Práctica N°3 : Identificación y valoración de Tetraciclina y Epitetraciclina por el método

espectrofotométrico

1. Objetivo General

Identificar y valorar de Tetraciclina y Epitetraciclina por el método espectrofotométrico

2. Objetivos Específicos

- Establecer el porcentaje de principio activo de Tetraciclina y Epitetraciclina,

mediante el método espectrofotométrico.
- Realizar controles físicos de Tetraciclina y Epitetraciclina.
- Comparar el método de análisis realizado en el laboratorio con el método
establecido en la USP 41 de los estados unidos.

3. Fundamento teórico

Caracteres generales: Polvo cristalino amarillo, inodoro. Moderadamente higroscópico.

Estable al aire, se oscurece por exposición a la luz solar fuerte y al aire húmedo. Pierde
potencia en soluciones de pH por debajo de 2 y se degrada rápidamente en soluciones de
hidróxidos alcalinos. Soluble en agua y en soluciones de hidróxidos alcalinos y
carbonatos; poco soluble en alcohol; prácticamente insoluble en cloro-formo y éter
(USP41, 2018).
Su estructura está compuesta por cuatro anillos, la amina secundaria es importante para
la acción farmacológica.
El grupo cromogénico es la estructura conjugada de los grupos carbonilo e hidroxilo.

En ocasiones se utiliza el término epimerización para indicar que los isómeros difieren
como consecuencia de variaciones en la configuración de los -OH y -H unidos a los
átomos de carbono. Los miembros de la familia de las tetraciclinas tienen más
probabilidades de incurrir en epimerización. Esta reacción se produce rápidamente
cuando el fármaco disuelto se expone a un pH de un intervalo intermedio (superior a 3),
y da como resultado la reordenación estereoquímica del grupo dimetilamino. El epímero
de la tetraciclina es la epitetraciclina, que tiene poca o ninguna actividad antibacteriana
(Korolkovas & Burckhalter, 1983).
 4. Parte experimental

4.1 Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES MEDICAMENTO REACTIVOS

Balanza Balones aforados Tetraciclina Estándar de
(100,50 ml) Tetraciclina

Espectrofotómetro Pipetas volumétricas EDTA

UV 5%
Pipetas graduadas NaOH 5,5N
Embudo HCl 0,01N
Papel filtro ácido sulfúrico
Vasos de precipitación
Erlenmeyer
Espátulas

4.2 Procedimiento
a. Preparación de reactivos (un grupo de laboratorio horas antes de la hora de
laboratorio)
-Preparación de EDTA al 5% (250ml)
Si se parte de un peso molecular de 292,24 g/mol, pesar 12,5g de sal de EDTA en un
balón de 250ml, colocar 100ml agitar hasta disolución, aforar a a 250ml.
-Preparación de HCl 0,01N (500ml)
Si se parte de ácido clorhídrico concentrado al 37%, peso molecular 36,46 g/mol y una
densidad 1,19g/mL, colocar 0,41 ml en un balón de 500ml que contenga 50 ml de agua,
agitar y finalmente aforar.

- Preparación de NaOH 5.5N (100ml)

Si se parte de NaOH al 99% p/p, peso molecular 40 g/mol, pesar 22,2 g de NaOH en
un balón de 100ml que contenga 25ml de agua, agitar hasta disolución, finalmente
aforar.
b. Uniformidad de masa
- Pesar el contenido de 20 cápsulas o tabletas.
c. Preparación de blanco
Tetraciclinas: Utilizar agua destilada como blanco, leer a 270nm, encerar el equipo.
Epitetraciclinas: Utilizar HCl 0,01 N como blanco, leer a 430nm, encerar el equipo.

d. Preparación del Estándar (duplicado por curso)

Estándar tetraciclinas
- En un volumen volumétrico de 500 mL se deposita 50 mg de estándar tetraciclina, añadir
aproximadamente unos 100 mL de agua, llevar al baño ultrasónico.
- Aforar con agua destilada.
- De esta solución tomar 5 mL con pipeta volumétrica y depositar en un balón de 100 mL.
- Agregar 1 mL de EDTA al 5% y 2 mL de NaOH 5,5 N, aforar con agua y mezclar.
- Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 270 nm dentro de los 6 minutos después de
preparada.

Obtención de estándar 4-Epianhidrotetraciclinas

- Pesar 100 mg de estándar de tetraciclina.
- Llevar a un balón de aforado de 100 mL, disolver con HCl 0,01 N y aforar con el mismo
ácido.
- Filtrar.
- Leer la absorbancia de la solución a 430 nm, hasta una hora de preparada la solución.
- Utilizar agua como blanco.

e. Valoración (triplicado por grupo de laboratorio)

Valoración de tetraciclinas

- En un volumen volumétrico de 500 mL se deposita el equivalente a 50 mg de tetraciclina,

añadir aproximadamente unos 100 mL de agua, llevar al baño ultrasónico o agitar hasta
disolución.
- Aforar con agua destilada.
- De esta solución tomar 5 mL con pipeta volumétrica y depositar en un balón de 100 mL.
- Agregar 1 mL de EDTA al 5% y 2 mL de NaOH 5,5 N, aforar con agua y mezclar.
- Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 270 nm dentro de los 6 minutos después de
preparada.

Valoración 4-Epianhidrotetraciclinas
- Pesar una cantidad equivalente a 100 mg de tetraciclina.
 - Llevar a un balón de aforado de 100 mL, disolver con HCl 0,01 N y aforar con el mismo
ácido.
- Filtrar.
- Leer la absorbancia de la solución a 430 nm, hasta una hora de preparada la solución.
- Utilizar agua como blanco.

f. Uniformidad de contenido
- Determinar la uniformidad de contenido en la forma farmacéutica adquirida, analizando
el porcentaje de contenido con respecto al contenido neto ver anexo 2.
- Si la dosis ≥25 mg y proporción de Fármaco es ≥25%, se determinara la uniformidad de
contenido por regla de tres con la relación del peso neto medio y el promedio de la
valoración.
- Si la dosis <25 mg o <25% se deberá analizar cada forma farmacéutica.
- Verificar en la monografía para la forma farmacéutica analizada la cantidad declarada de
principio activo, con los rangos determinar el valor T, con el valor T determinar que
formula debemos usar según el caso en el que estemos para determinar el valor de M y
la fórmula de AV a usarse ver anexo 3.
- Elaborar una tabla de resultados como la expuesta en el anexo 4.

g. Controles físicos
Determinar desintegración, friabilidad y dureza cuando corresponda, se seguirá el
procedimiento descrito en el manual de cada equipo.
h. Identificación
Con ácido sulfúrico las tetraciclinas producen una gama de colores que van desde el
morado, amarillo café y rojo.
4.3 Manejo de residuos, Tratamiento y etiquetado

Desechos Farmacéuticos: Son aquellos medicamentos caducados, fuera de

especificaciones y residuos de sustancias que han sido empleadas en cualquier tipo de
procedimiento, dentro de los cuales se incluyen desechos producidos en laboratorios
farmacéuticos que no cumplan los estándares de calidad, incluyendo sus empaques.

Residuo Tratamiento Etiquetado

HCl Diluir con agua N/A
desechar en el lavabo
 NaOH Diluir con agua N/A
desechar en el lavabo
EDTA Diluir con agua N/A
desechar en el lavabo
Cajas y blíster Destruir , eliminar en la N/A
basura
Polvos sobrantes Ninguno - Llenar registro de
ingredientes activos
- Colocar en el recipiente
tabletas Moler etiquetado como residuos
sólidos.
Cápsulas Vaciar y colocar el
contenido y la capsula
en desechos sólidos

4.4 Lecturas adicionales sugeridas

Capítulos USP 41
<701> Desintegración
<857> Espectroscopia UV
<905> Uniformidad de unidades de dosificación
5. Cuestionario
a. Buscar un método de identificación discutir sobre su fundamento.
b. Añadir el espectro infrarrojo correspondiente al estándar de ampicilina
6. Referencias bibliográficas

ARCSA. (19 de 05 de 2020). Base de datos ARCSA. Obtenido de

https://www.controlsanitario.gob.ec/base-de-datos/
Gennaro, A. (2000). Remington Farmacia. USA: Editorial medica panamericana S.A.
Korolkovas, A., & Burckhalter, J. (1983). Compendio esencial de química farmacéutica.
España: REVERTÉ.
Laurence L. Brunton, PhD. (2007 undécima edición en español). Goodman & Gilman
Las bases farmacológicas de la TERAPÉUTICA. Colombia: McGRAW-HILL
INTERAMERICANA EDITORES, S.A. de C. V.
Perez, V., Medina, O., & Núñez, W. (28 de 11 de 2014). doi: 10.11144/Javeriana.SC19-
1.taci. Recuperado el 27 de 05 de 2020, de Técnicas analíticas contemporáneas
para la identificación de residuos de sulfonamidas, quinolonas y cloranfenicol:
http://www.scielo.org.co/pdf/unsc/v19n1/v19n1a01.pdf
Rowe, R., Sheskey, P., & Quinn, M. (2009). Handbook of Pharmaceutical Excipients.
USA: Pharmaceutical Press and American Pharmacists Association.
USP41. (2018). FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMÉRICA
Cuadragésima Primera Revisión. 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD
20852,Estados Unidos de América: THE UNITED STATES
PHARMACOPEIAL CONVENTION.