1.- Qu es un medio de cultivo, que finalidad tiene formularlo y con base a que se debe formular?

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones fsicas ptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrgeno y azufre; atmsfera adecuada y los factores de crecimiento necesarios. Los componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con los requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y adems suministrar energa para la sntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular. La formulacin tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios, es decir debe establecer las concentraciones de cada componente a ser utilizadas. Una primera aproximacin con respecto a las cantidades a utilizar de las diversas fuentes lo da el conocimiento de la composicin de biomasa del microorganismo a ser empleado. Una composicin elemental y tpica de la biomasa es (en % de peso seco): Carbono, 46-48; Nitrgeno, 7-12; Fsforo, 1-3; Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1%. Es decir, que si queremos formular un medio para producir una determinada cantidad de biomasa debemos proveer las distintas fuentes que aseguren como mnimo las cantidades de elementos que deben ser suministrados. 2.- Qu es crecimiento microbiano? El crecimiento es definido como un incremento ordenado de todos los constituyentes y estructura celular. En muchos microorganismos, este incremento contina hasta que la clula se divide en dos nuevas clulas: Fisin binaria. El crecimiento microbiano conlleva usualmente a un incremento en el nmero de clulas. Es importante distinguir entre el crecimiento individual de clulas y el crecimiento de poblaciones de clulas: Crecimiento individual: Es el incremento en el tamao y peso y es usualmente un preludio a la divisin celular. Crecimiento poblacional: Es el incremento en el nmero de clulas como una consecuencia del crecimiento y divisin celular.

a) Fase lag o de retraso b) Fase exponencial c) Fase estacionaria d) Fase de muerte

3.- Cules son las principales fuentes de carbono usadas en procesos microbiolgicos industriales y cul es su funcin? Se adicionan por dos motivos las fuentes de carbono: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. Se utilizan sustratos como melaza, extractos de malta, almidn, celulosa, metanol y su uso es para producir energa por biosntesis oxidndola e incorporndolas a su masa celular. 4.- Cules son las principales fuentes de nitrgeno usadas en procesos microbiolgicos industriales y con que finalidad se emplea? Se utilizan sustratos como amonio, urea, lquido de maceracin de maz, extracto de levadura, peptona de casena, harina de soya y su uso es para la biosntesis de protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular. 5.- Cul es la importancia de los macroelementos y microelementos en la formulacin de un medio de cultivo? La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan para crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y se requieren para dos objetivos: Fines energticos (reacciones de mantenimiento) Fines biosintticos (reacciones plsticas o anabolismo). Los requerimientos nutricionales estn determinados por el tipo de metabolismo celular, ya sea autotrfico, que corresponde a los microorganismos que obtienen el carbono del CO 2 como las algas y algunas bacterias, y los heterotrficosque necesitan compuestos orgnicos como fuente de carbono. Otro factor esencial est determinado por las condiciones del cultivo, si es aerobio o anaerobio. Los macronutrientes, agregados en cantidades de gramos por litro que estn representados por las fuentes de C, N, S, P, K y Mg. Los micronutrientes o elementos trazas representados por las sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co que se agregan a los medios en cantidades de miligramos o microgramos por litro. En cuanto a macronutrientes como las fuentes de carbono cumplen tambin el rol de ser fuente de energa. Otro requerimiento nutricional est constituido por las fuentes de nitrgeno que pueden ser de naturaleza inorgnica u orgnica. El nitrgeno es utilizado para la biosntesis de protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular. Con respecto a los micronutrientes se distinguen 2 categoras: a. Los que sonfrecuentemente esenciales para el crecimiento como Ca, Mn, Fe, Co, Cu y Zn y b. Los que son raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se, Mo,Sn, e I. En general los requerimientos de trazas de elementos son conocidas cualitativamente. 6.- Qu mtodos se emplean para evaluar crecimiento microbiano, en que consisten y como se clasifican? El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad bioqumica

con relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican en dos apartados: mtodos directos y mtodos indirectos. Mtodos directos:

Densidad ptica a 620 nm. Rpido, para microorganismos unicelulares. Unidades arbitrarias (UDA: unidades de densidad ptica). Puede hacerse una curva de calibracin de UDA contra peso seco. Peso hmedo: se tara un tubo de centrfuga; se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante; se determina el peso del sedimento. Inconvenientes: grandes errores, debido al lquido intercelular retenido, cuya cuanta depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la cepa, intensidad del empaquetamiento, etc. Peso seco: como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado (105 oC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso hmedo.

Inconvenientes: mtodo tedioso (requiere mucho tiempo) y con bastantes errores: es difcil pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas 5x109 bacterias.

Determinacin de nitrgeno o de protenas totales.

Mtodos indirectos:

Medida de la turbidez: A travs de un colormetro o espectrofotmetro midiendo la turbidez en unidades de absorbancia. Debe prepararse curva estndar para cada organismo estudiado. Numero mas probable: Su fundamento estriba en la distribucin de Poisson: una distribucin aleatoria de partculas en una serie de muestras iguales, en funcin del nmero medio de partculas presentes en una suspensin. La tcnica consiste en sembrar alcuotas de la suspensin original problema sobre un medio lquido o slido adecuado; tras el tiempo de incubacin adecuado se anota la proporcin obtenida de muestras donde no se haya dado crecimiento, P0 (x = 0). Conteo de clulas viables: Una clula viable es definida como aqulla que es capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. El conteo en placas es el mtodo ms utilizado. Pueden ser:

1) Diseminacin en placa (siembra en placa por extensin): Se asume que cada colonia surgi de una simple clula, contando el nmero de colonias uno puede calcular el nmero de clulas viables en la muestra. 2) Mtodo de vaciado en placa.

7.- Cul es el fundamento de la tcnica de DNS para determinar azucares reductores? Los azcares reductores pueden reducir al cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS) bajo determinadas condiciones. Esta prueba se basa en la colorimetra. Su eficacia consiste en que los azucares reductores reaccionan con el 3.5 cido dinitrosalicilico en una solucin alcalina. La prueba positiva da un color rojo-marrn. La coloracin se mide con un espectrofotmetro para mediciones cuantitativas. Esta prueba funciona para la glucosa, y otros azucares reductote, en este caso nos concentraremos en la glucosa. 8.- Qu es un azcar reductor y ejemplos? Es un azcar que tiene un grupo aldehdo libre capaz de donar electrones.

BIBLIOGRAFA
1) Brock Biologa de los Microorganismos.. 8th. edition. 2000. Prentice Hall International., Inc 2) Stanier, et. Al. Microbiologa. (1986). Cap. 9, pp 262-278, 4ta. Edicin. Editorial Reverte SA. Barcelona, Espaa. 3) Schlegel, HG Microbiologa General. (1988) pp 140-175, 3ra. Edicin. Editorial Ediciones Omega, Barcelona, Espaa. 4) Brock, TD. Microbiologa. (1987), Cap 9 pp 327-349, 6ta. Edicin, Prentice Hall Hispanoamericana SA. Mxico. 5) Casida I. Industrial microbiology. USA, Jhon Wiley and Sons inc. 1968.