Práctica 10: “REACCIÓN DE

TRANSAMINACIÓN Y SU
RECONOCIMIENTO POR MEDIO DE
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL” Cuellar S. Jesús
A.,

Ruiz G. Verónica.
3FM1 Sección: 4

INTRODUCCIÓN ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Las transaminaciones son reacciones donde se traspasa el grupo
amino desde un alfa-aminoácido a un alfa-cetoácido, convirtiéndose
el primero en alfa-cetoácido y el segundo en un alfa-aminoácido. Las
enzimas que catalizan estas reacciones son las transaminasas y
necesitan el piridoxal fosfato (PLP) como enzima.
Se realizó una cromatografía en papel utilizando una fase móvil de
etanol : metanol : agua-urea en una proporción 45: 45 : 10 : 0.5
dejando desarrollar por 18 horas, se dejó secar y se revelo con una
solución de ninhidrina al 0.05% en etanol y calentando en la estufa
ligeramente (Imagen 1).

Problema 2

Cuando predomina la degradación, la mayoría de los aminoácidos

ceden su grupo amino al alfa-cetoglutarato que se transforma en
glutamato (GLU), pasando ellos al alfa-cetoácido correspondiente. Disoluciones Glu. (5, 10, 15, 20, 25)
Testigo
Hay dos transaminasas, GOT y GPT, cuyos niveles en suero tienen
importantes significados en el diagnóstico clínico. Estas enzimas
abundantes en el corazón e hígado son liberadas cuando los tejidos
sufren una lesión, por lo tanto, sus niveles altos en suero, pueden
ser indicativos de infarto de miocardio, hepatitis infecciosa u otros Glu
daños orgánicos.

Problema 1

Alanina

El GLU puede deshacerse fácilmente de su grupo amino mediante

una desaminación.

OBJETIVOS

● Cuantificar la actividad de transaminasa ALAT/TGP en

extracto de hígado por medio de cromatografía.
● Elaboración de curva tipo con base a cromatografía para
su posterior lectura en espectroscopio. Imagen 1: Cromatograma en papel señalando los puntos de interés.
● Interpretar la actividad de transaminasa ALAT/TGP con
base a Rf y lecturas de absorbancia.

1
Se procedió a medir la longitud del frente y el desplazamiento de los datos de la absorbancia, obteniendo valores de m=0.307 y b=1.8 x10-3,
puntos en el cromatograma marcados, obteniendo con esto los derivado de lo anterior se calculo x de la ecuación de la recta y se
siguientes Rf’s. obtuvo el valor de 0.385.

Muestra Rf Para calcular las unidades de transaminas se procedió a calcular la

Estándar Alanina 0.6502 cantidad de hígado que esta presente en 1 mL a partir de 37 g en
Testigo 1 0.6594 750 mL, el cual resultó en 0.0493, por lo que las unidades de
Problema 1 0.6297 transaminasas son:
Problema 2 0.3405
Estándar Glu 0.4429 0.385 μ moles Glu
=7.809 UT/30 µL
(1 h)(0.0493 g hígado)
Observe como solo aparece una mancha en el testigo, la cual
coincide exactamente con el estándar de Alanina, esto se refuerza al Pero este valor solo es válido para 30 µL, pero se debe tener el
comparar sus Rf’s son iguales, por lo que se concluye que en el tubo cálculo para 1 mL, por lo que este se multiplico para que fuera lo
testigo solo se encuentra presente Alanina. Por otro lado, en el tubo disuelto en 1mL y esto resultó en 7809 UT/mL.
problema se obtuvieron 2 manchas, gráficamente observe como la
CONCLUSIONES
primera mancha está a la par con la del testigo y, al comparar el Rf
de este con el del testigo y el problema se infiere que aquí solo se BIBLIOGRAFÍA
encuentra alanina.
1. PDF. “METABOLISMO DE COMPUESTOS NITROGENADOS”.
Finalmente tenemos una segunda mancha atrás de la primera, con Recuperado de:
un Rf de 0.3405, el cual se parece a la del estándar de ácido http://www3.uah.es/bioquimica/Tejedor/bioquimica_quimica/R-
glutámico (0.4429), quizá el que se encuentre atrás esta mancha se T20-1-Rgenerales.pdf. Consultado: 07/10/19.

deba a que la muestra del tubo problema se encuentra en menos

concentración que el estándar, por lo que eluyó menos, pero
comparando ambas manchas se puede deducir que esta mancha
representa al ácido glutámico.

Resumiendo lo anterior: En el tubo testigo solo se encuentra alanina

y en el tubo problema se encuentra alanina y ácido glutámico.

Posteriormente se procedió a recolectar la muestra para obtener los

datos que servirían para construir una curva tipo, por lo que se
recortaron las muestras de las aplicaciones de ácido glutámico de 5
a 25, el de ácido glutámico del tubo problema y un trozo que
correspondería al desplazamiento del ácido glutámico en el tubo
testigo si es que este se hubiese manifestado, cabe destacar que
cada una se colocó en tubos separados. Se disolvió con 1 mL de
ninhidrina al 1% en butanol, se calentó por 2 minutos y se enfrió
para su posterior lectura. Se obtuvieron los siguientes valores y, al
final, se encuentra la curva tipo con un ejemplo de como se
calcularon los µmoles de cada tubo, valores que se encuentran
también en la tabla.

Muestra Absorbancia µmoles

Testigo 0 0
Problema 0.12* 0.38 (0.385)
Aplicación de 5µL 0.122 ¿?
Aplicación de 10 µL 0.056 0.2
Aplicación de 15 µL 0.101 0.3
Aplicación de 20 µL 0.132 0.4
Aplicación de 25 µL 0.148 0.5
*Nota: Los valores son para una disolución 1:2

Gráficamente, interpolando la absorbancia en la gráfica del tubo

problema se obtuvo el valor de 0.38 µmoles, para comparar se
procedió a realizar una regresión lineal para ajustar la gráfica a los