TRANSAMINACION Y

METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS
POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

Quim. Alicia Claverí Jarandilla

Principales transaminasas
Mecanismo
Transaminasas en el organismo
https://www.youtube.com/watch?v=GCoj8JJz43s
Parte experimental
TRANSAMINACION Y METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS POR
CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA
OBJETIVOS
• Observar el proceso de Transaminación haciendo uso de la cromatografía en capa fina.
• Determinar la actividad de la transaminasa glutámica pirúvica (TGP) en extracto de hígado de pollo.
FUNDAMENTO
• Este proceso consiste en una aminación, en dicho mecanismo el grupo amino de un aminoacido1 es
transferido en forma reversible a un α -cetoacido1, al final se obtiene un nuevo α -aminoácido2 y un α
-cetoacido2.
• La catálisis de esta reacción es llevada a cabo por enzimas denominadas transaminasas o
aminotransferasas, las cuales son de amplia distribución tisular (corazón, hígado, cerebro. riñón, etc.)
• Poseen corno coenzimas al fosfato de piridoxal (Vit B6) que específicamente transfiere el grupo a-
amino del aminoácido al α -cetoacido.
• Esquemáticamente se puede representar la acción de dicha enzima como sigue:
• Se ha podido demostrar que el acido glutámico y el ácido α - cetoglutarico, intervienen en una gran cantidad de
procesos de Transaminación. Dos aminasas de importancia clínica son:
• La transaminasa glutámica oxalacetica (TGO) y la transaminasa glutámica pirúvica (TGP) cuyo mecanismo de
acción es el siguiente:

• Acido L-glutámico + ácido pirúvico TGP ácido α -cetoglutarato + L-

alanina
• Acido L-glutámico + ácido oxalacetico TGO ácido α -cetoglutarato +
L- aspártico
• MATERIALES Y REACTIVOS
• Buffer fosfato 0.05M a pH 7,4
• Disolución de alanina 0.2 M
• Disolución de Arsenito 0.1M
• Disolución de Glutamato 0.2 M
• Disolución de Piruvato 0.2 M
• Disolución de Ninhidrina 0.2% en etanol
• Sistema disolventes para aminoácidos: etanol: agua (50:50), metanol: agua (1:3) o propanol: agua
(80:20).
• Hígado (de animal recientemente sacrificado)
• Equipo de cromatografía (Cromatoplaca 7 x 15 cm), Centrifuga, Baño isotérmico
Incubamos los tubos de ensayo en baño maría a 37°C, durante 30 — 45’ minutos,
sacar los tubos y a cada uno le agregamos 6 ml. de etanol absoluto. Agitar y esperar
2 min. Centrifugar a 3000 rpm. por 3 min. y usar los sobrenadantes para la
cromatografía.
• Cromatografía: Utilizar placas de 7 x 15 cm, separar en 4 canales y colocar de
acuerdo al cuadro (tubo 1 y tubo 2), l0 gotas de los sobrenadantes.
En el tercer canal colocar 2 gotas de la solución de Alanina y de glutamato 0.2M,
que sirven como patrón de comparación, tener cuidado de dejar secar el papel entre
gota y gota, sobre el mismo punto. Colocar la tira en la cámara de cromatográfica el
que contiene la mezcla de solventes (preparar antes para que la cámara este
saturada). Dejar correr 2 horas, sacar el cromatograma y marcar el frente de
solvente con un lápiz, dejar que seque completamente, revelar la cromatoplaca con
solución de Ninhidrina al 0.2% en etanol o acetona (0.1% en butanol) utilizando un
vaporizador. Colocar la placa a la estufa previamente calentada a 110 ºC por 10
minutos.
CUESTIONARIO
1. Que representan los Rf de cada mancha lograda
2. Identificar que aminoácido se formo debido a la actividad de la
transaminasa correspondiente?
3. Cual es la finalidad de usar el arsenito?
4. Realice un esquema en el que se realice la ruta de los
procesos de transaminación y desaminación en el organismo
humano
5. Cual seria su conclusión en el caso de no haber un resultado
positivo