Universidad de Córdoba

Programa de Biología general - Biología Celular

Rafael Soto Meza

PRÁCTICA No 5
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN ORGANISMOS VIVOS

I. OBJETIVOS
 Reconocer las propiedades de una enzima y la forma cómo éstas actúan en reacciones
intracelulares.
 Identificar factores que afectan la actividad enzimática.

II. INTRODUCCIÓN
Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias
para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no
Fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido.
Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA, son catalizadores químicos que agilizan una
reacción que envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos. Las enzimas no se
consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se necesitan en grandes
cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un complejo enzima-sustrato; esto
ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son
muy selectivas porque pocas moléculas pueden interactuar bien con este sitio.

III. MATERIALES Y EQUIPOS

Gradilla 2 Beaker de 50 ml
8 Tubos de ensayo Hígado*
3 Pinzas de madera Papa*
1 Estilete Hielo*
Vidrio de reloj Espinaca*
Solución de HCl 2M Saliva*
Solución de NaOH 2M Hígado*
Lugol Rábano*
Benedict Riñón*
1 Mortero Bisturí*
4 Goteros plásticos* Peróxido de Hidrógeno (agua oxigenada)*
*El material señalado debe traerlo el estudiante.

IV. PROCEDIMIENTO
Factores que afectan el funcionamiento de la Catalasa
En los ejercicios siguientes se estudiará el funcionamiento de la catalasa. Esta enzima está
presente en casi todas las células aeróbicas y actúa descomponiendo peróxido de hidrógeno (agua
oxigenada) en agua y oxígeno, según la siguiente reacción:
Catalasa
2H2O2 2H2O + O2

ACCION DE LA ENZIMA CATALASA EN DIFERENES TIPOS DE TEJIDO

24
 Universidad de Córdoba
Programa de Biología general - Biología Celular
Rafael Soto Meza

1. Corte en trozos pequeños la espinaca, el riñón, el hígado, la papa y el rábano, en un vidrio

de reloj coloque un trozo de cada tejido, cuidando que queden separados usando un gotero
añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
2. Observe y compare las reacciones en los distintos tejidos y califique la intensidad de la
reacción de 1 a 5 y llene la siguiente tabla.

1 2 3 4 5
Papa
Espinaca
Riñón
Hígado
Rábano

¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?

¿Por qué se forman burbujas?
¿Cuál de los tejidos presentó mayor actividad enzimática?

ACCION DE LA ENZIMA CATALASA EN DIFERENES NIVELES DE pH

1. Coloque nuevamente una muestra de cada tejido en el vidrio de reloj y agregue una gota
de deHCl 2M,y luego añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
2. Observe y compare las reacciones en los tejidos. Califique la intensidad de la reacción de
1 a 5 y llene la siguiente tabla.
1 2 3 4 5
Papa
Espinaca
Riñón
Hígado
Rábano

¿Qué diferencias encuentra entre este procedimiento y el anterior? Explique.

1. Coloque nuevamente una muestra de cada tejido en el vidrio de reloj y agregue una
gotade NaOH 2M, y luego añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
2. Observe y compare las reacciones en los tejidos. Califique la intensidad de la reacción de
1 a 5 y llene la siguiente tabla.
1 2 3 4 5
Papa
Espinaca
Riñón
Hígado
Rábano

¿Qué diferencias encuentra entre este procedimiento y los dos anteriores? Explique.

25
 Universidad de Córdoba
Programa de Biología general - Biología Celular
Rafael Soto Meza

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓNDE LA ENZIMA EN EL FUNCIONAMIENTO DE

LA AMILASA SALIVAL

Rotule con letras dos tubos de ensayo. Agregue a ambos 1 ml de solución de almidón, al tubo A
realice la prueba de Lugol, al tubo B la prueba de Benedict. Anote sus resultados.
1. Enjuáguese la boca varias veces con agua para eliminar los restos de comida. En beaker
de 50 ml prepare una solución de amilasa salival aproximadamente 10 ml (agregue un
poco de agua).
2. Rotule con números tres tubos de ensayo, a cada uno de ellos agregue 1 ml de solución de
almidón. Al tubo 1 agregue una gota de la solución de amilasa, al tubo 2 agregue tres
gotas de la solución de amilasa y al tubo 3 agregue cinco gotas de la solución de amilasa.
Agite y espere 15 minutos.
3. Transcurridos 15 minutos divida el contenido de cada tubo en dos partes iguales y rotule
1A, 1B, 2A, 2B, 3A, 3B, a los tubos rotulados con A realice la prueba de Lugol y a los
tubos rotulados con B la prueba de Benedict. Observe los resultados y compare. Llene la
siguiente tabla con sus resultados, escriba en la columna de la prueba + si es positiva, - si
es negativa.

TUBOS LUGOL BENEDICT

Almidón A B
1=Almidón + una gota de amilasa A B
2=Almidón + tres gotas de amilasa A B
3=Almidón + cinco gotas de amilasa A B

Nota: Para realizar la prueba de Lugol agregue 3 gotas de Solución de Lugol a la muestra
y agite.Para realizar la prueba de Benedict agregue 1 ml del reactivo de Benedict y lleve a
baño maria durante 6 minutos.

¿Qué diferencias encuentra entre los tubos al realizar las pruebas?

¿En cuál de los tubos rotulados con números hay mayor concentración de Almidón? El 1, el 2 o
el 3, explique.
¿En alguno de los tubos hay presencia de glucosa? Explique

V. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Explique por qué la gran mayoría de las especies de plantas y de animales producen la
enzima catalasa.
2. Enumere algunos factores que puedan alterar la actividad de una enzima. Explique de que
forma la afectan.
3. ¿Cómo se relacionan el pH y la actividad enzimática?
4. ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las
enzimas?
5. Frecuentemente se utiliza peróxido de hidrogeno como antiséptico y se observa que al
aplicarlo a una herida se produce burbujeo. ¿Qué es lo que indica este hecho?
Al finalizar la práctica entregue los resultados obtenidos al docente con los respectivos dibujos de
las pruebas en el pre-informe.

26