BIOLOGIA CELULAR

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR

ORREGO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA
SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE ENFE –
ESTO - OBST

INFORME DE PRÁCTICA N°2

RECNOCIMIENTO DE PROTEÍNAS Y
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Autor(a):
 Osorio Mendoza Sandra Geli
 Romero Altamirano Alondra Xiomara
 Sosa Álamo Vania Fabiola
 Ullauri Villanueva Maria de los Angeles
 Vega Sifuentes Fabricio Agustín Eduardo

Docente de Práctica:
Mg. / Dr. Miriam Jesús Diaz Ríos

Trujillo – Perú

1 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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INFORME DE PRÁCTICA N° 2 RECONOCIMIENTO DE

PROTEÍNAS Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

I. INTRODUCCIÓN

Es necesario llevar a cabo de manera eficiente y selectiva las reacciones químicas para la
mantención de la vida. Para que dichas reacciones químicas, que son en general muy
lentas, ocurran en una escala de tiempo compatible con la vida, se requiere de
catalizadores que aceleren la velocidad de las reacciones. Los catalizadores biológicos
son las enzimas, que, con excepción de un grupo pequeño de RNA catalíticos son
proteínas. Las proteínas median prácticamente todos los procesos que tienen lugar en la
célula, por lo que presentan una gran diversidad de funciones: las proteínas forman
parte de las hormonas, anticuerpos, fibras musculares, antibióticos, transportadores,
enzimas, receptores, entre otras. Son las macromoléculas más abundantes y están
presentes en todas las células y en cada parte de ellas. Más aún, son el instrumento
molecular a través del cual la información genética es expresada. Las proteínas de todos
los organismos, desde los más simples a los más complejos, están construidas en base a
los mismos 20 aminoácidos que se unen entre sí a través del enlace peptídico, para dar
origen tanto a la estructura lineal (estructura primaria) como tridimensional (estructura
terciara). A partir de diferentes secuencias y número de aminoácidos, los diferentes
organismos construyen una diversidad de proteínas con diferentes funciones. Conocer
la estructura y las propiedades de las proteínas es entonces determinante para
entender las numerosas funciones que ellas realizan, incluyendo la catálisis.
Las enzimas son catalizadores biológicos que aceleran la velocidad de las reacciones
bioquímicas a temperatura y pH fisiológicos. Las enzimas son específicas y su actividad
puede ser regulada a varios niveles.

2 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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II. OBJETIVOS.

 Entender que la estructura y propiedades de las proteínas son

determinantes para la función catalítica (enzimática).

 Saber si una sustancia desconocida, es una proteína utilizando el

reactivo de Biuret el cual detecta la presencia de proteínas, péptidos
cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en
sustancias de composición desconocida.

 Determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, a través

de la reacción xantoproteica, empleando ácido nítrico concentrado. La
prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos
portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de
tirosina.

 Observar la estabilidad de las proteínas en función de la temperatura.

 Observar la desnaturalización de proteínas debida a cambios de pH.

3 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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III. RESULTADOS.

Reacción de Biuret
Muestra 1. Agua 2. Glicina + 3. Triptófano. 4. Albúmina 5. Caseína 6. Grenetina
agua + agua
Rx. de Biuret (+/-) - - - + + -

Represente el tubo

Reacción Xantoproteica
Muestra 1. Agua 2. Glicina + 3. Triptófano + 4. Albúmina 5. Caseína
agua agua
Rx Xantoprot. (+/-) - - - + +

Represente el tubo

Desnaturalización proteica
Muestra
Temperatura pH Alcohol Etílico
Soluble/insoluble

Represente el tubo

¿Qué otros factores pueden causar la desnaturalización proteica?

Ácidos fuertes, bases fuertes.

4 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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Actividad Enzimática de la Amilasa salival

Muestra
Efecto de la temperatura Efecto del pH
T° / pH Hielo 37°C 90°C 4 7 10

Represente el tubo

Rx. con Lugol En ello pudo Este es más Indicación de

romper los óptima para el la enzima nula X
carbohidratos trabajo de las
que estaban enzimas
unidos

Actividad Enzimática de la Amilasa salival

Muestra
Especificidad enzimática
Almidón Peptona Lactosa Agua Almidón

Represente el tubo

Rx. con Lugol x x

Rx. de Biuret x
Rx. con Fehling x x

5 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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Efecto de la concentración de
sustrato

- Velocidad máxima ocurre cuando todos los sitios de la enzima están

totalmente saturados con el sustrato y ya no hay variaciones.

- Km (constante de Michaelis) es una concentración de sustrato a la cual el

50% de los sitios activos van a estar ocupados. Mientras más pequeño
mayor afinidad.

6 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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VI. CONCLUSIONES:
-La reacción xantoproteica es un procedimiento químico utilizado para
determinar presencia o ausencia de aminoácidos aromáticos, tales como la
tirosina y el triptófano, que pueden estar de forma libre o constituyendo proteínas
solubles, péptidos o polipéptidos.
-La prueba de biuret también conocida como prueba de Piotrowski, es
una prueba química que se utiliza para detectar la presencia de enlaces
peptídicos. En presencia de péptidos, un ión de cobre (II) forma complejos de
coordinación de color malva en una solución alcalina. Se han desarrollado varias
variantes de la prueba, como la prueba BCA y la prueba de Lowry modificada.
- La desnaturalización de las proteínas consiste en la pérdida de la estructura
tridimensional por distintos factores ambientales, como temperatura, pH o ciertos
agentes químicos. La pérdida de la estructura da como resultado la pérdida de la
función biológica asociada a esa proteína, ya sea enzimática, estructural,
transportadora, entre otras. La estructura de la proteína es altamente sensible a
los cambios. La desestabilización de un solo puente de hidrógeno esencial puede
desnaturalizar la proteína
-Se observó la presencia de enlaces peptídicos usando el Reactivo de Biuret en
muestras de Agua, Glicina, albúmina de huevo; concluyendo que la albúmina de
huevo tiene mayor proporción de enlaces peptídicos
-las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria,
terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero
estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija. Las enzimas funcionan mejor
dentro de rangos de temperatura y de pH específicos, y bajo condiciones que no
son las óptimas una enzima puede perder su capacidad de unirse a un sustrato.
-Temperatura: aumentar la temperatura generalmente acelera una reacción, y
bajar la temperatura la hace más lenta. Sin embargo, temperaturas
extremadamente altas pueden causar que una enzima pierda su forma (se
desnaturalice) y deje de trabajar.
-pH: cada enzima tiene un rango óptimo de pH. Cambiar el pH fuera de este
rango hará más lenta la actividad de la enzima. Valores de pH extremos pueden
causar la desnaturalización de la enzima.
-Concentración de la enzima: aumentar la concentración de la enzima acelerará
la reacción, siempre que se disponga de sustrato al cual unirse. Una vez que todo
el sustrato esté adherido, la reacción deja de acelerarse, puesto que no hay algo
en las enzimas adicionales se puedan unir.
-Concentración del substrato: aumentar la concentración de sustrato también
aumenta la velocidad de reacción hasta un cierto punto. Una vez que todas las
enzimas se han adherido, cualquier aumento de sustrato no tendrá efecto alguno
en la velocidad de reacción, ya que las enzimas disponibles estarán saturadas y
trabajando a su máxima capacidad.

7 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas

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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

- Educativo VI. Prueba de Biuret [Internet]. YouTube; 2016 [citado el 24 de abril de 2022].
Disponible en: https://www.youtube.com/watch?
v=1p0xrmyKGxs&list=PLqTzj1pshMNIvazSRlBERcjTJxJsXvj8v

- Usco QOE. II Reacción de BIURET [Internet]. YouTube; 2020 [citado el 24 de abril de 2022].
Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=GnmzzblbXfs

- Educativo VI. Reacción Xantoproteica [Internet]. YouTube; 2017 [citado el 24 de abril de

2022]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=GzGMbw5w4Wo

- Usco QOE. III prueba xantoproteica [Internet]. YouTube; 2020 [citado el 24 de abril de
2022]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=xpkMTDR0gUA

- Educativa VI. Efecto de la temperatura, Ph y Alcohol Etílico en las Propiedades de las

Proteínas [Internet]. Youtube; 2019 [citado el 24 de abril de 2022]. Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=KJpiOAQtdaU

- Educativa VI. Hidrólisis del Almidón [Internet]. Youtube; 2019 [citado el 24 de abril de
2022]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=x9NQF6sKrsw

- de química UMB L. Actividad enzimática sesión 2 Amilasa [Internet]. Youtube; 2020

[citado el 24 de abril de 2022]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=JE-
APrv-mM4

8 Práctica 2: Identificación de proteínas y enzimas