Determinación experimental de

Biomoléculas: Proteínas

Proteínas enzimas

Carbohidratos
Biomoléculas
Lïpidos

Ácidos
nucleicos
 Proteínas

• ¿Qué son ?
• Composición química
• Unidad: aminoácidos
• ¿Por qué son fundamentales?
• Clasificación de las proteínas
http://karin.fq.uh.cu/~cnv1/qf/prolab/Disciplinas/Bioqu%EDmica%20B%E1sica/Prote%EDnas/Relacion%20entre%20niveles%20estructurales.htm
 Clasificación por su función

Funciones
Actina
Estructural (Aparato arquitectónico de
la célula)

Inmunológica Anticuerpos

Actividad
Proteína Enzima
biológica

Mecanismos de
Fibrinógeno
barrera

Miosina
Contráctiles
( Musculo se contare)
Estructura de la proteína

α hélice (queratina)
β o de hoja plegada
(ejm fibrina )
Enlaces de la estructura terciaria
Interacciones hidrofóbicas
e interacciones de Van der
Waals

Puente de Esqueleto
hidrógeno del
polipéptido

Puente
disulfuro

Enlace iónico
 Desnaturalización de proteínas
reversible
Rompen enlaces débiles,
Estructura cuaternaria,
terciaria y secundaria pero
no la primaria

irreversible
Los agentes desnaturalizantes : Factores químicos o
físicos que producen la desnaturalización de las proteínas.
Los más comunes son:
- Temperatura
- pH
- polaridad del disolvente
- fuerza iónica
 Desnaturalización
• Ruptura de enlaces que dan la estructura
tercearia
 Qué son las enzimas?
• Proteínas
• Actividad catalítica
• Aceleran las reacciones químicas
Substrato H2O2
Sitio activo
Substrato
Sitio activo

Modelo molecular de Modelo esquemático

la catalasa de una enzima
Cómo funciona una enzima?
 Qué hacen las enzimas?
• Reducen la energía de activación
• Aceleran las reacciones químicas

Energía de
Energía

activación
Cómo se mide la actividad enzimática?
• Se mide en unidades internacionales (UI)

• Se puede determinar la actividad enzimática

concreta analizando la reacción desde diversos
puntos de vista:

- aparición de algún producto

- desaparición del sustrato
 Objetivos
• Identificar proteínas en una muestra

• Observar experimentalmente la
desnaturalización

• Observar la actividad enzimática e identificar

los factores que la afecten
 1. Desnaturalización de proteínas
• Someteremos una muestra que contiene
albúmina (proteína del huevo) a varias
condiciones que causan la desnaturalización
de las proteínas

• Usar un control (sólo albúmina)

 Procedimiento
1. Colocar 6 tubos de ensayo ( enumerados del 1 al 6) en una
gradilla y verter 1 ml de solución albumina a cada uno de ellos
( verificar que la solución albumina haya sido colada
adecuadamente.
2. Realizar los siguientes tratamientos en cada uno de ellos:
Tubo Actividad
1 Someter a baño maría por 3 minutos
2 Añadir 1 ml de acetona
3 Añadir 1 ml de acido sulfhídrico al 75%
4 Añadir 1 ml de cloruro de sodio al 20%
5 Añadir 1 ml de acido nítrico concentrado
6 Control ( solo albumina)

3. Observar y anotar en el cuadro los cambios ocurridos en cada uno

de los tubos. Anotar en cuales ha ocurrido la desnaturalización.
 2. Reacción de Biuret
Reacción química por la cual se identifica la presencia de proteínas
A la mezcla agregar 2 gotas de
1 Sulfato de Cobre al 1%

2) 1 ml agua destilada
albumina 1% 1 ml de NaOH al 40%
1) 1ml de solución de

Blanco
 2. Reacción de Biuret
• Reacción química por la cual se identifica la
presencia de proteínas

Proteína + NaOH + CuSO4 = Proteína con cobre

(violeta)

Agua + NaOH + CuSO4 = No hay cambio de color

ANOTAR LOS RESULTADOS

3. Reconocimiento de la catalasa
Higado carne papa pallar fresco pallar semilla

1mL H2O2
(sustrato)

Ordenar x actividad enzimática

burbujeo velocidad cantidad

 3. Reconocimiento de la catalasa
• Que reacción está ocurriendo en el tubo con la
catalasa? Está correcta la
estequiometría?
H2O2 + catalasa (en tejidos vivos) H2O + O2

2H2O2 + catalasa (en tejidos vivos) 2H2O + O2

 4. Reacción amilolítica

Cuáles son los controles? 1 2

3 4
1) 4 gotas de lugol
2) 3 gotas de almidón + 1 gotas de lugol
3) 3 gotas de almidon + 2 gotas de saliva+ 10 min + 1 gotas lugol
4 ) 2 gotas de saliva + 2 gotas de ácido sulfhídric+ 10min 2 gotas de almidón
luego de 7 minutos +1gotas de lugol
4. Reacción amilolítica

+ lugol = almidón con yodo

(marrón) (azul violeta)

+ amilasa + lugol = glucosa

(en la saliva) (marrón) (marrón)