Bloque2 - Cinetica Microbiana - BI - 20 - 21

Bloque
II : Cinética Enzimática y
Crecimiento Microbiano
TEMA 3: CINÉTICA MICROBIANA
INTRODUCCIÓN
LOS SERES VIVOS SE CLASIFICAN
PROCARIOTAS EUCARIOTAS
No forman tejidos Forman tejidos
Moneras Protoctistas Hongos Plantas Animales
Hongos: heterótrofos,
Bacterias levaduras
unicelulares (unicelulares) setas y
autotrófos o mohos(pluricelulares)
heterótrofos
Algas Autotrófos Heterótrofos
Protozoos,
unicelulares o
unicelulares
pluricelulares
heterótrofos
autotrófos
INTRODUCCIÓN
BIOTRANSFORMACIONES: aprovechamiento de los microorganismos
para transformar unos reactivos en productos.
‐ Células
‐ Productos intracelulares
‐ Productos extracelulares
Conocer el metabolismo del microorganismo de interés es

fundamental para “dirigir” el proceso biotecnológico hacia el
producto deseado.
METABOLISMO
Todos los procesos químicos que tienen lugar dentro de una célula
INTRODUCCIÓN
• Clasificación de los microorganismos por

fuente de energía y de carbono.
Fuente de
Clasificación Fuente de energía
carbono
Autótrofos
Fotoautótrofos Luz CO2
Quimioautótrofos Redox inorgánica CO2
Heterótrofos
Quimioheterótrofos Redox orgánica Carbono orgánico
Fotoheterótrofos Luz Carbono orgánico

INTRODUCCIÓN
• Tipos de metabolismos microbianos
Aceptor de
Ambiente Proceso
electrones
Aerobio Oxígeno Aerobio
Nitrato Desnitrificación
Anaerobio
Sulfato Sulfatoreducción
Dióxido de carbono Metanogénesis
CRECIMIENTO MICROBIANO
 Un proceso de crecimiento celular implica el consumo de sustratos que
suministren energía y materia prima para la síntesis de nuevo material celular.
 Requiere que el medio de cultivo contenga los elementos necesarios para la
formación del nuevo material celular.
 Que la energía libre de los sustratos consumidos sea superior a la energía
libre de las células o productos formados.
 Que todos los nutrientes estén en una forma compatible con el mecanismo
enzimático.
 Tener en cuenta que además de crecimiento se producirá la excreción de los
productos finales de su metabolismo.
• Estequiometría del crecimiento microbiano

El crecimiento microbiano se puede expresar en forma de reacción
química:
Sustratos ‐‐‐‐ biomasa + productos
Por ejemplo para el crecimiento aerobio de S. cerevisiae a partir de glucosa:
C6H12O6 + aO2 + bNH3 ‐‐‐‐ cCHxOyNz + dCO2 + eH2O

biomasa
El tratamiento estequiométrico de los procesos de crecimiento celular, consumo de
sustrato y producción de productos y calor puede llegar a ser una situación
bastante compleja.
Existen una serie de reglas o patrones de crecimiento que se cumplen de forma
general y facilitan dicho calculo estequiométrico.

Las cantidades necesarias de nutrientes pueden determinarse a partir
de la estequiometria.
Para poder calcular los coeficientes estequiométricos es necesario
conocer la composición elemental del m.o., que puede determinarse
experimentalmente por análisis elemental.
La formula empírica se expresa por convenio en función de un único
átomo de carbono. NUTRIENTE
MICROORGANISMO FÓRMULA EMPIRICA
LIMITANTE
Klebsiella aerogenes Glicerol CH1,74N0,22O0,43
Candida utilis Glucosa CH1,84N0,20O0,56
Candida utilis Etanol CH1,84N0,20O0,55
Saccharomyces CH1,703O0,459N0,171
Glucosa
cerevisiae
La expresión en forma de reacción química
Balances de materia y energía (principio de conservación) y la determinación de los
coeficientes estequiométricos.
No pueden incluirse todos los componentes del medio de cultivo
Para disminuir la complejidad del cálculo, se plantea la reacción en función de los
nutrientes limitantes (relacionado directamente con la producción de biomasa).
Ejemplo: determinación de los coeficientes estequiométricos para el crecimiento
aerobio de Saccharomyces cerevisiae sobre glucosa.
C6H12O6 + aO2 + bNH3 ‐‐‐‐‐‐‐ cCHxOyNz + dCO2 + eH2O

C: 6=c+d
H: 12+3b=1,703c+2e
O: 6+2ª=0,459c+2d+e
N: b=0,171c
Se precisa de una relación adicional (RQ: coeficiente respiratorio) moles de CO2
formados por mol de O2 consumido
SOLUCIÓN:
C6H12O6 + 3,942O2 + 0,330NH3 ‐‐‐‐‐‐‐ 1,928CHxOyNz + 4,072CO2 + 4,854H2O

• Estequiometría de formación de producto
En el transcurso de una fermentación se produce una gran variedad de
productos.
o Si el producto principal se produce como consecuencia del metabolismo
primario puede escribirse la reacción incluyendo el metabolito en productos:
aCHmOn + bO2 + cNH3 ‐‐‐‐ dCHxOyNz + eCO2 + fH2O + gCHyOw

biomasa metabolito
o Si el producto es un metabolito secundario no puede aplicarse una
estequiometria simple.
• Rendimientos
El concepto de sustrato limitante permite definir rendimientos a partir de datos
experimentales de la cantidad de sustrato consumido y biomasa obtenida puede
observarse una relación entre ambos, que en muchos casos es de proporcionalidad.
Rendimiento biomasa‐sustrato: (tasa de crecimiento) cociente entre el incremento
de masa celular obtenida y el consumo de sustrato (normalmente fuente carbono).
X concentración de biomasa
S concentración de sustrato
Puede haber usos del sustrato que no están asociados a la producción de biomasa
(por ejemplo un quimiheterótrofo, que va a utilizar el sustrato como fuente de
energía y de carbono).
o Aspectos nutricionales (fuente de carbono…)
o Condiciones de operación
RENDIMIENTOS • Temperatura
• Oxigeno
• pH
• Presión Osmótica
• Rendimientos
De forma similar a la que se define el rendimiento Biomasa/Sustrato pueden
definirse otros rendimientos para otras parejas de paraámetros para el proceso.
Simbolo Definción
Yx/s g biomasa seca por g ó mol de sustrato consumido
g de biomasa seca por g ó mol oxígeno consumido
Yx/o
Yp/s g o mol de producto por g ó mol de sustrato consumido

Yc/s mol de CO2 producido por mol de sustrato consumido
• Rendimientos
Los valores de estos rendimientos dependen de la especie microbiana,
del sustrato consumido y condiciones de operación.
RENDIMIENTOS BACTERIANOS SOBRE DIVERSAS FUENTES DE CARBONO
Yx/s Yx/o
Sustrato
(g cél/g sub) (g cél/g O2)
Malato 0,34 1,02
Acetato 0,36 0,70
Glucosa 0,51 1,47
Metanol 0,40 0,44
Etanol 0,68 0,61
Parafina 1,03 0,50
Metanol 0,62 0,20
• Rendimientos
Mediante las definiciones de los rendimientos, pueden relacionarse las
velocidades de aparición y desaparición de las diferentes especies.
Una vez caracterizado el comportamiento cinético de una de ellas, se
pueden obtener las demás:
=
/ /
𝑟 : velocidad de desaparición de sustrato y 𝑟 , 𝑟 , 𝑟 las de aparición

de biomasa, producto y CO2 respectivamente.
• Modelos de crecimiento
El proceso de crecimiento celular puede llegar a ser muy complejo.
En la tabla se recogen los aspectos más importantes entre las células y el medio
ambiente a lo largo de su crecimiento.
▫ Las reacciones llevadas a cabo directamente por células,

presentan una gran complejidad a la hora de encontrar un
modelo cinético que describa su comportamiento.
▫ La situación se complica por la heterogeneidad en la actividad

catalítica de las células y por los medios de cultivo.
▫ Es habitual que en el cultivo haya células con distinta edad y

evolución que pueden tener un comportamiento distinto según
sea su entorno.
▫ Aunque en los sistemas de fermentación se promueve la

uniformidad de propiedades (concentración de sustrato, pH,
temperatura…) no es suficiente.
Un modelo cinético que contemple todos los aspectos citados
sería muy difícil de formular, siendo poco práctico por la
información requerida.
Será por tanto necesario hacer una serie de SIMPLIFICACIONES
para disponer de modelos simples y poder utilizarlos en el
diseño de biorreactores.
Por tanto a la hora de formular un modelo se puede considerar:
 Modelo estructurado: considera que el sistema está constituido por
múltiples factores que interviene en la actividad de la célula.
 Modelo no estructurado: globalizaría esos factores en uno solo (factor
limitante)
 Modelo segregado: considera las características individuales de las
células.
 Modelo no segregado: describe la células como un promedio.
La tendencia más simplista (modelo no estructurado y no segregado) es
considerar que el proceso fermentativo depende de un componente
individual que controla la velocidad, (sustrato limitante), y que todas las
células son iguales.
 Estos modelos más sencillos ignoran completamente la
estructura interna de las células y consideran a la población
como una unidad homogéneamente distribuida.
 Aunque los modelos no estructurados son una gran

simplificación, son útiles con fines tecnológicos, ya que
proporcionan ecuaciones sencillas, en las que se trata al
microorganismo como una especie reactante sencilla.
 El esquema más complicado al que podría responder este

tipo de modelos es, donde aparece el consumo de sustratos
por las células, tanto para crecer como para energía de
mantenimiento.
• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR
¿QUÉ DEBERIAMOS ENTENDER POR CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS?
• Incremento del número de células o masa
bacteriana con el tiempo.
Aumento de masa del cultivo
El crecimiento de un cultivo se puede expresar en función: Aumento del número de células
La selección de un método para cuantificar el crecimiento microbiano, depende de:
 Propiedades de la biomasa (bacterias, hongos)
 Propiedades del medio de cultivo
 Sensibilidad requerida
 Confianza del método
 Velocidad necesaria
DETERMINACIÓN MASA DEL CULTIVO
Métodos Directos
Determinación del peso húmedo
Determinación del peso seco
Métodos Indirectos
Consumo de nutrientes o de producción de metabolito por unidad de tiempo
Métodos turbidimétricos
Aumento de masa del cultivo
El crecimiento de un cultivo se puede expresar en función: Aumento del número de células
DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS
Métodos Directos
Cámara de recuento de Petroff‐Hauser
Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter)
Métodos Indirectos
Recuento de viables en placa
Recuento sobre filtros

Métodos Directos
Cámara de recuento de Petroff‐Hauser
Consiste en un portaobjetos especial con una graduación en superficie y unas medidas muy concretas:
 Excavación con 0.02 mm de profundidad
 Área de 1 mm2, dividida en 25 cuadrados
Ventajas: método muy rápido.
Inconvenientes: sirve para suspensiones relativamente concentradas (>106 céls./ml). Por debajo de este
número de células vistas es muy pequeño y poco significativo estadísticamente. En bacterias móviles, hay
que inmovilizarlas previamente, con una mezcla de alcohol y agua.

Métodos Directos
Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter)
Se hace pasar una suspensión microbiana por un tubo capilar, entre los dos polos de una
corriente eléctrica. Cada vez que pasa una partícula (p. ej., bacteria) se interrumpe la
corriente, y se detecta el número y tamaño de las partículas que van pasando. (El tamaño
detectado es función de la intensidad del pulso de voltaje al paso de la partícula).
Inconvenientes: hay que usar suspensiones absolutamente libres de partículas extrañas
(las pequeñas serían contabilizadas erróneamente como bacterias, y las mayores pueden
obturar el orificio del aparato).
Comentario: equipo utilizado para el análisis de células sanguíneas.

Métodos Indirectos
Los métodos directos no distinguen entre células vivas y muertas. Para contar las
células vivas en el laboratorio se hace el recuento de viables. (Una célula se define
como viable cuando, en un medio adecuado, es capaz de dividirse). El método
habitual es sembrar pequeñas alícuotas de diluciones adecuadas de un cultivo
original sobre placas de Petri. Cada célula viable dará origen a una colonia visible
(UFC) después del tiempo adecuado de incubación.
Contando las colonias (UFC), teniendo en cuenta la dilución de la que proceden y el
volumen de alícuota utilizado, se calcula el número de células viables en la
suspensión original.
En los métodos de conteo en placa, el número de colonias debe, permitir contarlas, y a la
vez suficientemente grande para que sea significativo estadísticamente: COLONIAS entre
(25‐250). UFC: interpretamos que precede de un solo individuo.

Métodos Indirectos

Métodos Indirectos
Recuento sobre filtros
Se usa para suspensiones diluidas de bacterias. Se hace pasar un gran volumen
de suspensión a través de una membrana estéril con un diámetro de poro
adecuado para retener los microorganismos.
El filtro se coloca a continuación, sobre la superficie de un medio de cultivo
sólido, y se cuentan las colonias que se forman sobre el filtro a partir de las
células retenidas. (El número de viables se debe referir al volumen de suspensión
filtrado).

Métodos Directos
Determinación del peso húmedo
Procedimiento:
• Se tara un tubo de centrífuga
• Se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante
• Se determina el peso del sedimento.
Inconvenientes: grandes errores, debido a la presencia de partículas extrañas que
no se logran separar de las células (nutrientes…) y al líquido intercelular retenido.

Métodos Directos
Determinación del peso seco
Una alícuota de cultivo se centrifuga, y el pellet obtenido, una vez lavado se
seca en estufa y se pesa. Se admite que 1mg contiene entre 5 y 10 . 109 células.
Ventaja: es muy sencillo y relativamente rápido.
Inconveniente: para obtener una medida fiable es necesario asegurar que con
el lavado del pellet se eliminan todos los materiales que no son células.
Métodos Indirectos
Consumo de nutrientes o de producción de metabolito por unidad de tiempo
Ejemplos: consumo de oxígeno, consumo o producción de CO2,
producción de ácido láctico,…

Métodos Indirectos
Métodos turbidimétricos
Muy usados en el laboratorio. La base de este método consiste en la medición de la
cantidad de luz dispersada o transmitida a través de un cultivo bacteriano. Se suele
trabajar en unidades (D.O.) de densidad óptica, es decir, absorbancia de la luz transmitida
a través de la suspensión de células.
Hay que realizar una curva estándar que relacione los valores de Absorbancia y
concentración celular.
Se utiliza el espectrofotómetro, normalmente con medidas entre 600‐700 nm.
Es un método rápido de manipulación sencilla.
El inconveniente es que solo es aplicable a cultivos relativamente concentrados y
cuyo medio sea transparente o al menos “poco” coloreado.
• CINÉTICA DE CULTIVO DISCONTINUO
Los microorganismos se suelen cultivar
en medio líquido en un sistema
discontinuo (batch).
Sistemas cerrados de volumen fijo en el
cual los sustratos se adicionan al inicio
del cultivo y se consumen durante el
proceso, facilitando el crecimiento
microbiano.
Se puede representar el crecimiento del
microorganismo (lnX), frente al tiempo
de incubación, obteniendo una curva
que frecuentemente tiene cuatro fases:
• CINÉTICA DE CULTIVO DISCONTINUO (Batch)
LATENCIA: no hay incremento en el número de células, es un proceso de
adaptación del inóculo al medio. Es tanto más largo cuanto más distintas son
las nuevas condiciones en las que las células deben crecer, respecto a las que
tenían originalmente.
CRECIMIENTO EXPONENCIAL: rápida multiplicación de células. Crecimiento
balanceado (composición de células constante) de forma exponencial, bajo
condiciones apropiadas la velocidad será máxima.
ESTACIONARIA: En un cultivo discontinuo existen limitaciones de crecimiento
por agotamiento de algún nutriente esencial, acumulación de tóxicos, etc. La
velocidad de crecimiento es nula. Las células son activas y pueden producir
metabolitos secundarios.
MUERTE: Esta fase no suele ser interesante en procesos industriales que
habitualmente se suelen diseñar lejos de estas condiciones.
El objetivo principal de un buen proceso
biotecnológico para producción de un
metabolito primario: es minimizar la
duración de la fase lag y
maximizar la velocidad y
duración de la fase exponencial,
ya que en esta fase es donde se produce el
compuesto deseado, y ralentizar al
máximo la llegada a la fase estacionaria.
• CINÉTICA DE CULTIVO MICROBIANO
¿QUÉ DEBERIAMOS ENTENDER POR CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE
MICROORGANISMOS?
• Se define como un incremento ordenado de los principales
constituyentes de un organismo.
• Involucra síntesis de estructuras celulares, ácidos nucleicos,
proteínas y otros componentes celulares a partir de
nutrientes.
• A nivel físico se traduce en una reacción autocatalizada de
primer orden.
CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE MICROORGANISMOS En función de la masa celular
El crecimiento, o la velocidad de crecimiento, se define como la
derivada de la concentración celular respecto del tiempo, (como
depende de la población total de individuos), se considera la
velocidad especifica de crecimiento.
X= concentración celular
µ= velocidad especifica de crecimiento
CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE MICROORGANISMOS
La velocidad especifica de crecimiento depende de la naturaleza
del microorganismo, del sustrato y su concentración, de la
presencia y concentración de metabolitos producidos y de
factores ambientales como temperatura y pH.
Cuando no existe limitación de nutrientes, los microorganismos

crecen siguiendo una dinámica exponencial con velocidad
específica de crecimiento prácticamente constante. Por lo que
integrando la ecuación anterior:
1 𝑑𝑥
𝜇
𝑥 𝑑𝑡
x(t)= x(0)exp 𝟎
CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE MICROORGANISMOS
Se define el tiempo de duplicación o de generación (tg) como el
intervalo de tiempo necesario para que se doble la población celular:
De la expresión
.
anterior, condición
x=2x0
tg= µ µ
El tiempo de duplicación y la velocidad específica de crecimiento dependen del
microorganismo y del medio de cultivo, con valores típicos como:
Bacteria Levadura Hongo Celula

filamentoso vegetal
0.3 1.5 3 24
tg(h)
µ(h‐1) 2.3 0.46 0.23 0.0287
CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE MICROORGANISMOS En función del número de individuos
REPRESENTACIÓN DIRECTA
Tiempo(h) Población
1 1
2 2
3 4 Crecimiento exponencial
4 8 9000000
5 16
8000000
6 32
7 64
7000000
8 128
9 256 6000000
población
10 512
11 1024 5000000
12 2048
13 4096 4000000
14 8192
15 16384 3000000
16 32768
17 65536 2000000
18 131072
1000000
19 262144
20 524288
0
21 1048576 0 5 10 15 20 25 30
22 2097152
23 4194304 tiempo
24 8388608
CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS En función del número de individuos
Tiempo(h) POBLACIÓN LN(POBLACIÓN)

REPRESENTACIÓN LOGARITIMICA
1 1 0
2 2 0,693147181
18
3 4 1,386294361
Crecimiento en escala
4 8 2,079441542
16 semilogaritmico
5 16 2,772588722
6 32 3,465735903
7 64 4,158883083 14
8 128 4,852030264
9 256 5,545177444
12
10 512 6,238324625
LN población
11 1.024 6,931471806
12 2.048 7,624618986 10
13 4.096 8,317766167
14 8.192 9,010913347 8
15 16.384 9,704060528
16 32.768 10,39720771 6
17 65.536 11,09035489
18 131.072 11,78350207
19 262.144 12,47664925 4
20 524.288 13,16979643
21 1.048.576 13,86294361 2
22 2.097.152 14,55609079
23 4.194.304 15,24923797 0
24 8.388.608 15,94238515 0 5 10 15 20 25
tiempo
VELOCIDADES ESPECÍFICAS
Velocidad específica de crecimiento del microorganismo
integrando
𝒅𝒙 𝟏 𝝁∆𝒕
𝜇 𝒒𝒙 𝟎
𝒅𝒕 𝒙
Velocidad específica de consumo de sustrato
integrando
𝒅𝒔 𝟏
𝒒𝒔 𝐒𝐅 𝐒𝟎 𝐪𝐬𝐗𝟎∆𝐭
𝒅𝒕 𝒙 𝑆0 𝑆𝐹
𝑞𝑠
𝑋0∆𝑡
Velocidad específica de producción de metabolito (productos)
integrando
𝒅𝒑 𝟏
𝒒𝒑 𝐏𝐅 𝐏𝟎 𝐪𝐩𝐗𝟎∆𝐭
𝒅𝒕 𝒙 𝑞𝑝
𝑃𝐹 𝑃0
𝑋0∆𝑡
DEFINICIÓN GRÁFICA DE 𝜇
lnX
lnx2
𝑦2 𝑦1
𝑚
∆𝑡
lnx1
𝑿𝟐
𝒍𝒏𝑿𝟐 𝒍𝒏𝑿𝟏 𝒍𝒏
𝑿𝟏
=
∆𝒕 ∆𝒕
𝝁
Gráficamente va a t1 t2 tiempo
depender de la
base del logaritmo ∆𝑡
𝐥𝐠𝐛𝐱
𝐥𝐨𝐠𝐚𝐱
𝐥𝐨𝐠𝐛𝐚
• CINÉTICA DE CRECIMIENTO: ECUACIÓN DE MONOD
Falta relacionar la tasa de crecimiento (μ) con la concentración de substrato (S).
Una de las expresiones matemáticas que relaciona ambos parámetros se conoce con
el nombre de ecuación de Monod y es la siguiente:
En esta ecuación la tasa de crecimiento (μ) depende de la μ máxima que puede
alcanzar el microorganismo (μmax), de la concentración de sustrato (S) y de una
constante (de afinidad por el sustrato), Ks.
• Cuando S >>Ks las concentraciones del resto de nutrientes no han cambiado de
forma notable, y Ks es la mitad del valor de la μmax.
• Cuando S < Ks la velocidad de crecimiento depende de forma lineal de S.
• Cuando S>Ks la velocidad de crecimiento es independiente de S.
• CINÉTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR
En la práctica, los valores de Ks suelen ser muy bajos, lo que

indica que los microorganismos crecen con tasas (μ) muy
próximas a las máximas (μmax) a concentraciones de
sustrato bajas y sólo cuando estas son extremadamente
bajas, la velocidad de crecimiento se reduce.
Esto es debido a que los sistemas de transporte a través de

membrana de nutrientes (permeasas), han conseguido
evolucionar hasta conseguir tener valores de Ks
considerablemente reducidos, que les permite sobrevivir,
en condiciones incluso, de muy bajas concentraciones de
fuente de carbono.
(ejemplo excell): determinación de “mu” gráfica o analíticamente
• CINÉTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR: otros modelos
Uno de los inconvenientes de la ecuación de Monod es la determinación de la
constante Ks, por su pequeño valor.
Además es muy simple y no permite obtener una buena representación de los datos de
crecimiento en muchas condiciones.
Se han desarrollado otros modelos que a modo de ejemplo se exponen:
Tessier
Contois
/
𝜇=𝜇 1 𝑒 𝑆
Moser 𝜇 𝜇
𝐵𝑋 𝑆
𝑆
𝜇 𝜇
𝐾𝑠 𝑆
Debe tenerse en cuenta que en muchos casos el crecimiento también viene afectado
por inhibición por sustrato, en estos casos podemos encontrar algunos ejemplos de
modelos:
Andrews y Noak Webb
𝛽𝑆
𝑆 1
𝜇=𝜇 𝜇 𝜇 𝐾𝑖𝑠
𝑆
𝐾𝑠 𝑆
𝐾𝑖𝑠
Aiba y col.
𝑆 𝑆
𝜇 𝜇 exp
𝐾𝑠 𝑆 𝐾𝑖𝑠
Debe tenerse en cuenta que en muchos casos el crecimiento también viene afectado
por inhibición por el producto, en estos casos podemos encontrar algunos ejemplos de
modelos:
Dagley y Hinshelwood Ghose y Tyagi
𝜇 𝜇 (1‐
𝜇=𝜇 1 𝑘𝑃
Levenspiel
Holzber y col
𝜇 𝜇 ‐k1(P‐k2) 𝜇=𝜇 (1‐ ∗

𝑛
En todos estos modelos, 𝜇, 𝜇max y Ks ya han sido definidas, P es la concentración del

producto inhibidor y los demás parámetros corresponden a las constantes mediante
las que los modelos tratan la inhibición por el sustrato o producto.
La ecuación de Monod generalizada, propuesta por Han y Levenspiel intenta cubrir la
mayor parte de las situaciones mencionadas, en particular la inhibición por el
sustrato, producto y el crecimiento de las propias células.
𝑛
Su forma original: 𝜇=𝜇 1 ∗
∗
O también: =
𝐶 𝑛 m
Considerando : 𝑘 𝜇 1 𝐾 𝐾 1 ∗
𝐶∗
𝑛
𝜇=𝜇 1 ∗
∗
Ci: concentración de inhibidor
Ci*: concentración crítica del inhibidor que para completamente el proceso (en este
caso el crecimiento celular)
n y m: constantes relacionadas con el poder tóxico del inhibidor
Sustituyendo en la ecuación generalizada Ci por S, P o X se podrá tratar cada una de
las inhibiciones individualmente.
Cuando la Ci<<Ci* la ecuación se transforma en la de Monod
Para el caso de la inhibición por producto y células las constantes de la ecuación se
pueden evaluar a partir de una linealización de Lineweaver‐Burk, de 1/ 𝜇 frente 1/S.
𝐶𝑖 𝑚
1 𝐾𝑠 1 1 1
𝐶𝑖 ∗
𝜇 𝐶𝑖 𝑛 𝑆 𝐶𝑖 𝑛
𝜇 1 𝜇 1
Ecuación de 𝐶𝑖 ∗ 𝐶𝑖 ∗
Monod
generalizada O bien:
1 𝐾𝑠𝑜𝑏𝑠 1 1
𝜇 𝑘𝑜𝑏𝑠 𝑆 𝑘𝑜𝑏𝑠
En la figura siguiente se recoge la forma que toma dicha linealización para las seis
formas más comunes de inhición:
a) Inhibición no
competitiva: con n>0 y m=0
b) Inhibición competitiva:
con n=0 y m<0
c) Inhibición generalizada
(acompetitiva): con n>m>0
d) Inhibición generalizada
(acompetitiva): con m>n>0
e) Inhibición generalizada
(acompetitiva): con m=n>0
f) Caso general: con n>o y
m<0
Análisis de modelos de crecimiento microbiano
MODELO DE MONOD
El modelo matemático de Monod describe el crecimiento microbiano
de un cultivo en suspensión, en relación con la concentración de un
nutriente limitante.
ANTECEDENTES Similar a la ecuación cinética de Michaelis‐Menten, pero se obtiene
de forma empírica.
Gráficamente es una hipérbola con giro, que tiende asintóticamente
hacía µmax y pasa por el origen de coordenadas.
𝑺
𝝁 𝝁𝒎𝒂𝒙
𝑺 𝑲𝑺
Ks: cte de afinidad por el sustrato: Un microorganismo, puede tener diferentes Ks para

distintos sustratos, condiciones de proceso o estado vital de la célula.
MODELO DE MONOD
Por ejemplo: distintas gráficas con diferentes sustratos darán hipérbolas mas “tumbadas”,
resultando valores de Ks mayores.
NOTA: µmax/2 es un valor “alcanzable” y por tanto más preciso que µmax, que
posiblemente nunca se pueda alcanzar (asintótico).
MODELO DE MONOD
LINEALIZACIÓN DE MONOD
Para poder trabajar mejor, se puede linealizar, mediante las mismas condiciones que
la ecuación de Michaelis, por ejemplo, representando los inversos de la velocidad de
crecimiento frente al inverso de la concentración de sustrato.
S
μ μ
S K
1 𝑆 𝐾
𝜇 𝜇 𝑆
1 𝑆 𝐾 1
𝜇 𝜇 𝑆 𝜇 𝑆
𝑦 𝑏 𝑚𝑥
MODELO DE MONOD
ATENCIÓN: para tomar cinéticas de crecimiento hay que tener en cuenta donde se
van a producir más cambios, a la hora de recoger más puntos experimentales.
No se deben obtener distribuciones concentradas de puntos en una determinada
zona y pocos en otra zona. Puede dificultar la distinción de puntos que pueden
desecharse.
Hay que pensar la estrategia de recogida de datos para que ofrezca la información
más robusta y describa el crecimiento de forma más real.
Tiempo (h) S (g/L) X (g/L) Tiempo (h) S (g/L) X (g/L)
0 10 0,1 0 10 0,1
1 9,99 0,11 2 9,9 0,12
2 9,90 0,12 4 9,6 0,18
3 9,60 0,14 ¿cuál nos 6 8,6 0,42
4 9,60 0,18 7 7 0,72
quedamos?
5 9,20 0,26 7,5 5,12 1,03
6 8,6 0,42 8 3 1,5
7 7 0,72 8,5 0,1 1,72
8 3 1,5 9 0 1,72
9 0 1,72
MODELO DE TESSIER
El modelo de Tessier gráficamente consiste en restar a la función y=x=1, (en esta caso
correspondería a la µmax ) la función de 𝑦 𝑒 , el resultado es una hipérbola que se
parece a la de Monod.
Ecuación de Tessier
𝑺
𝝁 𝝁𝒎𝒂𝒙 𝟏 𝒆 𝑲𝒔 )
MODELO DE TESSIER
El valor (µmax/2) no se corresponde con la Ks, lo podemos comprobar si sustituimos S=Ks
en la ecuación de Tessier y obtendremos en este caso un valor para Ks que corresponde
al 63,2% del crecimiento, (significa que Ks es más grande para Tessier que para Monod).
μ μ 1 e )
𝐊𝐬
μ μ 1 e )
μ μ 1 e )
μ μ 1 0,3678 )
μ μ 0,6321 )
Debemos usar el modelo dependiendo de la cinética obtenida, y utilizar el modelo que

mejor se ajuste.
Para un microorganismo que tuviera la misma Ks, para el modelo de Tessier crecería
más rápido que para el modelo de Monod.
LIMITACIONES TESSIER:
1) Solo tiene en cuenta el sustrato
2) Imposible de linealizar
MODELO DE CONTOIS
Introduce la constante de equivalencia (B), entre la concentración de sustrato y de
célula, es decir, (B.X), por tanto, debe tener las mismas unidades que la concentración
de sustrato (S). (B= gsustrato/gcélula).
Significado físico: “cada célula necesita B gramos de sustrato para crecer, si no alcanza
ese valor, el crecimiento se ralentiza”.
Este modelo se aplica, sobre todo, para células que crecen en forma de colonias
grandes o inmovilizadas en un soporte.
Por ejemplo: un hongo que crece formando hifas, provoca que las células más externas
puedan acceder al sustrato sin limitación, por el contrario las del interior estarán
limitadas por difusión de los nutrientes.
Entonces se puede concluir que para este modelo, cuanto más biomasa, más se limita la
difusión de sustrato, para las células no expuestas superficialmente.
Ecuación de 𝝁𝒎𝒂𝒙 𝑺
Contois 𝑺 𝑩𝑿
MODELO DE CONTOIS
LINEALIZACIÓN DE CONTOIS
Se obtiene una recta de pendiente negativa que baja desde µmax con pendiente –B/S.
Representamos (µ) frente a (µX)
𝝁𝒎𝒂𝒙 𝑺
𝝁
𝑺 𝑩𝑿
μ S BX μ S
Dividiendo por S
μS μBX μ S y reordenando
𝐵𝑋
𝜇 𝜇 𝜇
𝑆
𝑩
𝝁 𝝁𝒎𝒂𝒙 𝝁X
𝑺
y= b + mx
MODELO DE CONTOIS
LINEALIZACIÓN DE CONTOIS
En la práctica es mejor trabajar haciendo el sustrato constante, entonces estas cinéticas,
mejor trabajar con muchos matraces a concentración de sustrato cercana a la
concentración óptima.
Entonces, para obtener diferentes condiciones de estudio, lo que será variable en cada
experimento será Xo y medir a un intervalo de tiempo fijo.
X0 Xf µ
0,001 Experimental calculamos Las cineticas serían con la misma concentración
de sustrato (25g/L), a un tiempo de cultivo de
0,002 1h por ejemplo poner diferentes X0 que tienes
0,005 en cultivo previo y mides la concentración final
0,01 de células para poder calcular la mu
0,05
0,1
1
MODELO DE HALDANE
 Se trata de un modelo diseñado inicialmente para estudiar cinéticas enzimáticas y
fue adaptado para crecimiento microbiano.
 ¡¡La aportación de Haldane consistió en darse cuenta que, una concentración muy
alta de sustrato inhibe la acción enzimática!!.
 Es un modelo hiperbólico, similar a Monod, µmax/2 equivale a Ks.
Ksi: concentración a la cual existe inhibición por parte del sustrato. (Un ejemplo de
aplicación de este hecho, es la conservación de alimentos por alta concentración de
azúcares, por eliminación de la actividad del agua).
ACLARACIÓN: los modelos de Tessier y Contois se pueden linealizar, pero es bastante

complejo, este modelo tiene la ventaja que si es fácilmente linealizable.
𝝁𝒎𝒂𝒙 𝑺
Ecuación de 𝝁
Haldane 𝑺𝟐
𝑺 𝑲𝒔
𝑲𝒔𝒊
MODELO DE HALDANE
Dependerá especialmente del sustrato y de los valores de Ks y Ksi, que serán diferentes
dependiendo del sustrato.
Por ejemplo supongamos que se trata de glucosa: (los valores de Ks serán muy pequeños
y Ksi más grande relativamente a otro sustrato de menor afinidad).
Por el contrario, si el sustrato es fenol: (vamos a decir que se lo come pero no le gusta…)
el resultado es que la curva de Haldane se “estrecha” un poco más. Lo que puede más o
menos coincidir, es el valor de la concentración óptima de sustrato.
MODELO DE HALDANE
Mejor graficamos µ frente log S.
Gráfica tipo gaussiana con dos ramas prácticamente rectas donde el punto de corte
representará µmax y de su corte con el eje x obtendríamos a continuación la
concentración óptima de sustrato.
Por otra parte al hacer µmax/2 los cortes corresponderán con Ks y Ksi en cada rama.
Este modelo suele describir el crecimiento como menos ideal a la hora de alcanzar
la µmax, que el modelo de Monod.
MODELO DE HALDANE
Comentario: en este caso para las cinéticas se pueden realizar con diferentes
matraces y cada uno con distinta concentración de sustrato, todos arrancan al mismo
tiempo y mides la concentración final de biomasa (Xf) y calculas la µ, por ejemplo con
un ∆t= 1h y un inóculo también fijo, por ejemplo de 1g/L (Xo).
(S) g/L Xf µ
0,001 0,0012
0,005 0,0075
0,001
0,1
0,5
1
5
MODELO DE HALDANE-LUONG
Luong hizo una aportación que consistió en lo siguiente: graficando µ frente la
concentración del producto (P), observó que disminuye la (µ) con la concentración de
producto, y el valor de (P) donde se inhibe totalmente, lo llamó Kp.
Entonces la ecuación de Hadane modificada por Luong consiste en poner la µ en función de

la concentración de producto, (es decir, añadiendo el término elevado a r que sería el factor
de rapidez de inhibición por el producto, termino de Luong).
ECUACIÓN DE HALDANE‐LUONG
𝒓
MODELO DE HALDANE-LUONG
Cuando r <1 se comporta inicialmente “normal” y va creciendo con el producto, pero llega
un momento donde se inhibe de golpe…
Cuando r >1 la inhibición es mucho más presente desde el principo de la cinética y se inhibe
rápidamente desde el principio.
Productos que habitualmente inhiben el crecimiento: ácidos como el láctico, propiónico,
etanol, en general, productos secundarios. Ejemplo: cerveza, 7º (% v/v), teniendo en cuenta
que la densidad del etanol es 0,789g/ml, tenemos sobre 55g etanol/L, por tanto la Kp para
la mayoría de las levaduras es de unos 55g/L.
MODELO DE PASTEUR
Pasteur no propuso modelos matemáticos, solo postulados, así que existen modelos que
cumplen con los postulados de Pasteur, y entonces hablamos de modelo Pasteur.
Postulados
1. Con elevada concentración de oxígeno no se forma o muy poco alcohol, y se ve favorecido
el crecimiento de la levadura.
2. Con baja concentración de oxígeno casi no crece la levadura y se ve favorecida la
producción de etanol.
3. Cuanto mayor sea el inóculo utilizado más se favorecerá la formación de alcohol.
A partir de estas ideas presento la teoría: el producto es inductor de su propio metabolismo,
porque permite activar las enzimas relacionadas.
Por ejemplo las levaduras “ secuestran o retiran glucosa del medio” transformándolo en
etanol, incluso en presencia de oxigeno, se aseguran que no esté disponible la glucosa para
otras cepas, al menos para las que no metabolicen etanol. Por eso es habitual que en el
proceso de elaboración de cerveza se ponga al principio de la fermentación un poco de
cerveza para inducir el metabolismo hacía la formación de etanol.

Bloque2 - Cinetica Microbiana - BI - 20 - 21

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Bloque2 - Cinetica Microbiana - BI - 20 - 21

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Bloque

Moneras Protoctistas Hongos Plantas Animales

Conocer el metabolismo del microorganismo de interés es

• Clasificación de los microorganismos por

Fotoautótrofos Luz CO2

Quimioautótrofos Redox inorgánica CO2

Quimioheterótrofos Redox orgánica Carbono orgánico

Fotoheterótrofos Luz Carbono orgánico

• Tipos de metabolismos microbianos

• Estequiometría del crecimiento microbiano

C6H12O6 + aO2 + bNH3 ‐‐‐‐ cCHxOyNz + dCO2 + eH2O

• Estequiometría del crecimiento microbiano

• Estequiometría del crecimiento microbiano

• Estequiometría del crecimiento microbiano

C6H12O6 + aO2 + bNH3 ‐‐‐‐‐‐‐ cCHxOyNz + dCO2 + eH2O

C6H12O6 + 3,942O2 + 0,330NH3 ‐‐‐‐‐‐‐ 1,928CHxOyNz + 4,072CO2 + 4,854H2O

• Estequiometría de formación de producto

aCHmOn + bO2 + cNH3 ‐‐‐‐ dCHxOyNz + eCO2 + fH2O + gCHyOw

Yp/s g o mol de producto por g ó mol de sustrato consumido

𝑟 : velocidad de desaparición de sustrato y 𝑟 , 𝑟 , 𝑟 las de aparición

▫ Las reacciones llevadas a cabo directamente por células,

▫ La situación se complica por la heterogeneidad en la actividad

▫ Es habitual que en el cultivo haya células con distinta edad y

▫ Aunque en los sistemas de fermentación se promueve la

 Aunque los modelos no estructurados son una gran

 El esquema más complicado al que podría responder este

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

Cuando no existe limitación de nutrientes, los microorganismos

Bacteria Levadura Hongo Celula

Tiempo(h) POBLACIÓN LN(POBLACIÓN)

En la práctica, los valores de Ks suelen ser muy bajos, lo que

Esto es debido a que los sistemas de transporte a través de

Dagley y Hinshelwood Ghose y Tyagi

𝜇 𝜇 ‐k1(P‐k2) 𝜇=𝜇 (1‐ ∗

En todos estos modelos, 𝜇, 𝜇max y Ks ya han sido definidas, P es la concentración del

Ks: cte de afinidad por el sustrato: Un microorganismo, puede tener diferentes Ks para

Debemos usar el modelo dependiendo de la cinética obtenida, y utilizar el modelo que

ACLARACIÓN: los modelos de Tessier y Contois se pueden linealizar, pero es bastante

Entonces la ecuación de Hadane modificada por Luong consiste en poner la µ en función de

También podría gustarte