros

fenómenos genéticos enigmáticos en hongos. Por
ejemplo, cuando se estudian los alelos mutante y
silvestre de un solo gen en un cruzamiento, las aseas
deberían producir un número igual de esporas silvestres
y mutantes. Sin embargo, algunas veces se observan
aseas excepcionales con proporciones de 3:1 o 1:3.

El entrecruzamiento y la conversión génica

son eventos independientes

RECOMBINACIÓN ENTRE SECUENCIAS REPETIDAS

RECOMBIANCIÓN ESPECÍFICA DE SITIO: INTEGRACIÓN Y ESCISIÓN DE PROFAGOS

MECANISMO DE INTEGRACIÓN DE
 SISTEMAS DE RECOMBINACIÓN ESPECÍFICA

Algunos de estos sistemas se pueden usar como herramientas de ingeniería genética

SISTEMA CRE-LOX

Es un sistema de recombinación del bacteriófago P1 que permite deleccionar una secuencia específica del
ADN.

Este sistema requiere de una recombinasa llamada Cre, la cual se expresará gracias a un promotor
seleccionado. La recombinación Cre solo detecta las regiones Lox, por lo que son sitios de unión para poder
catalizar la reacción. El gen que se quiere deleccionar está entre los dos sitios Lox, por lo que se inducirá a la
recombinación: los extremos Lox se alinean y la recombinasa va a cortar el fragmento perdiéndose el
fragmento que queremos eliminar

3. TRANSPOSICIÓN

Los elementos genéticos transponibles, denominados también transposones o «genes saltarines» pueden
moverse o transponerse dentro y entre los cromosomas, insertándose a sí mismos en diversas localizaciones
dentro del genoma. Hay transposones en los genomas de todos los organismos, desde las bacterias hasta los
seres humanos. No solo son ubicuos, sino que también comprenden grandes porciones de algunos genomas
eucarióticos.

En esta sección veremos los elementos transponibles como mutágenos naturales. Los movimientos de los
transposones de un sitio a otro del genoma tienen la capacidad de interrumpir genes y causar mutaciones,
así como también de generar daños cromosómicos, como roturas de la doble cadena.

Clase 1: retrotransposones

Clase 2: elementos transponibles de ADN Ambos pueden ser autónomos o no autónomos

 CLASE 1: RETROTRASNPOSONES

RETROVIRUS Y RETROTRANSPOSÓN

CLASE 2: ELEMENTOS TRANSPONIBLES DE ADN

 SECUENCIAS DE INSERCIÓN

Las secuencias de inserción (elementos IS) pueden moverse

de un sitio a otro y, si se insertan en un gen o en una región
reguladora, pueden causar mutaciones.

Los elementos IS se identificaron por primera vez durante

análisis de mutaciones en el operón gal de E. coli.
Descubrieron que determinadas mutaciones en este operón
se debían a la presencia de varios centenares de pares de
bases de ADN extra, insertadas al principio del operón.
Sorprendentemente, el segmento de ADN mutagénico podía espontáneamente escindirse de esa ubicación,
restaurando la función de tipo silvestre del operón gal. Las investigaciones posteriores revelaron que varios
otros elementos de ADN podían comportarse de una forma similar, insertándose en cromosomas bacterianos
y afectando a la función génica.

Los elementos IS son relativamente cortos, no exceden los 2kpb. Todos los elementos IS presentan dos
características que son esenciales para su movilidad. En primer lugar, contienen un gen que codifica una
enzima denominada transposasa. Esta enzima es responsable de cortar el ADN cromosómico, en el que
puede insertarse el elemento IS. En segundo lugar, los extremos de los elementos IS contienen repeticiones
terminales invertidas (ITR). Los ITR son segmentos cortos de ADN que tienen la misma secuencia nucleotídica
pero orientada en direcciones opuestas.

Los ITR suelen tener aprox. Entre 20 y 40 pares de nucleótidos. Funcionan como sitio de reconocimiento para
la unión de la enzima transposasa.

Los transposones bacterianos (elementos Tn) son más grandes que los elementos IS y contienen genes que
codifican proteínas cuya función no está relacionada con la transposición. Algunos elementos Tn, como Tn9
(resistencia a la cloranfenicol), Tn10 (resistencia a la tetraciclina), están formados por un gen de resistencia
a medicamentos.

Los elementos IS codifican la enzima transposasa, que es necesaria para la transposición del elemento Tn.
Otros tipos de elementos Tn, como Tn3 (resistencia a la ampicilina), tienen secuencias cortas repetidas e
invertidas en sus extremos, y codifican su enzima transposasa gracias a un gen de la transposasa ubicado en
mitad del elemento Tn. Como los elementos IS, los Tn son móviles tanto en los cromosomas bacterianos
como en los plásmidos, y pueden causar mutaciones si se insertan dentro de genes o en sus regiones
reguladoras.

Los Tn pueden introducir múltiples resistencias a medicamentos en los plásmidos bacterianos. Estos
plásmidos se denominan factores R y se pueden desplazar a los cromosomas bacterianos. Estos plásmidos,
denominados factores R, pueden contener muchos elementos Tn que confieran simultáneamente resistencia
a metales pesados, antibióticos y otros medicamentos. Estos elementos se pueden mover de los plásmidos
a los cromosomas bacterianos y pueden propagar las múltiples resistencias a medicamentos entre diferentes
cepas de bacterias.
Plásmidos con resistencias múltiples
 TRANSPOSONES EN PLANTAS

ELEMENTOS Ac y Ds

Antes del descubrimiento de los transposones en bacterias, descubrió la presencia de elementos genéticos
móviles en las plantas de maíz. Se llegó a este descubrimiento analizando el comportamiento genético de
dos mutaciones, disociador (Ds) y activador (Ac). Inicialmente se pensó que Ds introducía una rotura en un
punto del cromosoma adyacente a él.
Análisis posteriores sugirieron que los elementos Ds y Ac se movían a otras localizaciones cromosómicas.
Mientras que Ds se movía solo si Ac también estaba presente, Ac podía moverse autónomamente. El sitio
donde reside Ds determinaba el efecto genético que produce; es decir podía provocar la rotura del
cromosoma o inhibir la expresión de un determinado gen. En las células en las que Ds provocaba la mutación
de un gen, Ds se podía mover otra vez, revirtiendo la mutación al tipo silvestre
Actualmente, varios elementos Ac y Ds se han analizado y se ha clarificado la relación entre ellos. El primer
elemento Ds estudiado (Ds9) es casi idéntico a Ac excepto por una deleción en el gen de la transposasa. La
deleción de parte de este gen en el elemento Ds9 explica su dependencia del elemento Ac para su
transposición. También se han secuenciado otros elementos Ds, mostrando todos deleciones incluso
mayores en el gen de la transposasa. Sin embargo, en todos ellos se mantienen los ITR.

TRANSPOSONES EN HUMANOS
El genoma humano, como el de los otros eucariontes, está lleno de ADN que procede de transposones. Datos
recientes de la secuenciación del genoma revelan que aproximadamente la mitad del genoma humano está
formado de elementos transponibles de ADN.
Las principales familias de transposones humanos son los elementos dispersos largos y los elementos
dispersos cortos (LINE y SINE, respectivamente). Juntos, representan más del 30% del genoma humano.
Aunque la mayor parte de transposones humanos parecen ser inactivos, su movilidad potencial y los efectos
mutagénicos de estos elementos tienen grandes implicaciones para la genética humana.

PREGUNTAS TAREA PREVIA

1) En el modelo de recombinación iniciado por rotura de doble, ¿qué extremos resultantes de la

rotura se digieren inicialmente?

Los extremos 5’ se digieren, se eliminan y la elongación continua en los extremos 3’

2) En el modelo de recombinación iniciado por rotura de doble cadena, ¿qué extremos se usan
como cebadores para sintetizar ADN durante el proceso?

Ambos extremos 3’ → Los extremos 5’ los ha ingerido, te quedan los 3’ de la otra cadena

3) De las distintas formas de resolver los intermediarios de Holliday:

Unas implican sobrecruzamientos y otras no

4) Un elemento transponible bacteriano tiene en sus extremos:

Las mismas secuencias en sus extremos pero invertidas

5) Cuando el transposón se inserta en su diana:

La secuencia diana se duplica de manera que flanquean al transposón repeticiones directas

 4.2. CUESTIONARIO

1) Indica el orden correcto de los siguientes pasos en el modelo de recombinación molecular de Szostak:

6 1. Formación de estructuras de holliday

4 2. Rotura de doble cadena
2 3. Invasión
7 4. Resolución de estructuras de Holliday
1 5. Procesamiento de extremos 5’
3 6. Síntesis de ADN
5 7. Migración de las ramas

2) ¿En qué paso actúa RecA? En migración de las ramas (7) y en la SÍNTESIS DE ADN (6)

3) ¿En qué paso actúa RuvC? Resolución de estructuras de Holliday (4)

4) ¿En qué paso actúa Spo11? Rotura de doble cadena (2)

4.5. CUESTIONARIO

1) Los elementos transponibles de ADN usan para transportarse:

a. una tretranscriptasa c. una quinasa

b. una transposasa d. una fosfatasa

2) Los retrotransposones usan para transponerse:

a. una tretranscriptasa c. una quinasa

b. una transposasa d. una fosfatasa

3) De los siguientes pasos en el ciclo de vida de un retrovirus marca los que se dan en la
retrotransposición:

a. Entrada y pérdida de la envuelta d. Transcripción

b. Retrotranscripción e. Síntesis de transcriptasa inversa
c. Integración en el cromosoma f. Adquisición de la envuelta y salida

4) En los retrotransposones:

a. La transposición es siempre replicativa c. La transposición puede ser replicativa o conservativa

b. La transposición es siempre conservativa d. La transposición no es ni replicativa ni conservativa

4.6. CONSECUENCIAS DE LA TRANSPOSICIÓN

Discutir qué consecuencias puede tener sobre el genoma hospedador:

- El salto de un transposón

- La existencia de varias copias de un mismo transposón en el genoma

 4.8. CUESTIONARIO

1-¿Qué es un heterodúplex?
a) La unión de dos nucleótidos no complementarios
b) Una sección de una molécula de ADN en que una cadena proviene de un cromosoma y la otra de su
homólogo
c) Una estructura en forma de cruz que se forma durante la recombinación
d) Una estructura de triple cadena en que una cadena simple ha invadido una doble hélice
2-¿Qué es la conversión génica?
a) Un proceso que genera un nuevo alelo de un gen
b) Un proceso que restaura la función silvestre del gen
c) Un proceso que transforma un alelo en un cromosoma en el alelo presente en el cromosoma homólogo
d) Un proceso por el que un gen se vuelve no funcional
3-La recombinación entre repeticiones directas presentes en el mismo cromosoma...
a) No altera la estructura del cromosoma
b) Provoca la rotura permanente del cromosoma
c) Hace que se invierta la sección de ADN situada entre las repeticiones
d) Hace que se escinda la región de ADN situada entre las repeticiones
4-¿Qué tipo de elemento transponible se encuentra casi exclusivamente en eucariotas?
a) Elementos transponibles que se mueven por transposición conservativa
b) Elementos transponibles que se mueven por transposición replicativa
c) Retrotransposones, que se mueven vía un ARN intermedio
d) Todos los anteriores
5-Diferencia entre transposición conservativa y replicativa de elementos transponibles de ADN
a) En la conservativa, un fragmento de ADN de doble cadena se mueve de un sitio a otro, en la replicativa se
acaba produciendo una segunda copia del elemento transponible
b) En la conservativa, la transposasa cataliza la salida y reintegración del transposón, en la replicativa no está
implicada la transposasa
c) La conservativa requiere síntesis de ADN y la replicativa no
d) La replicativa requiere síntesis de ADN y la conservativa no
4.7. PROBLEMA

Una bacteria carente de plásmidos tiene un transposón insertado en su cromosoma. Se trata de un

elemento transponible que sólo realiza transposición conservativa. Sin embargo, después de cultivar esta
estirpe bacteriana en medio rico, se detecta la aparición de una segunda copia del transposón. Dibuja tres
pasos intermedios y explica el proceso que permite pasar de la situación "1" (una copia del transposón en
el cromosoma) a la situación "5" (dos copias del transposón en el cromosoma).
 4.4. PROBLEMA

En cada uno de los casos abajo descritos tenemos secuencias repetidas en distintas localizaciones u
orientaciones. Dibuja de forma esquemática la situación de partida y el resultado de un evento de
recombinación homóloga (asumiendo que se produce un único entrecruzamiento) para cada caso.
a) Repeticiones directas (misma orientación) en un mismo cromosoma.
b) Repeticiones invertidas (orientación invertida) en un mismo cromosoma.
c) Repeticiones en dos cromosomas distintos, con la misma orientación centrómero-telómero.
d) Repeticiones en dos cromosomas distintos, con diferente orientación centrómero-telómero