se clasifican en coenzimas y cofactor.

Las
coenzimas son sustancias orgánicas y los
cofactores generalmente son iones
inorgánicos como el calcio, magnesio y zinc.
Debido a su naturaleza proteínica los enzimas
pueden ser afectadas en su actividad por
factores de tipo físico, temperatura, pH, fuerza
Guía de Laboratorio iónica, factores químicos e inhibidores.
MATERIALES Y EQUIPOS
Laboratorio de Biología II
Mechero
Biología Celular Palillos
Guantes
Temas: Enzimas Cajas petri.
Objetivo general Lancetas
Toallas de papel
Conocer lo relacionado con la catálisis Algodón estéril
enzimática en los medios biológicos. Pipetas
Goteros
. Objetivos específicos Cuchilla nueva
Reconocer en la catálisis enzimática Pinzas para tubo de ensayo
Tubos de ensayo
la enzimas y el sustrato .
Baño de maría
Determinar el efecto del pH, la Gradilla
temperatura y la concentración en la Vidrio de reloj
actividad enzimática Bisturí
Identificar la importancia de la Termómetro
catálisis enzimática en los medios Probetas
biológicos Cinta de enmascarar
Pitillos
Introducción Jeringas de 1, 5, 10 ml
Balanzas
Las enzimas son proteínas que disminuyen la Mortero
cantidad de energía que se requiere para Cucharas desechables
realizar una reacción, la actividad catalítica es
especifica. Para realizar su función se unen a REACTIVOS
las moléculas por catalizar, llamadas sustrato
Alcohol
(S) en el sitio activo para establecer un
Agua destilada
complejo llamado enzima- sustrato (ES), el
Agua en bolsa
cual se puede disociar en sus moléculas
Lugol
originales enzima y sustrato o bien generar
Peróxido de hidrogeno al 6%
producto(P) y la enzima libre.
Hielo
Las enzimas se clasifican de acuerdo a la Cloruro férrico (cristales)
reacción que catalizan en oxidoreductasas, Ácido acético
transferasas, hidrolasas, isomerasas, ligasas, Hidróxido de sodio o amoniaco
liasas. Anticoagulante (citrato de sodio)
Benedict
Algunas enzimas necesitan para su MnO2
funcionamiento una o más moléculas de
carácter no proteico, que participan de manera
directa en la reacción química durante la
catálisis. Se le denomina grupos prostéticos y
MATERIAL BIOLÓGICO
Muestra de hígado de cerdo u
otro animal
NOTA: Para realizar las prácticas con
el extracto de hígado, los estudiantes
previamente deben tomar un trozo de
hígado de animal en buen estado y
macerarlo en un mortero con agua
destilada. Posteriormente deben
filtrarlo con un trozo de tela o algodón
y conservar el filtrado para los
procedimientos en el laboratorio.
NOTA: Para las próximas prácticas
use tubos de ensayo grandes.
Las muestras de la solución de
hidrógeno se deben tener por
separado en tubos de ensayos antes
de añadir la muestra de extracto de
hígado en los tubos de ensayos. Todo
con el objeto de que las soluciones de
peróxido sean añadidas al mismo
tiempo en cada uno de los tubos que
contengan la muestra.
PROCEDIMIENTOS
Parte 1- Efecto de la cantidad de enzima
Tome 4 tubos de ensayo y
rotúlelos tubos de la siguiente manera
Numero de Cantidad en Peróxido de
tubo ml de hidrogeno
extracto de
hígado
1 0 2ml
2 1.0ml 2ml
3 2.0ml 2ml
4 4.0ml 2ml
Una vez realizado, agite cada uno de
los tubos y posteriormente añada al
mismo tiempo 2ml de peróxido de
hidrógeno en cada uno de los tubos.
Describa lo observado y justifique
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¿Cómo puede la cantidad de
enzima afectar la actividad
enzimática?
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Parte 2. Efecto de la cantidad de
sustrato
•Tome 5 tubos de ensayo y rotúlelos
tubos de la siguiente manera
Numero de Cantidad Peróxido de
tubo en ml de hidrogeno
extracto de
hígado
1 1.0ml 0ml
2 1.0ml 1ml
3 1.0ml 2ml
4 1.0ml 4ml
5 1.0ml 6ml
•Una vez realizado, agite cada uno de
los tubos y posteriormente añada al
mismo instante las siguientes
cantidades de peróxido de hidrógeno:
tubo 1 ; 0ml; tubo 2 : 1ml ; tubo 3 : 2ml
; tubo 4 : 4ml ; tubo 5 : 6ml . Describa
lo observado y justifique
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¿Cómo puede la cantidad de
sustrato afectar la actividad
enzimática?
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 Parte 3- Efecto de la temperatura Una vez realizado, agite cada uno de los tubos
y posteriormente añada al mismo instante 2ml
•Tome 3 tubos de ensayo y rotúlelos tubos de peróxido de hidrógeno en cada uno de los
la siguiente manera tubos.
Nota : Espere que el material que este Describa lo observado y justifique
dentro de los tubos tenga la misma
temperatura que la de los respectivos ------------------------------------------------
baños. --------------------------------------------------
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Numero Cantidad Temperatura Peróxido --------------------------------------------------
de tubo --------------------------------------------
en ml de de
¿Cómo puede el pH afectar la
extracto hidrogeno
velocidad de la actividad
de
enzimática?
hígado
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1 2 Ambiental 2ml --------------------------------------------------
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2 2 Agua 2ml
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hirviendo
3 2 Baños con 2ml Parte 5- Actividad enzimática
hielo
•Tome 3 tubos de ensayo y rotúlelos tubos de
Una vez realizado, agite cada uno de los tubos la siguiente manera
y posteriormente añada al mismo instante 2ml
Numero de tubo Muestra
peróxido de hidrógeno en cada uno de los
tubos. Describa lo observado y justifique 1 5 ml de agua
2 1 gramo de FeCl 3+
------------------------------------------------------------- 5ml de H20
------------------------------------------------------------- 3 1ml de extracto de
------------------------------------------------------------- hígado
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¿Cómo puede la temperatura afectar la Una vez realizado, agite cada uno de los
velocidad de la actividad enzimática? tubos, tome la temperatura de cada uno de
ellos y posteriormente añada al mismo tiempo
------------------------------------------------------------- 2ml peróxido de hidrógeno en cada uno de los
------------------------------------------------------------- tubos. Tome nuevamente la temperatura
------------------------------------------------------------- Describa lo observado y justifique lo
------------------------------------------------------------ sucedido
Parte 4 –Efecto del pH
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Tome 3 tubos de ensayo y rotúlelos tubos de la -------------------------------------------------------------
siguiente manera -------------------------------------------------------------
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Numero Cantidad pH Peróxido ------------------------------------------------------------
de tubo en ml de de
extracto hidrógeno PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
hepático
¿Describa la forma en que se puede inhibir

1 2ml Ácido 2ml la actividad enzimática?

acético (5 -------------------------------------------------------------
gotas) -------------------------------------------------------------
2 2ml Neutro 2ml -------------------------------------------------------------
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3 2ml Amoniaco(5 2ml -------------------------------------------------------------
gotas)
¿Explique porque la interacción de enzima
– sustrato es análoga a lo de una cerradura
y su llave?
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¿Cómo puede la fiebre alta afectar la
actividad enzimática, explique desde el
punto de vista enzimático?
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¿Cuál es el fundamento de que una enzima
funcione mejor a determinado pH y sea no
funcional a otro? . Justifique su respuesta
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¿Explique el burbujeo que se genera al
aplicar peróxido de hidrógeno en una
herida?. Fundamente su respuesta
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