INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
BITÁCORA DE LA PRÁCTICA:”Glucogeno”

Castillo Briones Horus Emanuel

Escobar Ortega Jacobo Eduardo
Grupo: 3IV1

Introducción. cuando no está disponible la glucosa

en la dieta
El glucógeno es un almacén de glucosa
rápidamente movilizable. Se almacena
en el citosol en forma de gránulos. Es
Objetivos.
un polímero de residuos de glucosa
muy grande y ramificado. El glucógeno Aplicar una estrategia para aislar,
aumenta la cantidad de glucosa purificar y caracterizar al glucógeno
disponible inmediatamente entre las
comidas y durante la actividad
muscular Parte Experimental.
En organismos que van de bacterias a
plantas y a vertebrados, el exceso de
glucosa se convierte en formas
poliméricas para su almacenamiento:
glucógeno en los vertebrados y
muchos microorganismos, y almidón
en plantas. En los vertebrados el
glucógeno se encuentra
principalmente en el hígado y en el
músculo esquelético; puede
representar hasta el 10% del peso del
hígado y del 1 al 2% del peso del
músculo. El glucógeno se almacena en
forma de grandes gránulos citosólicos.
La estructura principal del glucógeno
consiste en aproximadamente 55,000
residuos de glucosa y 2,000 extremos
no reductores.

El glucógeno hepático sirve como

almacén de glucosa para otros tejidos
Resultados

Tabla 1

Determinación de glucógeno

en el hígado

Discusión
El hígado se lava para eliminar los
restos de sangre la cual es un tejido
que contiene proteínas, después se
trituro el hígado en el mortero con
arena lavada y ácido tricloroacético
(TCA) al 10%. La arena sirve como
superficie de contacto para romper los
hepatocitos y que estos liberen el
glucógeno contenido, mientras que el
TCA hace que disminuya el pH para
detener la actividad enzimática (La
amilasa salival); precipita numerosas
sustancias de peso molecular elevado,
como las proteínas y los ácidos
nucleicos, en tanto que el glucógeno
continúa disuelto.
Se centrifuga a 2,000 rpm por 5
minutos para sedimentar los
componentes que no son de interés y
separar el glucógeno. Posteriormente
se coloca el líquido sobrenadante en un
vaso de precipitados y se pone en hielo
para evitar que el glucógeno se
hidrolice por el TCA y para disminuir la
solubilidad de los polisacáridos. Se
vuelve a añadir TCA para recuperar
mayor cantidad de glucógeno y se
resuspende el precipitado obtenido
anteriormente; esto con el fin de volver
a centrifugar para sedimentar
nuevamente y obtener una solución de
glucógeno más pura.
Se añade etanol 96° para disminuir la
constante dieléctrica de los
componentes, haciendo menos
solubles a las macromoléculas y
floculando el glucógeno. Se centrifuga
una vez más y se obtiene una pastilla
de glucógeno formada en el fondo del
tubo. Se añade agua para solubilizar el
TCA y las impurezas que hayan
quedado para desecharlas, así como
también se añade etanol para
precipitar el glucógeno.
En la segunda parte de esta práctica se
ejecuta una serie de reacciones para
caracterizar e identificar el glucógeno,
antes y después de dos tipos de
hidrólisis
Llevadas a cabo; ácida y enzimática.
Las reacciones químicas a realizar en
la práctica son de identificación:
Molish-Udransky (identifica presencia
de carbohidratos en general), Biuret
(identifica péptidos de mayor peso
molecular), Ninhidrina (identifica
aminoácidos, proteínas, péptidos);
caracterización: Lugol (identifica
polisacáridos y su estructura); Fehling
(identifica azúcares reductores), Lugol
y Seliwanoff (indica si hay aldosas o
cetosas presentes).
En la hidrólisis enzimática se tomó una
muestra de amilasa salival, la cual se
añadió a dos tubos de ensayo junto con
la solución de glucógeno y se dejó
incubar a 37°C por 30 minutos; con una
gota de NaCl al 5%. Dichas condiciones
son fisiológicas, es decir, condiciones
similares a las que se encuentran en el
cuerpo. La hidrólisis ácida se hizo con
HCl a diferentes concentraciones de
1N, 2N y 4N.
Una vez obteniendo el glucógeno se
hacen las pruebas de identificación
para determinar la pureza de este al
venir de un organismo. Se esperaba
que para la reacción de Ninhidrina y la
de Biuret diera un resultado negativo y
así fue, lo que mostró que la mezcla
obtenida está libre de proteínas,
péptidos y aminoácidos. Para la
reacción de Molish se presentó un
anillo violáceo, señalando la presencia
de un carbohidrato. Se predecía que
para la prueba de lugol hubiera color y
que este fuera de una tonalidad café
rojiza, lo cual indicaría que es un
polisacárido ramificado; y
efectivamente obtuvimos una prueba
positiva virando de color rojo-ámbar
Se efectuaron dos tipos hidrólisis del
glucógeno, ácida y enzimática. Y
posteriormente, las reacciones
correspondientes para darle
seguimiento a dicho proceso, con las
cuales podría comprobarse la
efectividad de la hidrólisis.
En la prueba de lugol se identifican los
polisacáridos presentes. Teniendo el
antecedente de que los productos
finales de la hidrólisis del glucógeno
son glucosa (monosacárido), maltosa
e isomaltosa (disacáridos) se
pronosticaba un resultado negativo
para la reacción. Sin embargo, en la
hidrólisis ácida los enlaces se rompen
al azar, lo cual no garantiza la
formación de dichos productos. En la
hidrólisis enzimática, llevada a cabo
por la enzima α-amilasa, esta cataliza
específicamente los enlaces α 1- 4 (no
son afectados los enlaces α 1-6 ya que
para esto se necesita una enzima
desramificante). Conforme a los
resultados que se llegaron, se deduce
que la hidrólisis enzimática es más
efectiva por su especificidad que la
ácida.
En la reacción de Seliwanoff se espera
obtener un color rosáceo de acuerdo
con los productos finales de la
hidrólisis (aldosas).
La reacción de Fehling. El fundamento
de este ensayo es el poder reductor del
grupo carbonilo de los aldehídos.
Conclusiones
El glucógeno es un polisacárido
ramificado.
Se obtuvo un rendimiento con un valor
bajo
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