Práctica 5.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
EQUIPO 4
Bernardino Vargas Aily
Castellanos Ventura Karen
Cruz Vargas Sheila
¿SE PUEDE DETERMINAR LA ACTIVIDAD DE LA
ENZIMA CATALASA POR LA CANTIDAD DE
Montero Loranca Josué Horacio
MARTES: 10:00-12:00
Sección: 05L
OXÍGENO LIBERADO?
Conceptos
Enzima
Una enzima es un catalizador biológico. Es una proteína que acelera la
velocidad de una reacción química específica en la célula. Cataliza las
reacciones bioquímicas del metabolismo. Las enzimas actúan sobre las
moléculas conocidas como sustratos y permiten el desarrollo de los
diversos procesos celulares.
Características de las enzimas
La característica sobresaliente de las enzimas es su ESPECIFICIDAD, de ahí
que tienen Naturaleza proteica, diferente localización, a menudo requieren
cofactores, Se requieren en mínimas concentraciones.
Clasificación general de las proteinas
Definiciones
- Sitio activo. La parte de la enzima donde se une el sustrato se llama el
sitio activo (ya que ahí es donde sucede la "acción" catalítica).
- Coenzima. Son componentes de las enzimas. Se trata de sustancias orgánicas
no proteicas que participan de las reacciones catalizadas por las enzimas.
- Cofactor. Molécula que resulta imprescindible para el funcionamiento de una
enzima. Se trata de componentes termoestables que tienen una masa molecular
reducida y que no son proteicos.
- Factores que afectan la actividad de las enzimas. La actividad enzimática
puede verse afectada por diversos factores, como temperatura, pH y
concentración.
- Desnaturalización. Es un cambio estructural de las proteínas o ácidos
nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo
funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades físico-químicas.
- Inhibición. Es una molécula que se une a una enzima y disminuye su
actividad. Esta unión puede ser reversible, la más común en el caso de
fármacos, o irreversible, que suele ser por xenobióticos de alta capacidad
tóxica.
- Tipos de Inhibición y características. Irreversible; cuando el inhibidor o
veneno modifica o destruye el enzima, que no puede recuperar su actividad.
Reversible; cuando el complejo enzima-inhibidor puede disociarse y volver a
actuar. Existen dos tipos: Inhibición competitiva; el inhibidor compite con
el sustrato por el centro activo, ya que es una molécula parecida y el enzima
no es capaz de distinguir entre uno y otro. Inhibición no competitiva; el
inhibidor no compite con el sustrato ya que no interacciona con el centro
activo, sino con otros grupos del enzima. Suele producir una modificación en
la conformación del enzima que impide la unión del sustrato, pudiendo,
además, unirse al enzima o al complejo enzima-sustrato.
Catalasa
La catalasa es una enzima oxidorreductasa (H2O2: H2O2
oxidorreductasa) ampliamente distribuida en la naturaleza.
Cataliza, en diversos tejidos y tipos de células, la reacción de
“descomposición” del peróxido de hidrógeno en oxígeno molecular y
agua. Su estructura está conformada por cuatro dominios compuestos
por estructuras secundarias formadas por hélices alfa y láminas β-
plegadas, y estudios realizados en la enzima del hígado de humanos
y bovinos han demostrado que estas proteínas están unidas a cuatro
moléculas de NADPH. La catalasa es una enzima perteneciente a la
categoría de las oxidorreductasas.
¿Que tipo de Inhibidores son el Plomo y el Cianuro?
El Plomo es un ejemplo de inhibidor no competitivo. Forma enlaces covalente con los
grupos sulfhídrilos de la cisteína en las proteínas. Reacciona con la ferroquelatasa,
enzima que incorpora hierro a la síntesis del grupo hemo de la hemoglobina y otras
hemoproteínas.
El Cianuro en su acción biológica lo caracteriza como un inhibidor enzimático no
específico; inhibe varias enzimas, tales la succinildeshidrogenasa, la
superóxidodismutasa, la anhidrasa carbónica, la citocromooxidasa y otras, bloqueando
la producción de ATP e induciendo hipoxia celular.
¿Cuál es elefecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
La mayoría de las proteínas a temperaturas mayores de 45°C – 60°C sufren desnaturalización debido a la ruptura de puentes de hidrógeno y
fuerzas de Van Der Waals. Algunas proteínas recobran su conformación al bajar lentamente la temperatura, a esto se le llama
renaturalización.
La temperatura afecta también la solubilidad de las proteínas en disolución. Es necesario considerar que como cualquier molécula, las
proteínas se encuentran en constante movimiento, un aumento en la temperatura hace que este movimiento aumente y por lo tanto la
proteína interacciona mejor con el agua manteniéndose soluble. El rango de temperatura que permite la solubilización de proteínas se
encuentra entre 0°C y 40°C.
La temperatura afecta también a las reacciones químicas. Las reacciones enzimáticas no son la excepción. Pero debido a que las enzimas
son proteínas se presenta una desnaturalización térmica.
¿Qué es el factor Q-10?
El coeficiente de temperatura Q10 con el que frecuentemente se describe el efecto de la temperatura sobre las reacciones enzimáticas es
el factor por el cual la velocidad de la reacción se incrementa al elevar la temperatura 10°C. Se define como la razón obtenida de un
parámetro cuando este se determina a dos temperaturas que difieren en 10°C. Los coeficientes Q10 pueden ser calculados aunque no exista
una diferencia exacta de 10°C entre las dos temperaturas, aplicando la siguiente formula:
Escribir el complejo que se forma con el Fe y el CN-
Estructuralmente, la enzima catalasa es un homotetrámero (formada por 4 subunidades idénticas) con un grupo hemo en cada subunidad
proteica.Se puede hacer una distinción entre catalasa con subunidades pequeñas (masa molecular de 60 kDa aprox.) y subunidades grandes
(masa molecular superior a 80 kDa). Mientras las catalasas con subunidades pequeñas son menos resistentes a la desnaturalización, tienen
hemo-b y se inhiben por sustratos, las catalasas con subunidades grandes son muy resistentes a la desnaturalización, tiene hemo-d,
presentan enlaces covalentes inusuales cerca del centro activo y son resistentes a concentraciones importantes de 𝐻2𝑂2.
NRC: 23038
PRIMAVERA 2021
Profesora:
Leticia García Albarrán
Fundamentos
A) Reacción que cataliza la enzima Catalasa
Objetivos El peróxido de hidrógeno se forma por la dismutación del radical superóxido y también en
la reacción de algunas oxidasas, es tóxico para la mayoría de los organismos vivos.
Muchos organismos son capaces de destruir el H2O2 mediante la acción de enzimas antes de
que pueda realizar mucho daño. El H2O2 se convierte en oxígeno y agua según la siguiente
Evalúa la actividad de la enzima Catalasa reacción: 2 H2O2 →
2 H2O + O2 Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas
incrementan la velocidad de reacción de forma considerable.
de diferentes fuentes biológicas,
Se conoce que al menos dos enzimas diferentes catalizan esta reacción:
comparando el efecto de la temperatura y de a) catalasa, que se encuentra en animales y protistas
algunos inhibidores como el Pb y el CN- b) peroxidasa, que se encuentra en las plantas.
La catalasa es una enzima que pertenece a la oxidorreductasas, se encuentra presente en
Materiales y los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales, unida a â-Nicotinamida
adenina dinucleótido 2´fosfato reducido (NADPH), que la protege de la inactivación y
reactivos aumenta su eficiencia, y en vegetales (peroxidasa).La enzima catalasa descompone a la
molécula de peróxido de hidrógeno en un proceso de dos pasos. La primera etapa implica
Material
que la enzima choque con la molécula de peróxido de hidrógeno. Un átomo de oxígeno del
peróxido de hidrógeno se une a un átomo de hierro en la catalasa. Un segundo peróxido de
Reactivos:
-12 tubos de hidrógeno es entonces capaz de unirse a la enzima catalasa, que luego rompe la molécula
-Cianuro de sodio y la convierte en agua y gas oxígeno.
ensaye
-1 gradilla
al 5% →
Enz (Por-FeIII) + H2O2 Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O
-Nitrato de plomo →
Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O2 Enz (Por-FeIII) + H2O + O2
-Baño
100ºC
María
al 5% →
Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + CH3CH2OH Enz (Por-FeIII) + CH3CHO + H2O
Cumple también la función de detoxificar otros sustratos como fenoles y alcoholes
-2 goteros -H2O2 mediante una vía de reducción acoplada a H2O2 y se le ha atribuido un rol antioxidante
-Pinzas pequeñas -Papa de gran importancia, pues al disminuir el nivel de H2O2 disminuye también el riesgo de
-Papel absorbente -Hígado de pollo formación de •OH mediante la reacción de Fenton. Además, cumple con una función
-Cuchillo -Manzana protectora contra determinados microorganismos patógenos, sobre todo anaerobios. Las
bacterias anaerobias, mueren al estar en contacto con oxígeno, es por esta razón que el
oxígeno producido por esta enzima tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos.
Fichas de B) Efecto de la temperatura sobre la enzima Catalasa, con rangos de temperatura.
La temperatura afecta a las reacciones químicas. Las reacciones enzimáticas no son la
seguridad excepción. Pero debido a que las enzimas son proteínas se presenta una desnaturalización
térmica. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta
que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de
moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de
transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad
catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta
por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática
Cianuro debido a que la enzima se desnaturaliza.. Cada enzima posee una temperatura óptima, en
las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C. *La enzima catalasa, al igual que
de sodio otras proteínas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder su
al 5% estructura se perderá también la función, por lo que no podrá descomponer el agua
oxigenada.
C) Que tipos de inhibidores son el Cianuro y el Plomo y a que parte de la estructura
química de la enzima Catalasa se unen
La actividad enzimática se puede inhibir, es decir, reducir o eliminar la actividad
enzimática o catalítica de enzimas específicas. La inhibición puede ser: Irreversible -
el inhibidor se une covalentemente a la enzima, casi siempre a un grupo de la cadena
lateral de los amino ácidos en el foco activo. La enzima queda inactiva permanentemente.
Nitrato
Reversible: el inhibidor puede disociarse de la enzima porque no se une por enlaces
de covalentes. Esta inhibición puede ser competitiva o no-competitiva. (a)Inhibición
plomo Competitiva - el inhibidor competitivo es muy similar al sustrato normal de la enzima.
Dada esa similitud estructural, este tipo de inhibidor se une reversiblemente al foco
al 5%
activo de la enzima. Inhibición No-Competitiva: el inhibidor se combina con la enzima en
un lugar distinto al foco activo. La unión del inhibidor afecta la configuración
tridimensional de la enzima y bloquea la reacción. Este tipo de inhibidor no compite
directamente con el sustrato para unirse a la enzima (no afecta la unión ES). Cianuro Es
una sustancia química de uso industrial, minero como agente acomplejante de iones
metálicos, en la galvanoplastía de electrodeposición de zinc, oro, cobre y especialmente
Peróxido plata, y de uso en la producción de plásticos de base acrílica. La acción de la catalasa
es por vía de la reacción directa del ión Fe(III) con el oxígeno, para liberar el
de peróxido y formar agua. La elevada constante de formación de complejos de hierro
hidrógeno trivalente y divalente con aniones cianuro es debida al fuerte enlace sinérgico
originado por la suma de dos efectos: Donación de e- por parte del ligando en enlace s.
Retrodonación de e- por parte del metal en enlace p. Ya que el cianuro se une por en
laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición es irreversible. Plomo
El plomo ejerce sus efectos a través de su unión con grupos sulfhidrilos de proteínas y
en las enzimas produce una inhibición de enzimas asociadas a membranas, por medio de la
competición y desplazamiento del calcio, y alteración en el metabolismo de la vitamina
D; la calmodulina es una proteína importante para la regulación intracelular del calcio,
y su funcionamiento es alterado por el plomo. La unión del plomo a la catalasa se da en
los grupos sulfhidrilo libres de las cisteínas que contiene la enzima, de forma
covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es irreversible.
Cuestionario Procedimiento
Resultados
Discusión de resultados
Conclusion
Referencias
- Aguilar Alonso, P., Sosa Sánchez, R. and Dávila Márquez, R., et al. (2006). Ayudas Didácticas Bioquímica I QFB-
SEM. [Archivo WORD] Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, Puebla, Mexico.
- García Albarrán, L., Mena Contla, A. and Morales Lara, L. (2019). Manual De Laboratorio De Bioquímica I.
[Archivo WORD] Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, Puebla, Mexico.
-Farmacopeda (2020) Gelatina. Recuperado de:
http://www.anmat.gov.ar/webanmat/fna/flip_pages/Farmacopea_Vol_II/files/assets/basic-html/page485.html
-QUIMICA DE LOS COMPUESTOS DE COORDINACIÓN.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Complejosysunomenclatura_13378.pdf