Efecto de nutrientes sobre el

crecimiento microbiano
• Ingeniería Ambiental
CRECIMIENTO MICROBIANO

• Entendemos por crecimiento microbiano el

aumento del número de microorganismos
• a lo largo del tiempo
• Por tanto, no nos referimos al crecimiento de un
único microorganismo (ciclo celular) sino al
demográfico de una población.
• El ciclo celular proceso de desarrollo de una bacteria considerada
de forma aislada.
• Tiene lugar la replicación, síntesis de sus componentes celulares, el
crecimiento para alcanzar un tamaño doble del inicial y su división
por bipartición.
• La duración del ciclo celular coincide con el tiempo de generación y
depende, en general, de los mismos factores de los que depende
este.
• El crecimiento de una población resulta de la suma de los ciclos
celulares de todos sus los individuos.
• El crecimiento suele ser asincrónico puesto que cada
microorganismo se encuentra en un punto diferente del ciclo
celular.
• crecimiento equilibrado a aquél en el que todos la biomasa,
número de células, cantidad de proteínas, de ADN, etc.,
evolucionan en paralelo, se da en condiciones de laboratorioos.
 CINETICA DEL
CRECIMIENTO DE LOS
MICROORGANISMOS
Ciclo celular: fisión binaria

Gemación,
ej.
levaduras
Crecimiento de poblaciones
Crecimiento exponencial: es el tipo de crecimiento
de una población donde el número de células
se duplica cada cierto tiempo
Formas de medición del crecimiento
microbiano

1- Peso seco celular

2- Absorción
3- Peso húmedo
4- Volumen
5- Número de células
6- Mediciones físicas
Peso seco celular
Consiste en dejar secar volúmenes conocidos de
cultivo celular lentamente hasta que alcancen
peso cte. Se mide en g/l
En ocasiones para concentrar las células se usa
el centrifugado o filtrado según la dificultad.
Es el más usado.
Desventaja: pueden dar grandes errores en caso
de absorción de humedad por las células secas.
Absorción

Consiste en el uso de celdas espectrofotométricas

pues las células desvían la luz q llega al detector y
esa desviación está relacionada con el nº de células
presentes (o también puede relacionarse con la
densidad ) en la muestra según la Ley de Beer
Peso húmedo
Consiste en una centrifugación
o filtración seguida del pesado.
Este proceso es extra-rápido, hay necesidad
de estandarizar el proceso ya que se mide
tanto el agua intracelular como el extracelular
ocasionando errores considerables.
Recuento de viables - Filtración por
membrana
Volumen
Consiste en la centrifugación en tubos
graduados de tal forma q me permitan
determinar el volumen de células
empacadas.
Es un método bastante inexacto
especialmente para pequeños cambios de
la población celular
 Recuento de células por cámara de
Petroff-Hausser

Muestra de cultivo diluído en cámara de volumen pequeño y conocido

(2,5x10-7 ml), recuento de células en numerosos cuadrados de la cámara.
Promedio de células contenidas en dicho volumen se expresa por ml de
muestra (alto error experimental).
Desventaja: no se pueden distinguir células viable y no viables
Mediciones físicas
El crecimiento de células origina la
generación de calor la cual está relacionada
con la concentración de biomasa. Es un
proceso rápido y no necesita de muestreo.
Se usa para el caso de biorreactores , pues
sino las variaciones de calor generado son
pequeñas para poder ser mediadas
adecuadamente.
Factores que afectan a la rapidez de crecimiento

Los factores que intervienen son:

- concentración de substrato
- temperatura
- pH
- actividad de agua
- potencial redox,concentración de oxígeno
- radiación
- presión hidrostática
MATERIAS PRIMAS y MEDIOS DE CULTIVO.
Criterios utilizados en la formulación del medio.
Preparación del sustrato.
Medios de fermentación microbiana.
Medios de cultivo de células animales.
Medios de cultivo para el crecimiento de células vegetales.
Mantenimiento y esterilización.
Criterios utilizados en la formulación del medio.

• CARACTERÍSTICAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

• Contener los elementos para la síntesis celular y para la formación

de producto
• Medio ambiente favorable para el crecimiento y/o formación del
producto.
• Económicamente rentable.
• Máxima producción.
• Adaptación constante al proceso de fermentación.
Criterios utilizados en la formulación del medio.

• Recuperación del producto.

• Eliminación de la represión catabólica.
• Materiales de fácil disposición en cantidad suficiente.
• Bajos costes de transporte.
• Impedir que las impurezas dificulten la recuperación de
producto.
Criterios utilizados en la formulación del medio.
• INFLUENCIAS DEL MEDIO :

1.- En el crecimiento celular.

2.- En el procesado posterior.
3.- En la fisiología y morfología de los microorganismos.
Criterios utilizados en la formulación del medio.

• 1.- INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL CRECIMIENTO CELULAR.

• Los microorganismos necesitan:

Carbono
Nitrógeno
Minerales Biomasa
Factores de crecimiento Microorganismos
Biosíntesis y
Agua mantenimiento celular
Oxígeno(aerobios)

Condiciones medioambientales:
pH, Temperatura...
Criterios utilizados en la formulación del medio.
• Elementos en el medio: Similar a la composición elemental de los
microorganismos.

C H O N S Cu, Mn,Co,Mo,B....
45 7 33 10 2,5 Trazas
• La cantidad de carbono necesaria en condiciones aerobias, se determina por
el coef. de rendimiento de biomasa:
Biamasa producida( g )
c 
Substrato carbono utilizado( g )

• Factores de crecimiento: aminoácidos, vitaminas o nucleótidos.(Por necesidad p

para aumentar la velocidad de crecimiento)
Criterios utilizados en la formulación del
medio
3.- INFLUENCIA DEL MEDIO EN LA FISIOLOGÍA Y MORFOLOGÍA DE
LOS MICROORGANISMOS.
• Las condiciones relacionadas con el medio que han demostrado
tener influencia en la morfología :

pH Cationes
Viscosidad divalentes

Polímeros Morfología Agentes

anióticos quelantes

Presencia de Agentes
sólidos tensoactivos
 Criterios utilizados en la formulación del
medio.
1.-PH:

• Control necesario para el desarrollo celular y formación de producto.

• Control de forma indirecta o de forma directa:
• Directamente (Añadiendo agentes tamponantes):
• Fosfato inorgánico pH entre 6.0 y 7.5.
• Ácidos orgánicos pH bajos.
• Carbonato cálcico frente a la producción de ácidos.
• Hidroxisales, amoniaco, ácidos sulfúrico y clorhídrico.
• Indirectamente ( mediante un balance equitativo entre las fuentes de
carbohidrato y nitrógeno).
• Los carbohidratos bajan el pH (formación de ácidos orgánicos).
• Asimilación del nitrato alcalinidad.
• DESVENTAJAS: Efectos represivos sobre la formación del producto.
Criterios utilizados en la formulación del medio.
2.- ESPUMA:
• ORIGEN:
Desnaturalización de las proteínas en la
interfase gas- líquido.
• PROBLEMAS:
Ascender hasta ocupar totalmente la cabeza
del fermentador. Evacuar parte del
contenido del aparato por la salida del aire.
• SOLUCIÓN:
Antiespumantes ( agentes tensoactivos que
reducen la tensión superficial de las espumas
hasta dispersarlas ).
Rompedores mecánicos.
Criterios utilizados en la formulación del medio.
• ANTIESPUMANTES:
• Eficacia (Depende de las condiciones de fermentación):
• Composición del medio, cepas microbianas, etapa de crecimiento, configuración de las
vías de aireación y del fermentador.
• Selección y cantidad del antiespumante:
• Procedimientos de ensayo y error.
• Uso de soportes(aceites orgánicos y minerales)
• Cantidad de antiespumante mínima ( afecta a la velocidad de transferencia de oxígeno
hasta u 50%)
• No deben ser tóxicos ni peligrosos, esterilizables por el calor y baratos.
Criterios utilizados en la formulación del medio.

3.- OXÍGENO.
• Requerimientos en procesos aerobios.
• Influencia sobre los procesos metabólicos.
• Velocidad de absorción específica de oxígeno concentración de oxígeno
disuelto
• Antioxidantes como protección del producto.
Criterios utilizados en la formulación del medio
4.-TEMPERATURA:

• Temperatura óptima para la producción celular o de metabolitos.

• Uso de termostatos
Criterios utilizados en la formulación del medio

5.-REGULACIÓN DE LA FORMACIÓN DEL PRODUCTO.

• PERCUSORES
• INDUCTORES
• incorporarse al medio el inductor específico
• mediante adiciones continuas o discontinuas
• INHIBIDORES:
• minimizar la formación de otros intermedios metabólicos.
• Prevenir el metabolismo posterior al producto deseado
• Ejemplos:
• Fuente de N utilizable rápidamente inhibe la producción de
algunos antibióticos.
• El ácido fenilacético es el ppal percusor en la producción de
bencilpenicilina por fermentación.
Preparación del sustrato
• OBJETIVOS:
• Evitar el desarrollo de patógenos y alterantes para prolongar la
vida del alimento.
• Favorecer el desarrollo de los microorganismos deseados.
• Hacer accesible el sustrato a los microorganismos que deben llevar
a cabo la transformación.
• Mejorar la textura, el aroma o el sabor del producto final.
• EJEMPLOS:
• Adición de proteínas durante la fabricación del yogurt.
• Prensado de la uva( se favorece el acceso al sustrato).
Medios de fermentación microbiana
• Los compuestos petroquímicos ( hidrocarburos, alcoholes y
ácidos)
• Cuando el petróleo era barato no mucha extensión.
• En la actualidad: materias primas renovables que contienen
azúcar y almidón y menos grasas y aceites.
• Futuro: los productos de la hidrólisis de la lignocelulosa las
materias primas más importantes en los procesos de la
fermentación. (La lignocelulosa representa el 50% de la
producción anual mundial de biomasa).
Medios de fermentación microbiana

• CARBOHIDRATOS:
• ALMIDÓN: es el más importante actualmente .
• En forma de granos o raices, enteros o molidos, de plantas
como el maíz, arroz, trigo , patatas y mandioc como almidón
purificado, modificado o como dextrinas.
• CELULOSA:
• Presente en la madera combinado con la hemicelulosa y la
lignina en forma de lignocelulosa
• La lignina hace a la celulosa resistente al ataque microbiano
No son rentables los métodos químicos y enzimáticos que
convierten la lignocelulosa en azúcares fermentables. ( Para
obtener champiñones y substrato para producir enzimas
celulolíticas)
 Medios de fermentación microbiana
• SACAROSA:
• En forma cristalina o en forma bruta como zumos o melazas (
subproducto de la manufactura de azúcares más barato varía su
composición , causando problemas en la reproductibilidad de la
fermentación).
• LACTOSA:
• En el suero de la leche ( 4% al 5%).
• La baja concentración, , caro su transporte.Solo se utiliza en lugares
próximos a la factoría de quesos proveedora.
• GLUCOSA:
• Se obtiene a partir de la conversión enzimática directa del almidón.
• Glucosa refinada, en forma de jarabe o cristalina para productos de mayor
valor.
• ACEITES VEGETALES ( de soja, palma y semillas de algodón como
complemento delos carbohidratos), METANOL, ETANOL......
Medios de fermentación microbiana
• NITRÓGENO:
• Fuentes: amoniaco, nitratos, urea, y el nitrógeno
presente en los cereales y raíces y sus subproductos.
• Los aminoácidos purificados como percusores.
• SUBSTRATOS COMPLEJOS:
• Son una fuente barata de carbono, nitrógeno y otros
nutrientes.
• Presentes en plantas enteras y subproductos
vegetales, animales y microbianos.
Medios de fermentación microbiana
• Substratos complejos utilizados en los medios de fermentación microbiana.
Mantenimiento y esterilización
1.- Mantenimiento de los medios.
• El medio de almacenamiento y subcultivo de cepas industriales clave
debe ser diseñado para:
• Conserve las características necesarias que permitan la
capacidad de producción particular.
• Minimicen la variación genética.
• ¿ POR QUÉ UTILIZAR MEDIOS DE MANTENIMIENTO?

METABOLITOS
CEPAS TÓXICOS
EFECTOS
DESESTABILIZANTES
Mantenimiento y esterilización
2.- Esterilización de cultivos.
• OBJETIVOS:
• Evitar el desarrollo de microorganismos patógenos.
• Evitar el desarrollo de microorganismos alterantes.
• Incrementar la reproducibilidad del proceso (rendimiento, pureza y
tiempo de producción).
• MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN:
• Calor húmedo (autoclave o chorro de vapor).
• Calor seco
• Radiación ( Rayos X ,UV)
• Esterilización química con líquidos o gases.
• Filtración (filtros de superficie o de profundidad).
• Nuevos métodos ( altas presiones, campos eléctricos)