I-Clase - Enzimología Clínica-HC

Bioquímica I– MB-159
Heidy Cabrera MSc. ; Olinda Núñez MSc.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
BIOQUÍMICA CLÍNICA I – MB-159
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• Enzimas: catalizadores biológicos proteicos que realizan reacciones
bioquímicas con alta eficiencia y sin alterar el equilibrio de reacción.
Actividades
Factores que
fisiológicas en las que Estructura afectan su función
Clasificación (IUB)
participan
• Contracción • Son proteínas • Concentración del • Oxidorreductasas
muscular • Poseen sitio sustrato • Transferasas
• Conducción catalítico • Concentración de la • hidrolasas,
nerviosa • Estructura 1ria, 2ria, enzima • Liasas
• Coagulación 3ria, 4ria. • pH • Isomerasas
• Degradación de • Al sufrir • Temperatura • Ligasas
macromoléculas glicosilaciones • Tiempo de
• Ciclo celular generan isoformas incubación
• Transducción de • Pueden ser • Presencia de
señales inhibidas cofactores
• Requieren • Presencia de
cofactores (algunas) inhibidores
• Estudio de los cambios en la actividad de las enzimas que
predominan en tejidos específicos y que son liberadas a la
circulación en presencia de daño de éstos.
NORMAL DAÑO TISULAR
Midiendo los cambios en los niveles de ciertas enzimas en la sangre, se puede inferir la
localización y naturaleza de patologías en los tejidos que las producen.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Study 26 Plasma Proteins: Clinical Enzymology (2 Questions) flashcards from Eric H. on StudyBlue.
Agentes
Hipoxia Necrosis
físicos
Respuesta Crecimiento
Fármacos
inmune del tejido
Agentes Condiciones
químicos inflamatorias
González. Bioquímica Clínica y Patología Molecular. 2da Ed.
Medición del
Cofactor NADH Medición del
Producto
Medición del
Sustrato
Al interpretar un método de laboratorio para enzimas séricas se debe tomar
en cuenta:
• ¿Cuál es su sustrato y producto?
• ¿Son medibles al espectrofotómetro?
• ¿El método requiere reacciones acopladas?
• ¿La enzima requiere de cofactores?
• ¿Qué propiedades tienen los sustratos o productos de la reacción?
• Los métodos espectrofotométricos con luz Visible y Luz UV son menos
costosos y de gran utilidad.
• Actividad Enzimática • Concentración Catalítica Enzimática
• Evaluación de la catálisis enzimática por • Concentración catalítica de una

unidad de tiempo. enzima por unidad de volumen o bien,
• Medida internacional: Katal (kat) (mol concentración de actividad enzimática
transformado/seg) por unidad de volumen.
• Medida más utilizada: Unidades • Kat/L
Internacionales (UI) (µmol • Generalmente se expresa en UI/mL o
transformado/min), es la cantidad de enzima
U/L
que cataliza la reacción de 1 umol de
sustrato por minuto bajo T°y pH controlados.
Medición de la actividad enzimática:
• Constante: T°, pH.
• Variable: Tiempo de incubación.
2. Enzimático cinético o de
1. Enzimático de punto final
monitoreo continuo.
• Los reactivos están • Se realizan múltiples lecturas

combinados. de ABS en el tiempo.
• Se hace la lectura de ABS en • Permite observar la
un tiempo fijo. linealidad de la reacción.
• La actividad enzimática se basa en la
velocidad de reacción. La formación
de producto o desaparición de
sustrato se monitorea
espectrofotométricamente.
• ¿En qué tejido(s) se produce la enzima?
Patología Molecular. 2da Ed.

González. Bioquímica Clínica y
• ¿Qué reacción cataliza?
• ¿Cuál es el significado clínico de su elevación?
• ¿Presenta isoformas que se distribuyen en
otros tejidos?
• ¿Cuáles son los métodos disponibles para su
determinación?
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA También es importante la ubicación celular de las enzimas

Enzima Tejidos predominantes
Hígado, Miocardio
Aspartato Aminotransferasa TGO/AST
Músculo Esquelético
Alanina Aminotransferasa TGP/ALT Hígado
Fosfatasa alcalina (ALP) Hígado, Hueso, intestino
Lactato deshidrogenasa (LDH) Miocardio, Hígado, Eritrocitos, Riñón
5’ Nucleotidasa Hígado
Gamma glutamil transferasa (GGT) Hígado
Músculo Esquelético, Miocardio,
Creatin quinasa (CK)
Cerebro
CK-MB Miocardio
α-Amilasa Páncreas, glándula salival
Lipasa Páncreas
Colinesterasa Hígado, (Intoxicación por drogas)
Aspartato aminotransferasa (TGO o AST) y Alanina aminotransferasa (TGP o ALT) catalizan la transferencia
reversible de un grupo amino desde un aminoácido ha un cetoácido. Utilizan como cofactor piridoxal fosfato.
González. Bioquímica Clínica y Patología Molecular. 2da Ed.
ALT es más específica de hígado, mientras que AST

Participan activamente en el metabolismo de aminoácidos. predomina en hígado, corazón y musculo esq.
Marcadores de daño hepatocelular.
Aumento ↑↑↑ Aumento ↑↑ Aumento ↑
Marshall. Bioquímica Clínica. 7ma Ed.

• Hepatitis aguda • Infarto de • Otras
• Necrosis miocardio hepatopatías
hepática • Daño del • Pancreatitis
• Lesiones por músculo • Hemólisis
TGO/AST
aplastamiento esquelético. • Fármacos.
• Trauma
• Colestasis
• Hepatitis crónica
• Hepatitis aguda • Cirrosis
TGP/ALT • Necrosis • Colestasis
hepática • Hepatitis crónica
Las transaminasas presentan sus niveles más elevados en hepatitis aguda

viral. Elevándose más de 100 veces.
Valor de referencia: TGO/AST: 5-30 UI/L TGP/ALT: 6-37/UI/L
Muestra: suero, plasma obtenido con EDTA o heparina.
TGO/AST TGP/ALT
• Método IFCC: Cinético UV con piridoxal fosfato. • Cinético UV sin piridoxal fosfato.
• Cuantificación del descenso de la ABS de NADH a

• Cuantificación del descenso de la ABS de NADH a 340 nm.
340 nm.
Condiciones: Principal interferencia: hemólisis ↑ transaminasas por liberación de los eritrocitos.

AST es mas estable que ALT a T° ambiente y a 4°C. Conservación: no más de 24h.
Cataliza la hidrólisis de una gran variedad de substratos
(monoésteres de fosfatos) en medio alcalino (pH 9.0-10.5),
utilizando magnesio como cofactor.
Producida en hepatocitos, células de los canalículos biliares y

osteoblastos; también en placenta, intestino, bazo y riñón.
Aumenta fisiológicamente en el crecimiento óseo,
Principal utilidad: diagnóstico de
Aumento ↑↑↑ Aumento ↑↑ Fisiológica
Obstrucción hepatobiliar

• Enfermedad ósea • Obstrucción • Embarazo
Enfermedad ósea. • Osteomalacia hepática por • Crecimiento en
• Raquitismo tumores o niñez y
Importante recordar su elevación • Colestasis abscesos adolescencia.
de origen fisiológico. • Cirrosis • Tumores óseos
• Osteopatía renal
• Hiperparatiroidis
mo
• Consolidación de
fracturas
• Hepatitis
Valor de referencia: Adultos 13-43 U/L. Niños tienen niveles más altos.
• Método: enzimático colorimétrico con p-nitrofenol
Mg+
• Cuantificación del aumento de la ABS de p-nitrofenol a 405 nm

• Condiciones: usar muestra suero o plasma con heparina como muestra de elección. Otros
anticoagulantes interfieren al quelar los cofactores de la enzima (Mg y Zn). Analizar dentro de las
primeras 4 h manteniendo la muestra a T° ambiente. T° de refrigeración ↓2% de ALP por día.
• Aminoácido transferasa, unida a la membrana del hepatocito. Útil para evaluar obstrucción
hepatobiliar y enfermedad hepática alcohólica.
• •Riñón>Hígado>Páncreas>Intestino
Fosfatasa alcalina ↑ y GGT normal: origen

de la FA es extrahepático
• Colestasis • Hepatitis aguda y • Ingestión
•Ayuda a diferenciar entre enfermedades • Hepatopatía crónica excesiva de
extrahepáticas y óseas alcohólica • Cirrosis alcohol
• Otras • Fármacos
•Más sensible que la fosfatasa alcalina , ya hepatopatías inductores de
que no se altera con el crecimiento óseo • pancreatitis enzimas
ni en el embarazo. • Cardiopatía
congestiva
•GGT se utiliza como control en el
alcoholismo.
• Método: enzimático colorimétrico de punto final
• Cuantificación del aumento de la ABS de 5-aminobenzoato a 415 nm
• Condiciones: en general el ensayo es estable. La muestra es estable a 4 °C hasta 1 semana.

Hemólisis no interfiere. Muestra: suero o plasma con EDTA o heparina.
Valor de referencia: Adultos <45 U/L.
• En tejido muscular, cataliza la
formación de fosfocreatina en
presencia de magnesio.
• Relacionada con los sistemas de
contracción muscular. Mg+
• Sus valores dependen de la masa

muscular.
• Tejidos: predominantemente en músculo cardiaco, cerebro,
musculo esquelético. En menor cantidad, pulmón, vejiga,
colon, útero, tiroides, próstata.
• Análisis de sus isoenzimas aumenta su especificidad
• Poliomiositis • Post-quirúrgico • Hipotiroidismo
• Rabdomiólisis • Trauma • Tratamiento
• Distrofia muscular con estatinas
• Valores de CK están muscular • Ejercicio • Fisiológicas
sujetos a: • Infarto al intenso (raza)
miocardio. • Convulsión
• Edad, sexo, masa
epiléptica
muscular, actividad • Miositis
física, raza. • Distrofia
muscular
crónica.
Valor de referencia: Hombres: 46 - 180 U/L Mujeres: 15 - 171 U/L
90-95
• M. Esquelético: distrofia muscular. CK3

(MM) se eleva más.
• Corazón: Infarto al miocardio. CK2 (MB)
se eleva más.
• SNC, Cerebro: trauma, accidente
cerebrovascular. CK1 (BB) se eleva más.
Bishop. Clinical Biochemistry and correlations. 7th Ed.
• Método: Cinético UV
• Cuantificación del aumento de la ABS de NADPH a 340 nm
• Condiciones: variables preanalíticas: ejercicio, raza. Hemólisis en la muestra puede elevar niveles
de actividad de CK. Muestra de elección: suero; anticoagulantes de uso común pueden interferir
con la metodología. Proteger muestra de la luz directa ya que CPK es inactivada por la luz.
• Enzima citoplasmática que cataliza la • Tejidos: hígado, musculo esquelético,
oxidación reversible de lactato a riñón, eritrocitos.
piruvato en presencia de NAD+. • Análisis de sus isoenzimas aumenta
su especificidad.
LDH es un tetrámero-→ 5 isoformas

• Sus niveles aumentan 12-24 h
posteriores al daño de los tejidos.
• Desorden • Desórdenes • Enfermedad
• En la mayoría de los Laboratorios se hemolítico hepáticos renal
cuantifica LDH total. • Anemia • Cirrosis • Embolia
perniciosa • Hepatitis viral pulmonar
• Destrucción • Leucemia • Inflamación
acelerada de • Desordenes de hepática.
• Se puede medir LDH1 y LDH2 para eritroblastos músculo
calcular el ratio LDH1/LDH2. • Leucemia esquelético
• Normalmente LDH1/LDH2 < 1. En infarto linfloblástica • Infarto agudo al
agudo al miocardio, LDH1/LDH2 >1. aguda miocardio
• LDH2 es un marcador muy utilizado en

Leucemia.
• LDH5 es más específica para evaluar Valor de referencia: Adultos 140-280 U/L.
enfermedad hepática.
Patología Molecular. 2da Ed.
González. Bioquímica Clínica y
En infarto agudo al miocardio LDH 1 es > LDH 2
Bishop. Clinical Chemistry and correlations. 7th Ed.
• Método: Cinético UV
• Cuantificación del aumento de la ABS de NADH a 340 nm

• Condiciones: Muestra: suero o plasma. Hemólisis en la muestra eleva niveles de LDH → motivo de
rechazo. Almacenamiento a 25°C hasta 48h. Almacenar a 4°C afecta su actividad enzimática.
Anticoagulantes no afectan.
• α-Amilasa pancreática y salival • Lipasa
2 ácidos grasos y 1 monoglicérido.

Amilasa salival
Principal productor: Páncreas.
Amilasa utiliza Ca+ como cofactor. Amilasa pancreática La mucosa intestinal y el tejido adiposo también producen Lipasa,
pero en mucho menor cantidad que el páncreas.
Pancreatitis
• α-Amilasa: diagnóstico precoz de pancreatitis • Lipasa es útil en el diagnóstico tardío de

aguda. pancreatitis aguda.
α-AMILASA TOTAL LIPASA
• Pancreatitis aguda • Pancreatitis aguda
• Pancreatitis crónica • Pancreatitis crónica
• Parotiditis • Ulcera duodenal
• Paperas • Ulcera péptica
• Enfermedad hepática por alcohol • Obstrucción intestinal
• Cáncer de páncreas • Colecistitis
• Lesiones de la glándula salival • Intoxicación por alcohol
Valor de referencia amilasa:
• Cirugía maxilofacial • Trauma abdominal
suero: 60-160 U/dL.
• Apendicitis aguda • Insuficiencia renal
Orina: 50-140 U/hora.
• Peritonitis
• Colecistitis • Niveles elevados >5 veces su valor
• Cetoacidosis diabética normal: pancreatitis. Valor de referencia lipasa:
• Gastritis suero: 21-67 U/L.
• Duodenitis
• Ruptura de embarazo ectópico
• Macroamilasemia
• Aumenta después del incremento sérico y permanece elevado aun cuando se normaliza en
suero. Única enzima eliminada en la orina.
• Uso: diagnóstico tardío de pancreatitis o pancreatitis crónica y detección de
macroamilasemia.
• Muestra para evaluar amilasuria: orina de 24 h u orina al azar pero medir en conjunto con
creatinina.
• La macroamiloasemia puede ser la causa de 5% de los casos de ↑ de amilasa.
Normal: 2-5%
Ratio o índice de depuración de Amilasa/Creatinina Pancreatitis: >8%
Macroamilasemia: <2%
• Para determinar solamente la amilasa pancreática: se realiza un paso previo de
inmunoinhibición de amilasa salival.
Amilasa total y pancreática Lipasa
• Método IFCC: enzimático colorimétrico. • Enzimático colorimétrico de punto final
• Cuantificación del aumento de la ABS de p-Nitrofenol a • El producto es un colorante rojo cuya ABS se cuantifica
415 nm. a 570 nm.
Condiciones: muestra: suero o plasma con heparina de litio; otros anticoagulantes interfieren.
Orina: acidez en la orina interfiere con el ensayo.
• Enzima microsomal y de membrana
que se encuentra principalmente en
hígado.
• Enzima que ayuda a evaluar obstrucción
hepática.
• Principal utilidad:
Panel de evaluación hepatobiliar: • Prueba de apoyo para diferenciar el
• FAL, GGT, 5’NT. origen de la elevación de Fosfatasa
alcalina.
FAL ↑ pero GGT y 5’NT Normal • Diferenciar entre enfermedad
corresponde a:__________________ hepatobiliar y esquelética
FAL, 5’NT y GGT ↑ corresponde a_______ • Diferenciar obstrucción en vías biliares
de lesión hepatocelular aguda
• Fosfatasa ácida
• Aldolasa
• Colinesterasa
• Tripsina
• Quimotripsina
ESTUDIAR LA UTILIDAD CLÍNICA DE CADA UNA

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Bioquímica I– MB-159

Heidy Cabrera MSc. ; Olinda Núñez MSc.

González. Bioquímica Clínica y Patología Molecular. 2da Ed.

• Evaluación de la catálisis enzimática por • Concentración catalítica de una

• Los reactivos están • Se realizan múltiples lecturas

Patología Molecular. 2da Ed.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA También es importante la ubicación celular de las enzimas

González. Bioquímica Clínica y Patología Molecular. 2da Ed.

ALT es más específica de hígado, mientras que AST

Marshall. Bioquímica Clínica. 7ma Ed.

Las transaminasas presentan sus niveles más elevados en hepatitis aguda

• Cuantificación del descenso de la ABS de NADH a

Condiciones: Principal interferencia: hemólisis ↑ transaminasas por liberación de los eritrocitos.

Producida en hepatocitos, células de los canalículos biliares y

Aumenta fisiológicamente en el crecimiento óseo,

Marshall. Bioquímica Clínica. 7ma Ed.

• Cuantificación del aumento de la ABS de p-nitrofenol a 405 nm

Marshall. Bioquímica Clínica. 7ma Ed.

• Cuantificación del aumento de la ABS de 5-aminobenzoato a 415 nm

• Condiciones: en general el ensayo es estable. La muestra es estable a 4 °C hasta 1 semana.

• Sus valores dependen de la masa

• M. Esquelético: distrofia muscular. CK3

• Cuantificación del aumento de la ABS de NADPH a 340 nm

LDH es un tetrámero-→ 5 isoformas

• LDH2 es un marcador muy utilizado en

Bishop. Clinical Chemistry and correlations. 7th Ed.

• Cuantificación del aumento de la ABS de NADH a 340 nm

2 ácidos grasos y 1 monoglicérido.

• α-Amilasa: diagnóstico precoz de pancreatitis • Lipasa es útil en el diagnóstico tardío de

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