PRÁCTICA No.

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Nombre de la práctica: Enzimología clínica: determinación de transaminasas
séricas
Las transaminasas son enzimas que realizan la interconversión de aminoácidos
alfa-cetoácidos por transferencia de grupos amino. Existe una gran variedad de
transaminasas con diferente significado fisiológico, de ellas la STGO y la STGP son
las más importantes desde un punto de vista clínico.
La STGO promueve la siguiente reacción:

STGO (AST)
L-aspartato + cetoglutarato <--------> oxaloacetato + L-glutamato

La STGP a su vez promueve la siguiente reacción:

STGP (ALT)
L-alanina + cetoglutarato <--------> piruvato + L-glutamato

Estas reacciones son reversibles y utilizan l fosfato de piridoxal como coenzima.

La enzima aspartato aminotransferasa (AST/TGO) se encuentra ampliamente
distribuidaen los tejidos del organismo, principalmente en el tejido hepático,
cardiaco, muscular y renal. La presencia de la enzima alanina aminotransferasa
(ALT/TGP) se registra en tejidos de varios tipos. La ALT se encuentra especialmente
en el hígado, razón por la cual su actividad se determina en el diagnóstico de
hepatopatías. Estas transaminasas también se encuentran de forma secundaria en
plasma, bilis y fluido cerebroespinal sus niveles extracelulares deben ser bajos en
condiciones normales y solo cuando hay lesión celular se podrán encontrar altos
títulos de estas enzimas.
En pacientes con infarto al miocardio ó con lesión hepática aguda se encontrarán
altos títulos de dichas transaminasas los cuales se mantendrán elevados por un
periodo de 24 a 36 hrs en caso de infarto y por mucho más tiempo en caso de lesión
hepática.

Importancia clínica:
Se han aislado dos isoenzimas de la AST, la citoplasmática y la mitocondrial. EN el
suero normal solo se halla la isoenzima citoplasmática, mientras que en el suero de
pacientes con enfermedades coronarias y hepatobiliares, pueden detectarse tanto
la citoplasmática como la mitocondrial.
Los valores séricos de las AST pueden estar disminuidos en pacientes en diálisis
renal o con una deficiencia de la vitamina B6. Esta reducción aparente de la AST
puede estar ligada a la pérdida del nivel de fosfato de piridoxal, el grupo prostético
de la AST, que trae como consecuencia un incremento en la relación apoenzima y
la holoenzima.
Al presentar concentraciones elevadas de las AST, se encuentran afecciones
hepatobiliares tales como cirros, el carcinoma metastasico y la hepatitis viral. Por
consecuencia de un infarto al miocardio, la AST seria se encontrará aumentada y
alcanzará su valor máximo dos días después ocurrido el infarto.
Por otra parte las concentraciones elevadas de ALT acompañan la hepatitis, la
cirrosis, la ictericia obstructiva, el hepatocarcinoma y el alcoholismo. La presencia
de concentraciones levemente elevada se puede determinar en pacientes que han
sufrido un infarto al miocardio sin complicaciones.
Tanto la AST como la ALT, se elevan al presentar procesos patológicos que afectan
la integridad de los hepatocitos, la ALT es de ambas enzimas la más específica para
hígado.
En pacientes con deficiencia de vitamina B6, la actividad sérica de la
aminotransferasa puede disminuir. AL presentar una reducción de la actividad de la
aminotransferasa se puede asociar a valores disminuidos de fosfato de piridoxal, el
grupo prostético de las aminotransferasas, obteniendo asi un aumento del cociente
de apoenzima a holoenzima.

Objetivo:
 Determinar la transaminasa glutámico pirúvica (STGP) y la transaminasa
glutámico oxaloacetica (STGO) en el suero para interpretar fenómenos
fisiológicos, metabólicos y patológicos relacionados con estas enzimas.

Material:

 Tubos de ensaye
 Gradilla
 Pipetas serológicas
 Propipetas
 Celdillas para espectrofotómetro

PROCEDIMIENTO:
1. Primero se deberá elaborar una curva de calibración como se muestra en el
siguiente cuadro:
 Ml de Sustrato de H2O
Tubo Absorbancia
piruvato TGO/TGP destilada

1 0 1.0 0.2

2 0.10 0.90 0.2

3 0.20 0.80 0.2

4 0.30 0.70 0.2

5 0.40 0.60 0.2

Tabla 2. Distribución de los reactivos iniciales para la Curva de Calibración

2. Posteriormente se le van a adicionar los siguientes reactivos, dando tiempos

de reposo para que reaccione el contenido.
3. Agregar 1.0 ml de dinitrofenilhidracina. Reposar 20 minutos a temperatura
ambiente
4. Agregar 10 ml de NaOH 0.4 N. Reposar 10 minutos a temperatura ambiente
5. Leer en el espectrofotómetro a 505 nm ajustando el equipo con un blanco
con agua destilada
6. Una vez obtenidas todas las absorbancias, genere una gráfica donde el eje
de las X serán las Unidades Internacionales (UI) y el eje de las y las
absorbancias. Recuerde que la gráfica deberá tener escala para poder
interpretar los resultados obtenidos mediante una interpolación.

Unidades de Unidades de
Absorbancias
TGO TGP
obtenidas
equivalentes equivalentes

0 0

24 28

61 57

114 97

190 150

Tabla 3. Equivalencias de las absorbancias obtenidas con las Unidades de TGO y TGP
Eje Y

Ab
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190

EjeX U.I.
Figura 3. Representación gráfica de las absorbancias obtenidas por el alumno

Para la cuantificación de las transaminasas, solo se prepara un tubo problema por

cada determinación y se utiliza un blanco de agua destilada para ajustar el
fotocolorímetro.

Tratamiento de los problemas

1. Preparar la siguiente table con el suero utilizado para el problema

Tubo
Tubo problema
Reactivos y tiempos de incubación problema
de TGP
de TGO

Solución amortiguadora de substrato 0.2 ml 0.2 ml

Preincubación a 37° C 5 mins 5 mins

Suero ( no hemolizado ) 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar e incubar a 37° C 30 mins 30 mins

 Reactivo de Dinitrofenilhidracina 0.5 ml. 0.5 ml.

Mezclar y dejar reposar a temp. ambiente 20 mins 20 mins

Hidróxido de sodio 0.4 N 5.0 ml. 5.0 ml.

Tabla 4. Distribución de los reactivos para la Cuantificación de las transaminasas TGO Y TGP
Séricas

2. Mezclar y reposar 5 mins a temperatura ambiente.

3. Medir la absorbancia del tubo de TGP a 490 nm. y de TGO a 505 nm
ajustando el espectrofotómetro a cero de absorbancia con agua destilada.

Resultados:

En base a la gráfica Interpolar los valores de absorbancia obtenidos en la curva de

calibración para determinar las concentraciones de cada transaminasa (TGO y
TGP).
Valores obtenidos:

TGO UI/ml
TGP UI/ml

Valores de referencia:
STGO: 4 a 36 Unidades Internacionales / ml.
STGP: 4 a 32 Unidades Internacionales / ml.

Bibliografía.
CUESTIONARIO:

1._ Mencione cinco enfermedades en donde estén altos los títulos de STGO y de
STGP.
2._ ¿Cuáles serán las pruebas específicas primarias para la elaboración de un perfil
hepático?
3._ ¿Que es el coeficiente de Rittis? y que datos clínicos nos refiere.
4._ En que otro tipo de tejidos además del hepático y cardíaco es posible encontrar
este tipo de transaminasas.