FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMATICAS

LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA

PROYECTO DE CURSO

TÍTULO DEL PROYECTO:

“EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DEL

COLORANTE ROJO #40 EN UNA BEBIDA
UTILIZANDO UN MÉTODO ALTERNO”

ESTUDIANTES:

BYRON JAVIER PACHECO MACIAS

BRYAN ENRIQUE MATAMOROS ACEBO

JULIO CESAR JAYA MUÑOZ

ALEX ANDRES RAMON VILLAVICENCIO

SAULO ALBERTO VERDEZOTO VERA

PARALELO: 201

PROFESORA: MARIA ISABEL SILVA

FECHA DE PRESENTACIÓN:
22/08/19
1. Título del Informe

“EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DEL COLORANTE ROJO #40 SINTÉTICO

(ALLURA) EN UNA BEBIDA UTILIZANDO UN MÉTODO ALTERNO”

2. Objetivos:

2.1 Objetivo General:

 Comprobar la eficacia de un método alterno para la extracción de fase
sólida del colorante Rojo #40 sintético (Rojo Allura)

2.2 Objetivos Específicos:

 Analizar y comparar el coeficiente de correlación de las muestras (jugos)
a estudiar.
 Determinar la eficacia del método comparando las curvas de calibración
del rojo 40 sintético con el colorante obtenido de las muestras.
 Evaluar que tanto representa la desviación estándar con respecto a las
muestras que tomaremos.

3. Introducción

Existen diversos métodos con una alta efectividad para la extracción de colorantes
presentes en jugos o bebidas naturales, uno de estos métodos es la extracción de la
fase sólida, que consiste en la implementación de unos cartuchos acondicionados
con partículas de sílice, en este proyecto se presentará un método alternativo en
donde se estudiará la efectividad de este en comparación con el método de
extracción de fase sólida utilizando los cartuchos, haciendo uso de materiales
simples que se pueden encontrar en un laboratorio de química. Como base del
estudio se tomará el colorante sintético Rojo #40 (Allura) y 2 tipos de jugos, donde
se analizará su curva de calibración y se hará uso de la ley de Beer-Lambert para la
caracterización de la muestra y las comparaciones de los resultados.
4. Marco teórico:

Filtración: se llama filtración al proceso de separación de partículas sólidas de un

líquido mediante el uso de un material poroso, esta técnica consiste en verter la
sustancia mezclada que se desea separar, sobre un filtro, el resultado que se obtiene
luego de la filtración se denomina filtrado (Martín et al., 2011).

Filtración al vacío: es una técnica de separación de mezclas sólido-líquido, se basa

en ejercer una fuerza impulsora para que el líquido pase a través del filtro, la fuerza
impulsora es generada por una bomba de succión conectada a un matraz de
Kitasato, este proceso permite acelerar la velocidad de filtración y se obtienen
mejores resultados (Martín et al., 2011).

Extracción de fase sólida: este proceso permite “limpiar” una muestra previa la
cuantificación o futura concentración del analito que está presente en la muestra. Se
llama extracción de fase sólida ya que el material de soporte utilizado es un sólido,
mediante el cual se hace pasar un líquido o un gas, los analitos se absorben en el
soporte y luego eluidos de acuerdo con sus afinidades entre el material absorbente y
la fase liquida/gaseosa utilizada (Peña et al., 2003).

Espectrofotometría: es uno de los métodos de análisis más utilizados y su

fundamentos está en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración, cuando se hace incidir luz monocromática, es decir
que posee una sola longitud de onda, sobre un medio homogéneo, una parte de la
luz que incide es absorbida por el medio mientras que otra parte es transmitida. La
muestra para analizar puede estar en fase líquida, gaseosa o sólida, esto va a
depender del compuesto y el tipo de absorción a medir (Serrano, 2004)
El espectro de absorción es independiente dependiendo del tipo de sustancia con la
que se esté trabajando, la cual se representa por una curva que representa la cantidad
de energía radiante absorbida (Absorbancia), por la sustancia en cada longitud de
onda del espectro electromagnético (Serrano, 2004).

Figura 1. Espectro de absorción de dos componentes diferentes.

Fuente: Guia_TP_2_Quimica_II_2010.pdf

El método espectrofotométrico se rige por la ley de Lambert y la Ley de Beer.

Ley de Lambert: cuando dentro de un medio homogéneo pasa luz monocromática,

la reducción de la intensidad de este haz de luz es proporcional al espesor del
medio, lo que se puede interpretar a que la intensidad de la luz que incide disminuye
al aumentar el espesor del medio absorbente (Peña et al., 2003)

Ley de Beer: esta ley relaciona la concentración de la sustancia con el haz de luz
incidente; cuando un haz de luz monocromática pasa a través de un medio
homogéneo la intensidad del haz disminuye al aumentar la concentración de la
sustancia absorbente (Peña et al., 2003)

Absorbancia: es la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia pura o

en solución, se relación con la transmitancia en función logarítmica (Peña et al.,
2003)

Transmitancia: es la razón entre la luz monocromática transmitida por una muestra

y la luz incidente sobre ella (Peña et al., 2003)
 Para determinar la concentración de una muestra se utiliza el método de la curva de
calibración, esta curva es una gráfica que relación la concentración de al menos
cinco soluciones con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda
máxima (Díaz et al., 2006)

Figura 2. Curva de calibración.

Fuente: Guia_TP_2_Quimica_II_2010.pdf

5. Materiales, equipos y reactivos:

Materiales:

 Vaso de Precipitación  Manguera

( 100 ml )  Espátula
 Pipeta 10 ± 0.1 ml  Balanza analítica
 Peras  Embudo Buchner
 Matraz de Kitasato  Probeta 25 ± 0.5 ml
 Matraz volumétrico 100 ±  Tubos de ensayo
0.1 ml  Jugo de arándano
 Gradilla  Cifrut tropical punch
 Papel filtro
 Bomba de succión
 Reactivos:

 Ácido clorhídrico 36.6%

 2-propanol 4% y 5%
 Metanol 99.8%

6. Procedimiento:

Colocar los medios de seguridad respectivos como mandil, guantes y gafas de

seguridad, para evitar posibles heridas y contaminaciones; este procedimiento será
utilizado para ambas muestras de jugo.

Preparación de Reactivos.

 Colocar 15 gotas de ácido clorhídrico 2 M en 500 ml de metanol para

obtener metano acidificado.
 Preparar el 2-propanol al 4% colocando 1.2 ml de2-propanol en 28.8 ml de
agua.
 Preparar el 2-propanol al 5% colocando 1.5 ml de 2-propanol en 28.5 ml de
agua

Extracción del colorante Rojo #40.

 Recortar el papel filtro a la medida del embudo de Buchner.

 Armar el sistema de filtración al vacío acoplando a la bomba de succión el
matraz de Kitasato y el embudo de Buchner.
 Acondicionar el papel filtro agregándole 5 ml del metanol acidificado y
luego 5 ml de agua destilada.
 Colocar 2 ml de la muestra de jugo e iniciar la filtración.
 Cambiar el matraz de Kitasato y comenzar el enjuague colocando 3 ml de 2-
propanlo al 4%, realizar este procedimiento 2 veces seguidas.
  Enjuagar con 3 ml de 2-propanol al 5%.
 Terminar con la filtración y reservar lo obtenido en un tubo de ensayo para
su posterior análisis.

Preparación de los estándares del Rojo #40 y su curva de calibración.

 Recortar papel aluminio en pequeños cuadros para utilizar la balanza

analítica.
 Pesar 0.0200 gr de colorante rojo 40 sintético en la balanza analítica y
colocarlo en 100 ml de agua destilada dentro de un matraz volumétrico; esta
será nuestra dilución base.
 Realizar 5 diluciones más en diferentes matraces volumétricos, con
proporciones 1/100, 3/100, 5/100, 8/100 y 10/100, es decir colocar 1, 3, 5, 8
y 10 ml de la dilución base en diferentes matraces volumétrico y completar
con agua destilada hasta llegar a la marca de 100 ml.
 Tomar una muestra en de cada matraz y colocarlos en un vial del
espectrofotómetro para proceder a medir la absorbancia.
 Realizar la curva de calibración utilizando la absorbancia y la concentración
de cada muestra.

7. Resultados:

(0,0215 g de Red #40 /100 ml

Disolución Base (D.B) Agua Destilada)
[215 PPM]

Tabla 1. Resultados del colorante rojo #40

Disoluciones Concentración PPM Absorbancia

1ml de D.B. /100
1 ml de Agua 2,15 PPM 0,019
Destilada
2 3ml de D.B. /100 6,45 PPM 0,102
ml de Agua
 Destilada
5ml de D.B. /100
3 ml de Agua 10,75 PPM 0,285
Destilada
8ml de D.B. /100
4 ml de Agua 17,2 PPM 0,464
Destilada
10ml de D.B. /100
5 ml de Agua 21,5 PPM 0,909
Destilada

Coeficiente de Correlación Ecuación de la Recta (Y=A+Bx)

R = 0,9583 A = -0,1462 B = 4,32 ×10−2

Gráfico 1. Curva de calibración del colorante Rojo #40 sintético

Tabla 2. Resultados de las extracciones del colorante en “Cifrut Tropical Punch”

Cifrut Tropical Punch (1lt)

Presencia de Red #40 Sintético Especificado
Masa de
Extracciones PPM Masa de la Volumen de colorante
Longitud
y Cantidad Absorbancia mg muestra la muestra Red #40
de Onda ( ) μ
Utilizada ¿ ( g) (ml) ( )
ml

Extracción #1
0,126 505 nm 6,3 8,09 8,14 12,82
(4 ml de Jugo)

Extracción #2
0,221 505 nm 8,5 8,39 8,43 17,92
(4 ml de Jugo)

Extracción #3
0,285 505 nm 9,98 8,14 8,19 20,44
(4 ml de Jugo)

Tabla 3. Resultados de las extracciones de colorante en “Nature’s Heart Jugo de

Arandano”

Nature’s Heart Jugo de Arándano (1lt)

Presencia de Red #40 Sintético No Especificado
Masa de
Extracciones PPM Masa de la Volumen de colorante
Longitud
y Cantidad Absorbancia mg muestra la muestra Red #40 (
de Onda ( ) μg
Utilizada ¿ ( g) (ml) ¿
ml
Extracción #1
0,142 505 nm 6,67 8,17 8,21 13,69
(4 ml de Jugo)

Extracción #2
0,185 505 nm 7,67 8,10 8,15 15,62
(4 ml de Jugo)

Extracción #3
0,077 505 nm 5,17 8,29 8,33 10,77
(4 ml de Jugo)
 Tabla 4. Resultado de las desviaciones en las extracciones de colorante.
Rojo #40 promedio
μg
Producto μg Desviacion estandar ( ) %DER
( ) ml
ml
Cifrut Tropical
17,06 3,88 22,76%
Punch
Nature’s Garden
13,36 2,44 18,28%
Jugo de Arándanos

Tabla 5. Resultados de la extraccion de colorante utilizando cartuchos SPE con

mayor desviacion estandar
Rojo #40 promedio
μg
Producto μg Desviacion estandar ( ) %DER
( ) ml
ml
Ocean Spray Diet
12,79 1,27 9,89%
Cranberry
Mondo 38,22 2,31 6,04%

8. Cálculos

Cálculos de las disoluciones del Rojo #40, creación y análisis de la curva.

1) Se realiza una disolución base de RED#40 en agua destilada de la cual se obtienen 5

disoluciones para realizar la curva del colorante tomando los parámetros
absorbancia/concentración.

Disolución base: 0.0215g de colorante en 100 ml de agua. Tenemos que llevar la

concentración a PPM (mg/l)
 0.0215 g
∗1000 mg
100 ml
∗1000 ml
1g
Concentración base en PPM = =215 PPM
1l

2) Se crean 5 disoluciones a partir de la disolución base.

Concentración de las disoluciones.

Se usará la formula C 1 V 1=C 2 V 2

215 PPM∗1 ml
1. C 2= =2.15 PPM
100 ml
215 PPM∗3 ml
2. C 2= =6.45 PPM
100 ml
215 PPM∗5 ml
3. C 2= =10.75 PPM
100 ml
215 PPM 8 ml
4. C 2= =17.2 PPM
100 ml
215 PPM∗10 ml
5. C 2= =21.5 PPM
100 ml

Relación en ml
Disolución Concentración (PPM)
(D.B/agua)
1 1/100 2.15PPM
2 3/100 6.45PPM
3 5/100 10.75 PPM
4 8/100 17.2PPM
5 10/100 21.5 PPM

3) Se mide la absorbancia de cada solución y se hace la gráfica

absorbancia/concentración y se obtiene la ecuación de la recta y el coeficiente de
correlación.

Disolución Concentración (PPM) Absorbancia

1 2.15PPM 0.019
 2 6.45PPM 0.102
3 10.75 PPM 0.285
4 17.2PPM 0.464
5 21.5 PPM 0.909

Concentración/absorbancia
1

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 5 10 15 20 25

Ecuación de la recta: Y= A + BX

A= -0.1462

B= 0.0432

Y= Absorbancia teórica

X= Concentración (PPM)

Coeficiente de correlación= 0.9583

Cálculo y análisis de los datos de la extracción

1) Se mide la absorbancia del colorante extraído en 4ml de c/jugo y disuelto en 9ml de

2-propanol al 4.35% Se usa la absorbancia en la ecuación de la recta para encontrar
la concentración teórica en 4 ml de jugo.

Muestra Cifrut Absorbancia Concentración PPM

 1 0.126 6.3
2 0.221 8.5
3 0.285 9.93

Muestra Arándano Absorbancia Concentración PPM

1 0.142 6.67
2 0.185 7.67
3 0.077 5.12

Ecuación de la recta Y= A + BX X= (Y-A) /B

Y= absorbancia

X= Concentración

A= - 0.1462

B = 0.0432

Xc1= (0.126 + 0.1462)/0.0432 = 6.3 PPM

2) Se obtiene el volumen de cada resultado utilizando la densidad de la mezcla de 2-

propanol y agua y el peso de cada muestra en gramos.

Muestra Cifrut Masa (gramos) Volumen(ml)

1 8.09 8.14
2 8.39 8.43
3 8.14 8.19

Muestra Arándano Masa (gramos) Volumen(ml)

1 8.17 8.21
2 8.10 8.15
3 8.29 8.33
d = 0.9942

Vc1= 8.09/0.9942 = 8.14ml

3) Se calcula la masa de RED#40 en la solución multiplicando la concentración de
cada muestra por el volumen de cada muestra.

Muestra Cifrut Concentración PPM Volumen(ml) Masa µg

1 6.3 8.14 51.28
2 8.5 8.43 71.66
3 9.93 8.19 81.75

Muestra Arándano Concentración PPM Volumen(ml) Masa µg

1 6.67 8.21 54.76
2 7.67 8.15 62.51
3 5.12 8.33 43.06

m r =PPM∗V

mg
mr = ∗ml
l
ml∗1l
∗1000 µg
6.3 mg 1000 ml
mrc 1= ∗8.14
l 1mg

4) Se calcula el promedio de los resultados, su desviación estándar y su porcentaje de

desviación.
n

∑ xi
x́= i=1
n

Donde x barra es la media y la sumatoria de x sub i es la suma de todos los datos

observados y n es el número de observaciones

Esta fórmula se utiliza para conocer la media de la masa de colorante tanto en el cifrut
como en el nature´s heart y asi trabajar con un dato mas real, se puede aumentar la
precisión aumentando el tamaño de la muestra
 n 2

σ=
√ (∑ )
i=1
x i−x́

Donde sigma es la desviación estándar. Esta fórmula nos ayuda a sacar la desviación
estándar de los datos obtenidos y así saber en promedio que tan alejados están los
datos del valor de la media que es con el que vamos a trabajar

σ
CV = (100)
x́

Donde CV es el coeficiente de variación o porcentaje de desviación. Este coeficiente es

una representación de que tanto porcentaje de la muestra representa nuestra
desviación estándar y asi nos da una idea del error respectivo a los datos particulares

Usando el software estadístico mintab 19 tenemos las siguientes tablas

Estadísticas de la absorbancia obtenida en las muestras de cifrut tropical
punch
Error
estándar
de la
Variable Media media Desv.Est. Varianza CoefVar Mediana
adsorbancia del cifrut 0,2107 0,0462 0,0800 0,0064 37,98 0,2210

Estadísticas de la masa del colorante obtenido a partir de las muestras de

cifrut tropical punch
Error
estándar
de la
Variable Media media Desv.Est. Varianza CoefVar Mediana
colorante en el cifrut 17,06 2,24 3,88 15,07 22,76 17,92

Estadísticas de la absorbancia obtenida en las muestras de Nature’s Heart

Jugo de Arándano
Variable Media Error Desv.Est. Varianza CoefVar Mediana
estándar
 de la
media
adsorbancia del nature´s heart 0,1347 0,0314 0,0544 0,0030 40,38 0,1420

Estadísticas de la masa del colorante obtenido a partir de las muestras del

Nature’s Heart Jugo de Arándano

Error
estándar
de la
Variable Media media Desv.Est. Varianza CoefVar Mediana
colorante en el nature´s heart 13,36 1,41 2,44 5,96 18,28 13,69

9. Análisis de Resultados

Al comparar nuestros resultados con los resultados obtenidos con los resultados del
paper podemos apreciar cómo aunque nuestras respuestas tienen sentido el
coeficiente de variación es relativamente alto , este es un factor que nos indica que
tanto representa la desviación estándar con respecto a la media de los resultados.
Básicamente quiere decir que nuestros datos están relativamente más dispersos.

También se puede apreciar como el colorante en el cifrut está más concentrado que
el jugo de arándano natural y esto era lo que esperábamos ya que este último solo
tiene los colorantes que provenían de la fruta mientras que cifrut contenía colorante
sintético.

Además es importante que el al realizar la curva de calibración nuestro coeficiente

de calibración fue de 0,9583 mientras que en el paper fue de 0.998 y sabemos por la
teoría que en una situación ideal la relación es de 1 a 1 esto nos demuestra que el
proceso que se utilizó durante la practica fue menos exacto.

10. Recomendaciones
  Lavar bien los materiales antes de utilizarlos ya que pueden contener
residuos y pueden afectar los resultados.
 Al utilizar la bomba de vacío verificar que el papel filtro cubra todo el
embudo de Buchner para obtener una mejor filtración.
 Asegurarse de aforar correctamente los matraces volumétricos para
mantener el margen de error lo más reducido posible.
 Para reducir el error es conveniente aumentar el tamaño de la muestra

11. Conclusiones

 Como se puede observar en la tabla 2, los valores de la absorbancia difieren

en rangos muy considerables, por los cual esté método no es muy eficaz y no
es reproducible, ya que en el caso ideal las absorbancias deberían ser iguales
o con un rango de error extremadamente pequeño.
 El uso de los cartuchos para la extracción de fase sólida es muy importante
ya que tienen partículas derivadas de sílice con grupos de C18 y son buenos
absorbentes comparado con el papel filtro utilizado en la elaboración del
proyecto, este factor influye mucho en los resultados obtenidos y en la
eficacia del método ya que parte de la muestra de colorante se quedó
retenida en el mismo.
 Otros factores para tomar en cuenta en los resultados son los posibles errores
en las mediciones, la degradación de la muestra por efecto de la luz, el
manejo inapropiado del equipo y la pérdida de analitos en el filtro.

12. Bibliografía
Díaz, N.A., Ruiz, J.A.B., Reyes, E.F., Cejudo, A.G., Novo, J.J., Peinado, J.P., Meléndez-
valdés, F.T. & Fiñana, I.T. (2006). 8 . Espectrofometría : Espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas, 1–8.
Martín, I., Salcedo, R. & Font, R. (2011). Operaciones separación sólido-fluido. Mecánica
De Fluidos, 1–34.
Peña, A., Morales, J., Labastida, C. & Capella, S. (2003). Extracción en fase sólida como
una alternativa para el procedimiento de limpieza en la determinación de
 hidrocarburos aromáticos policíclicos por cromatografía de gases: Aplicación a
organismos marinos. Revista Internacional de Contaminacion Ambiental, 19, 13–23.
Serrano. (2004). El espectro electromagnético. Absorción visible-ultravioleta.
Instrumentación y Métodos de Análisis Quimico, 1–20.

13. Anexos

Figura 3. Sistema de extracción por Figura 4. Resultados de la extracción

bomba de vacío. de colorante.
Figura 5. Colorante utilizado para la Figura 6. Balanza de 4 dígitos utilizada
creación de la curva de calibración para la medición del colorante.

Figura 7. Disoluciones del colorante

Rojo #40