I.

INTRODUCCIÓN

La transaminasa glutámico oxalacética (GOT) y transaminasa glutámico pirúvica (GPT)

son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada concentración en
corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos. La actividad sérica en
condiciones normales es baja o nula. Un daño o enfermedad en cualquiera de
estos tejidos conduce a un aumento en los niveles séricos. La actividad de GOT
es abundante en músculo cardíaco y la actividad de GPT es abundante en tejido
hepático. La urea es un compuesto nitrogenado no proteico, cristalino y sin color.
En los animales y en el hombre es el principal producto final del metabolismo
proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a través de los
riñones. Una elevación de la concentración sérica de urea, se interpreta
generalmente como una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse
de lado el hecho de que los valores séricos de urea se encuentran íntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración
en estas variables se traducirá en un cambio de la concentración de urea en suero.
La urea se puede fabricar industrialmente como fertilizante para las plantas, siendo
el nitrógeno esencial para su metabolismo. Sirve como suplemento alimenticio para
el ganado, ya que la enzima ureasa, que está presente en el rumen, hidroliza a la
urea en anhidro carbónico y nitrógeno, este último es vital para la síntesis de

proteínas. También se utiliza en la fabricación de plásticos y drogas.

II. OBJETIVOS

Aplicar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de la

GOT, GPT urea en una muestra biológica respectivamente.

III. MATERIAL Y MÉTODOS

3.1.MATERIALES

Materiales biológicos hidróxido de sodio

o Sangre 3 4 M.
o GOT y GPT.
Materiales de vidrio Standard: solución
o Tubos de ensayo de piruvato de
o Pipetas serológicas sodio 2 mmol/l.
o Vaso de precipitación Para efectuar la
o Cubetas de curva de
espectrofotómetro calibración.
o Ureasa estabilizada y
Reactivos tamponada.
o GOT Reactivo A: o Urea. Reactivo A:
solución con 100 reactivo desecado
mM de l-aspartato y conteniendo fenol
2 mM de 532mM
αcetoglutarato en
buffer fosfatos 100 y
mM, pH 7,4. nitroferricianuro de
o GPT Reactivo A: sodio 0,85mM.
solución con 200 o Urea. Reactivo B:
mM de dl-alanina y reactivo concentrado
2 mM de de hipoclorito de
αcetoglutarato en sodio 36,6mM e
buffer fosfatos 100 hidróxido de sodio
mM, pH 7,4. 0,625mM.
o GOT y GPT. Reactivo o Agua destilada
B: solución
conteniendo 1 mmol Equipos y otros
de 2,4- o Baño María
dinitrofenilhidracina o Cocina eléctrica
(2,4-DNFH) en ácido o Espectrofotómetro
clorhídrico 1 M. o Micropipetas (pipetas
o GOT y GPT. automáticas)
Reactivo C: o Puntas para
solución micropipetas
de o Gradillas
 3.2. MÉTODOS

 Mediante la observación y exploración se aplicará el método

de espectrofotometría y reacciones químicas para evaluar la
acción de las enzimas transaminasas y digestión de la urea
por acción de la ureasa.

IV. PROCEDIMIENTO

A) Determinación de la enzima Transaminasa Glutámico Oxalacética

(GOT)

 En 2 tubos de ensayo agregar lo siguiente:

Mezclar y retirar los sistemas del baño María. Después de 2 minutos leer la
absorbancia a 505nm de longitud de onda. Llevando a cero con el blanco.

B) Determinación de la enzima Transaminasa Glutámico Pirúvica (GPT)

 En 2 tubos de ensayo agregar lo siguiente:

  Mezclar y retirar los sistemas del baño María. Después de
2 minutos leer la absorbancia a 505nm de longitud de
onda. Llevando a cero con el blanco.

C) Determinación de la urea

 En 3 tubos de ensayo agregar lo siguiente:

 Mezclar y retirar los sistemas del baño María. Después de 10 minutos hacer las
lecturas de absorbancia a 540nm de longitud de onda. Llevando a cero con el
blanco.
 V. RESULTADOS

El reactivo b es para determinar si se ha formado producto o no.

Nos sirve para evidenciar, en la derecha nos muestra buena cantidad de enzimas a
nivel de las muestras.
También nos muestra menos tonalidad de
muestra. TABLA
A= 0.415
GPT (Desconocido)
A= 0.418
TABLA
U/L DE GTP=68
GTP (Desconocido)
U/L de GOT= 68.48
Se pudo observar un azul verdoso, mientras más oscuro es hay más
presencia de reactivo.
  Con las lecturas de absorbancia determinar la concentración de
producto de cada sistema.

C=F x absorbancia

F= concentración s /
absorbencia s F=0.60 / 0.260
F= 2.3
Concentración= 2.3 x absorbancia
Cd= 2.3 x 0.379
Cd= 0.8717
VI. CONCLUSIONES Hemos podido evaluar la acción de las
enzimas transaminasas y digestión de la urea por acción de la ureasa.

VII. CUESTIONARIO

- ¿Qué pasaría con el organismo si las enzimas transaminasas fueran

inhibidas?

Los niveles de transaminasas en sangre se utilizan como indicador

para detectar posibles patologías en las funciones del hígado.
En general suele deberse a una alimentación poco equilibrada con
déficit de vitaminas o a una infección urinaria. Los niveles bajos
suelen ser positivos y muchas veces no son considerados como
fuera de rango.

- ¿Por qué es importante liberar del organismo a la urea como

desecho?
Para la eliminación del excedente de amonio formado en la
degradación de aminoácidos, ya que los niveles de amoníaco altos
en la sangre pueden llevar a problemas de salud graves, como daño
cerebral, coma e incluso la muerte.

- ¿Qué otros métodos podríamos aplicar para demostrar la degradación

de los aminoácidos?
Podemos usar también un secuenciador de proteínas, es el proceso práctico
de determinar la secuencia de aminoácidos de toda o parte de una proteína o
péptido. Esto sirve para identificar a la proteína o caracterizar sus
modificaciones postraduccionales. Usualmente, la secuenciación parcial de
una proteína provee la información suficiente para identificarla con bases de
datos de proteínas derivadas de la traducción conceptual de los genes.

- ¿Cuáles son los posibles destinos metabólicos del grupo amino y de

la cadena carbonado de un aminoácido en el organismo?
Los posibles destinos pueden ser: Con fines energéticos, dependiendo del
aminoácido entraran en las rutas catabólicas por diferentes puntos.
Para fabricar otros compuestos, también puede incorporarse en la
gluconeogénesis y la lipogénesis en las células del hígado.

VIII. BIBLIOGRAFÍA
o Bustamante, J. M. (s. f.). Transaminasa GPT (ALT) en la sangre baja.
tuotromedico. Recuperado 21 de septiembre de 2020, de
https://www.tuotromedico.com/parametros/transaminasa-gpt-alt-en-sangre-
baja.htm

o Niveles de amoníaco. (s. f.). medlineplus. Recuperado 21 de septiembre de

2020, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/niveles-de-
amoniaco/#:%7E:text=La%20urea%20se%20elimina%20del,coma%20e%20incl
uso%20la%20muerte.