Informe de laboratorio de Síntesis orgánica (2022) practica N °4

4/11/2022

Síntesis de fluoresceína:
Emisión y absorción de luz
Laura Sofia Ortega Garzón
Universidad del Quindío, Facultad de Ciencias Básicas y Tecnológicas, Programa de Química.
Código:1001289491
Docente: Fernando Agudelo Aguirre.

Resumen:

Se llevó a cabo la síntesis de la fluoresceína mediante una reacción de sustitución electrofílica

aromática del resorcinol sobre el anhídrido ftálico. Se obtuvo 0, 304 g del compuesto, el cual
se analizó mediante espectroscopia infrarroja, y se determinó el porcentaje de rendimiento de
la reacción el cual fue de 93,51%.
Palabras Clave: Infrarrojo, fluoresceína, sustitución electrofilica aromática.

Introducción
Las sondas fluorescentes son compuestos químicos que poseen la capacidad de emitir fotones después
de ser excitados con una longitud de onda adecuada y que debido a su alta sensibilidad, selectividad
y respuesta rápida sirven para visualizar analitos con una alteración mínima en células vivas, tejidos
y órganos. Debido a esto, se han convertido en herramientas indispensables para la obtención de
información dinámica sobre la localización y cuantificación de moléculas de interés. (Vasques &
A.Álvarez, 2021)
La acetanilida es una sustancia química solidad e inodora con apariencia de hoja o copo. Esta también
es conocida como la denilacetamida y antiguamente era conocida por el nombre de marca antifebril.
La fluoresceína es un pigmento fluorescente que tiene múltiples aplicaciones en serigrafía, en
microbiología, etc., ya que se le utiliza como medio de contraste. Se obtiene mediante una reacción
de sustitución electrofílica aromática (SEAr) del resorcinol sobre el anhídrido ftálico. (gonzales,
2016)

Fig 1. Reacción del resorcinol y el anhídrido ftálico.

Además, la fluoresceína es un compuesto que puede utilizarse como indicador ácido-base pues el
color de sus disoluciones depende del pH. Tal diferencia es más evidente si se analizan los espectros

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de absorción respectivos en la región del ultravioleta-visible, UV- Vis (consultar el anexo C),
mostrados en la figura. Dichos espectros se obtienen cuando la molécula en cuestión es irradiada con
radiación electromagnética del intervalo que va de 300 a 800 nanómetros (nm). Los espectros
obtenidos son una gráfica de las longitudes de onda que la molécula en cuestión absorbe, pero el color
que observamos es en realidad la combinación de aquellas longitudes de onda que la molécula nos
devuelve. (Agudelo, 2022)
En la práctica realizada se observó y se analizó una reacción del anhídrido ftálico y el resorcinol para
crear un compuesto fluorescente a partir de un ácido o una base.
El objetivo de esta práctica es el de comprender la formación de compuestos fluorescentes.

Materiales:
 Agitador de vidrio.
 Balanza de cuatro cifras decimales.
 Beaker de 25 mL
 Beaker de 50 mL.
 Beaker de 400 mL.
 Equipo para filtración al vacío (matraz Kitasato pequeño, embudo Buchner,
bomba de vacío y
 manguera).
 Espátula metálica.
 Estufa eléctrica.
 Hojas de papel filtro.
 Lámpara ultravioleta
 Mortero con pistilo.
 Pipeta graduada de 10 mL.
 Pipetas Pasteur.
 Pinza metálica para tubo de ensayo.
 Placa de calentamiento.
 Probeta de 100 mL.
 Termómetro (0-300 ºC).
 Tubo de ensayo de 125 x 10 mm.
 Tubos de ensayo pequeños

Reactivos:
 Ácido clorhídrico concentrado.
 Ácido sulfúrico concentrado, H2SO4.
 Ácido sulfúrico para utilizar como solución de baño maría.
 Agua destilada.
 Anhídrido ftálico, C8H4O3.
 Frasco de desechos químicos.
 Resorcinol (o m-dihidroxibenceno) C6H6O2.
 Solución ácido clorhídrico 1.0 M.
 Solución NaOH 1.0 M.

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Procedimiento
En un tubo de ensayo de 125 x 10 mm se colocan 0.15 g de anhídrido ftálico y 0.22 g de resorcinol
que se han molido finamente en un mortero. Se añaden 0.05 mL de ácido sulfúrico (o bien 1 gota) y
la mezcla se calienta a 180°C hasta que se observe la formación de una masa sólida de color café
oscuro, lo cual ocurre 20 a 30 minutos más tarde. El contenido del tubo se vierte con mucho cuidado
en una mezcla de 2 mL de agua destilada y 0.1 mL de ácido clorhídrico contenidos en un vaso de
precipitado de 25 mL. Para extraer el resto de fluoresceína que permanece pegada al tubo de ensayo,
se calienta el tubo con un poco de agua y se agrega a la primera porción. La mezcla se calienta por
otros 10 minutos y, con la ayuda de una varilla de vidrio, se procura desintegrar la fluoresceína sólida.
Se filtra a vacío sobre un papel previamente pesado y se lava con un poco de agua helada. El
precipitado se seca y pesa para calcular el rendimiento de la reacción.
Con unos 3 mL de los lavados, en un pequeño vaso de precipitado se observa el color de la luz
reflejada y el efecto de la luz de una lámpara ultravioleta, procurando no mirar directamente
la luz UV y usando la onda corta de 370 nm. En otro vaso se añaden 5 mL de una disolución 1 M de
hidróxido de sodio, se agrega un poco de fluoresceína recién preparada, y se observan la luz reflejada
y el color de la disolución bajo luz UV. En un matraz pequeño se colocan 0.5 mg de fluoresceína y
se agregan 10 mL de disolución1.0 M de HCl; en otro se agregan 10 mL de agua destilada y en un
tercero 10 mL de solución 1.0 M de NaOH. A continuación, se obtienen los espectros UV-Visible de
las tres disoluciones y se comparan.

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Diagrama de flujo

0.15 g

0.22 g

macerar

0.05 mL

H2SO4

30 min Calentar
180°C

Calentar

Filtrar

Residuo Filtrado
HCl
1M
NaOH
1M Observación UV
I. rojo Pesar Pto. de fusión
Observación UV

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Mecanismo de reacción

Figura 2: mecanismo de reacción de la síntesis de la fluoresceína

Resultados y discusión:
Cálculos para el rendimiento óptimo:
A partir de los datos que vistos en la etiqueta se realizó el procedimiento para encontrar las moles
de la reacción, obtener el porcentaje teórico de la reacción y realizar el porcentaje de rendimiento.
Resorcinol: PM= 110.114g/mol

𝟗𝟖 𝒈 𝒔𝒕𝒐 𝒎𝒐𝒍
𝟎. 𝟐𝟐𝒈 𝒓𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍 𝒙 𝒙
𝟏𝟎𝟎 𝒈 𝒔𝒍𝒏 𝟏𝟏𝟎. 𝟏𝟏𝟒𝒈
= 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟗𝟓𝟕 𝒎𝒐𝒍 𝒓𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍

Anhidro ftálico: PM= 148.116 g/mol

𝒎𝒐𝒍
𝟎. 𝟏𝟓𝟕 𝒈 𝑨𝒏𝒉𝒊𝒅𝒓𝒐 𝒇𝒕𝒂𝒍𝒊𝒄𝒐 𝒙
𝟏𝟒𝟖. 𝟏𝟏𝟔 𝒈
= 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟎𝟓𝟗 𝒎𝒐𝒍 𝑨𝒏𝒉𝒊𝒅𝒓𝒐 𝒇𝒕𝒂𝒍𝒊𝒄𝒐

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Luego se halla cual es el reactivo limite y cuál es el exceso del Resorcinol y del Anhidro ftálico
(cuya relación es de 2:1 respectivamente):
𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆í𝒏𝒂
𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟗𝟓𝟕 𝒎𝒐𝒍 𝑹𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍 𝒙 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟗𝟕𝟖𝒎𝒐𝒍 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆í𝒏𝒂
𝟐 𝒎𝒐𝒍 𝑹𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍

𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆𝒊𝒏𝒂
𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟎𝟓𝟗 𝒎𝒐𝒍 𝑨𝒏𝒉𝒊𝒅𝒓𝒐 𝒇𝒕𝒂𝒍𝒊𝒄𝒐𝒙 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟎𝟓𝟗 𝒎𝒐𝒍 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆𝒊𝒏𝒂
𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝑨𝒏𝒉𝒊𝒅𝒓𝒐 𝒇𝒕𝒂𝒍𝒊𝒄𝒐

En donde se descubrió que el reactivo limitante es el Resorcinol por lo tanto este se utilizara para
descubrir las moles teóricas del producto:

𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆𝒊𝒏𝒂 𝟑𝟑𝟐, 𝟑𝟎𝟗𝟖 𝒈 𝒈 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆𝒊𝒏𝒂

𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟗𝟓𝟕 𝒎𝒐𝒍 𝑹𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍 𝒙 𝒙
𝟐 𝒎𝒐𝒍 𝑹𝒆𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊𝒏𝒐𝒍 𝒎𝒐𝒍
= 𝟎. 𝟑𝟐𝟓𝟏 𝒈 𝒇𝒍𝒖𝒐𝒓𝒆𝒔𝒄𝒆𝒊𝒏𝒂

Al final, se obtuvo que 0.3251 g serían los gramos teóricos obtenidos de la fluoresceína.
A la hora de pesar la muestra experimental se obtuvo que esta pesaba 0.304 g, a partir de la
siguiente formula se hallará el rendimiento de la fluoresceína.

𝑤 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
𝑅𝑒𝑛𝑑 = 𝑥 100%
𝑤 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜𝑠
0.304 𝑔
𝑅𝑒𝑛𝑑 = 𝑥 100%
0.3251 𝑔

𝑅𝑒𝑛𝑑 = 93.51%

Discusión
El rendimiento de una reacción es la cantidad de producto producido por una reacción química que
determina la eficiencia de esta reacción, sin embargo, no todas son 100% efectivas. Aun así, se obtuvo
un porcentaje de rendimiento elevado. Por lo que la muestra obtenida de fluoresceína tiene un buen
rendimiento. (León, 2022)

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Espectro Infrarrojo

Discusión:
Se pueden diferenciar distintas bandas vibraciones tales como, tensión C=O en 1709 cm-1-1635 cm-1,
tensión asimétrica perteneciente a dobles enlaces conjugados C=C en 1586 cm-1-, tensiones C=C del
anillo aromático en 1463 cm-1, interacciones de flexión (O-H) y tensión (C-O) en 1388 cm-1,
flexiones en el plano correspondientes al enlace C-H aromático en 1310cm-1, 1267 cm-1, 1206 cm-1,
1168 cm-1, tensión simétrica del ftalato en 976 cm-1, una tri-sustitución del anillo aromático (7,8,9)

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en 2112 cm-1,1984 cm-1,1928cm-1, una disustitución del anillo aromático (1,2) en 755 cm-1 y un
balanceo fuera del plano de los enlaces del anillo aromático en 455 cm-1.. (Mcmurry, 2008)
Conclusiones:
 En la obtención de la fluoresceína se utiliza con un anhídrido ftalico y con el resorcinol el
cual será una reacción 1:2 respectivamente, en donde el reactivo limite será el resorcinol.
 Se pudo corroborar mediante el análisis del compuesto obtenido que el resorcinol y
anhídrido ftálico son los precursores de la fluoresceína.
 Después de haber realizados los respectivos análisis y cálculos pertinentes se pudo
evidenciar que se obtuvo un porcentaje de rendimiento del 93.51%
 La obtención de la Fluoresceína se puede lograr utilizando Anhídrido Ftálico y Resorcinol
en medio ácido.

Cuestionario:
1. Consulte la estructura de al menos otros dos pigmentos fluorescentes.
Rodamina
Rodamina es el nombre de una familia de compuestos orgánicos heterocíclicos fluorescentes, basados
en el xanteno. Pueden considerarse derivados de la fluoresceína.1 Algunos componentes de esta
familia son la rodamina 6G, la rodamina B y la rodamina 123. Se utilizan como colorantes y como
medio amplificador en los láseres de colorante. También se utilizan a menudo como un tinte indicador
en el agua para determinar el volumen, la velocidad y las direcciones de flujo y transporte.
Su detección es fácil y poco costosa empleando instrumentos llamados fluorómetros. Los colorantes
de la familia de la rodamina se utilizan en aplicaciones de biotecnología, tales como la microscopia
de fluorescencia, citometría de flujo, la espectroscopia de correlación de fluorescencia, y los
ensayos ELISA.

Fig 2. Rodamina

Tomado de (Pavia et al, 2005)

Las rodaminas son solubles en agua, metanol y etanol. En general, presentan cierta toxicidad.

Cumarina

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La cumarina es un compuesto químico orgánico perteneciente a la familia de las benzopironas, cuyo
nombre según la IUPAC es 2H-cromen-2-ona. En su estado normal (estándar) se caracteriza por una
estructura cristalina e incolora. A este esqueleto se le pueden adicionar diferentes residuos formando
la familia de las cumarinas. Las cumarinas se consideran un grupo de metabolitos secundarios de las
plantas. La cumarina tiene valor clínico en sí misma, como modificador de edemas. Se sabe que las
benzopironas cumarínicas, como la 5,6 benzopirona, benzopirona 1,2, diosmina, estimulan los
macrófagos para degradar el albumen extracelular, lo que permite una reabsorción más rápida de los
líquidos edematosos.

Fig 3. Cumarina
Tomado de (Pavia et al, 2005)
2. ¿Por qué es diferente el color de la disolución de fluoresceína en medio ácido, básico y neutro?
¿Qué cambios estructurales se producen en la molécula a consecuencia del medio ácido o básico?
El cambio de color de la fluoresceína cambia en medio acido, básico y neutro debido a que uno de
los factores que afecta la fluorescencia en una sustancia es el cambio de pH. La presencia de grupos
donadores de electrones, como -NH2 y -OH favorece la fluorescencia, puesto que aumentan
la probabilidad de transición entre el estado siguiente de menor energía vibracional y
el estado fundamental. La introducción de un átomo de número atómico elevado en un sistema de
electrones π suele aumentarla fosforescencia, en detrimento de la fluorescencia. Los grupos aceptores
de electrones, como -COOH, -NO2, -N=N- y X disminuyen y, en ocasiones inhiben la fluorescencia.
(Agudelo, 2022)
-Cómo cambia la estructura Influencia del pH:
El espectro de fluorescencia de muchos compuestos aromáticos conteniendo grupos funcionales
ácidos o básicos es sensible al pH. Los cambios en la emisión de los compuestos de este tipo provienen
del número de especies resonantes diferentes que están asociadas con las formas ácidas o básicas de
las moléculas. Así, por ejemplo, la anilina, en medio neutro y alcalino presenta fluorescencia en la
región visible, pero dicha fluorescencia desaparece en medio ácido. Otro cambio se da al reaccionar
la fluoresceína con NaOH produce un nuevo compuesto llamado uranina intensificando la
fluorescencia de color amarillo verdoso. (Agudelo, 2022)

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Tomado de (Agudelo, 2022)

3. Consulte qué es un espectro de absorción y uno de emisión.
Espectro de absorción: se presenta cuando un sólido incandescente se encuentra rodeado por un gas
más frio, el espectro resultante muestra un fondo interrumpido por espacios oscuros denominados
líneas de absorción, porque el gas ha absorbido de la luz aquellos colores que éste irradia por sí
mismo. Suele ocurrir que unos cuerpos absorben sólo la radiación de unas determinadas longitudes
de onda y no aceptan absorber otras de otras longitudes, por lo que cada cuerpo, cada elemento
químico en la práctica, tiene su propio espectro de absorción, el cual se corresponde con su espectro
de emisión, al igual como si fuera el negativo con el positivo de una película. En la naturaleza se da
también que otros cuerpos absorben radiación de otros cuerpos dejando rayas negras. (gonzales, 2016)
Espectro de emisión: mediante suministro de energía calorífica, se estimula un determinado
elemento en su fase gaseosa, sus átomos emiten radiación en ciertas frecuencias del visible, que
constituyen su espectro de emisión. Ninguno de estos se repite. Por ejemplo, algunos de ellos lo hacen
en el infrarrojo y otros cuerpos no. Ello depende de la constitución específica de cada cuerpo, ya que
cada uno de los elementos químicos tiene su propio espectro de emisión. (gonzales, 2016)

4. ¿En qué difiere el color de las disoluciones observadas a simple vista de aquellas observadas bajo
luz ultravioleta? ¿Cómo se nombra tal propiedad de las sustancias?
La fluoresceína en medio acido es de color amarillo con fluorescencia baja, en medio básico posee
un color verde con fluorescencia muy intensa y finalmente en medio neutro es amarillo verdoso con
fluorescencia media. La propiedad en donde cambia el color es la fluorescencia que es un tipo
particular de luminiscencia, que caracteriza a las sustancias que son capaces de absorber energía en
forma de radiaciones electromagnéticas y luego emitir parte de esa energía en forma de
radiación electromagnética de longitud de onda diferente. (Vasques & A.Álvarez, 2021)
5. Observando los espectros UV-Vis obtenidos, ¿en qué difieren? ¿Tal diferencia es observable a
simple vista?
Estos difieren en la irradiación con la radiación electromagnética del intervalo que va de 300nm a
800nm. Los espectros obtenidos son una gráfica de las longitudes de onda que la molécula absorbe,
pero el color que observamos es en realidad la combinación de aquellas longitudes de onda que la
molécula nos devuelve. La radiación absorbida por la molécula le provoca una transición electrónica,

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que es un cambio en forma por la molécula y tamaño de su nube de electrones. Posteriormente la
molécula regresa a su estado inicial, o basal, disipando la energía recibida, vibrando, rotando
deformándose o emitiendo luz, este último fenómeno permite obtener los espectros de emisión de la
molécula. (Vasques & A.Álvarez, 2021)

Fig 4. Espectros UV-vis de la fluoresceína en solución básica y neutra

Fig 5. Espectros UV-vis visibles de fluoresceína obtenida en solución básica y acida

Fig 6. Espectros IR visibles de la fluoresceína (residuo)

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La diferencia en estos espectros ultravioletas visibles son las ondas generadas por las longitudes de
onda causadas por la excitación electrónica por los rayos UV con respecto a las emisiones de calor
del compuesto. (Vasques & A.Álvarez, 2021)

Bibliografía

Agudelo, F. (2022). SÍNTESIS DE FLUORESCEÍNA EMISIÓN Y ABSORCIÓN DE LUZ-LABORATORIO DE

ORGÁNICA III. UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO.

gonzales, A. (2016). Sintesis de Fluoresceína. Univesidad de Caldas.

León, A. (2022). Rendimiento de una reacción, teorica, real y porcentual. Obtenido de

http://www.dcb.unam.mx/CoordinacionesAcademicas/FisicaQuimica/WebAutoaprendizaj
e/temario/RENDIMIENTO%20DE%20UNA%20REACCION/Introduccion.pdf

Mcmurry, J. (2008). Determinación de la estructura: espectrometria de masas y espectrometria

infrarrojo. En J. Mcmurry, Quimica organica (págs. 425-428). CENGAGE learning.

Vasques, B., & A.Álvarez. (2021). Sondas fluorescentes. México: PADI.

Pavia, D. L., Lampman, G.M., Kritz, G. S. and Ángel, R.G. INTRODUCTION TO

ORGANICLABORATORY TECHNIQUES. A SMALL SCALE APPROACH. Brooks/Cole Laboratory
Series.2005

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