DISEÑO Y MODELADO DE UN REACTOR PARA LA DEGRADACIÓN MEDIANTE HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA

DE TEREFTALATO DE POLIETILENO (PET)

Andrés Fernández, Leonardo Perdigón

Miniproyecto de Ingeniería Química (Abril - Julio 2022)

Dirigido por

Prof. Alejandra Rivas

Prof. Julia Guerra

Departamento de Termodinámica y Fenómenos de Transferencia

RESUMEN

Actualmente la producción de plástico es una de las industrias más destacada y de mayor auge a nivel mundial, puesto
que es un elemento útil, sencillo, barato de fabricar y con una larga duración. Sin embargo, estás mismas características
que resultan positivas a nivel industrial son las mismas que a nivel ambiental resultan negativas por su resistencia como
material a ser degradado. En consecuencia, el siguiente estudio tiene como objetivo analizar el comportamiento reactivo
de la hidrólisis mediante catálisis enzimática del polímero en distintos reactores como una posible solución a esta
problemática, optimizar el grado de hidrólisis y determinar el tipo de operación óptima a llevar a cabo. Se analiza también
la influencia de distintos factores que afecten la velocidad de la reacción dentro de los cuales, la inhibición por producto
destaca y se enfoca el modelado del sistema en buscar una alternativa que permita minimizar la inhibición como limitante
de la velocidad de reacción. En este sentido, se estudia también la operación con sistemas de separación por membranas
para retirar los productos solubles en el sistema reactivo. Finalmente se concluye que en presencia de sustancias
inhibidoras en sistemas de hidrólisis enzimática la mejor opción para llevar a cabo el proceso corresponde a un reactor
de membrana compuesto por un módulo de hidrólisis y un sistema de ultrafiltración en conjunto dado que se logran
mayores grados de hidrólisis en menores tiempos en comparación con los sistemas ideales.

NOMENCLATURA Y ABREVIATURAS

INTRODUCCIÓN
Concentración Inicial de la Enzima
[E0 ]
(nkat/L) En 1869 se crea el primer polímero sintético en
[MHET] Concentración del MHET (nmol/mL)
[BHET] Concentración del MHET (nmol/mL) búsqueda de un sustituto adecuado para el marfil
BHET bis(2-hidroxietil tereftalato) (Glaser, 2019). Desde ese momento el plástico se volvió
BR Reactor Batch un material ideal para las diversas industria y productos
CSTR Reactor de Tanque Agitado de consumo debido a sus propiedades como su
Tasa de Dilución en Estado estacionario resistencia, plasticidad, ligereza, unidas a la facilidad y
D
(𝐹1 /V=𝐹4 /V) (ℎ−1 ) el bajo costo de producción (Narancic y O'Connor,
Energía de Activación para la Constante 2019). Sin embargo, estas mismas propiedades que lo
Ea
de Desactivación Térmica (kJ/mol) hacen deseables para la industria, los convierte en
EG Etilenglicol resistentes a la degradación, lo que lleva a su
F1 Caudal de Alimentación del Reactor (L/h) acumulación en los ecosistemas tanto terrestres como
F2 Caudal del Flujo de Reciclaje (L/h) marinos y llegando a ser de los problemas ambientales
Caudal del Retentado de Ultrafiltración con mayor relevancia en la actualidad (Glaser, 2019).
F3
(L/h)
Caudal del Retentado de Ultrafiltración La evaluación, publicada diez días antes de la 26º
F4
(L/h) Conferencia de las Naciones Unidas sobre el Cambio
Constante de Velocidad en el Modelo de
k Climático (COP26) (2021) destaca que el plástico
Hidrólisis (nmol/(nkat h))
Constante de Desactivación Térmica de representa el 85% de los residuos que llegan a los
kd
Primer Orden (ℎ−1 ) océanos y se prevé que para el año 2040 los volúmenes
KI Constante de inhibición del MHET (mM) de plásticos que estarán en los mares se triplicarán,
KM Constante de Michaelis-Menten (mM) llegando a una cantidad anual de entre 23 y 37 millones
MHET Ácido mono(2- hidroxietil) tereftálico de toneladas lo que significaría, aproximadamente 50 kg
Td Temperatura de Desnaturalización (°C)
de plástico por metro de costa en todo el mundo.
Tg Temperatura de Transición Vítrea (°C)
TPA Ácido Tereftálico
UF Ultrafiltración
Volumen de Trabajo del Recipiente del
V
Reactor Enzimático (L)
 Andersen, directora ejecutiva del Programa de las
Naciones Unidas para el Medioambiente UNEP,
comenta que un gran problema es el destino de los micro
plástico, los aditivos químicos y otros productos
fragmentados lo cuales se sabe que son tóxicos y
peligrosos para la salud humana, ecosistemas y vida
silvestre (ONU, 2021).
Los autores rechazan la posibilidad de que el
reciclaje sea una salida a esta crisis y advierten sobre
alternativas dañinas a los productos de un solo uso, como
los plásticos de base biológica o biodegradables, que
actualmente representan una amenaza química similar a
los plásticos convencionales.
En consecuencia, las estrategias biotecnológicas
pueden ser una opción prometedora para tratar de dar
solución a esta preocupación ambiental, mediante la
actividad microbiológica, principalmente de bacterias y
hongos, se puede llevar a cabo la biodegradación de
plásticos a través del aprovechamiento de sus enzimas y
su actividad metabólica. (Harms, Krueger & Schlosser,
2015).
Este trabajo presentará una propuesta a través del
análisis de la cinética química de las reacciones
enzimáticas de degradación de plásticos en diferentes
reactores químicos que permitan en un futuro la
industrialización de esta alternativa como posible
solución a la contaminación producida por los plásticos
que se vive en la actualidad.
MARCO TEÓRICO
Antes la actual problemática de la acumulación de
residuos plásticos, resulta necesario opciones que
permitan su degradación con el menor impacto
ambiental, de manera eficaz y que resulten económicas.
En la actualidad las opciones utilizadas para su
descomposición son:
• Plásticos Biodegradables, buscan sustituir los
polímeros sintéticos recalcitrantes por polímeros
sintetizados a partir de materias primas como el
almidón o celulosa las cuales son biodegradables, o
sintetizados por microorganismos como los
polihidroxialcanoatos (PHA). Estos polímeros son
poliésteres biodegradables que algunos
microorganismos sintetizan y acumulan como
fuente de carbono y energía (Meng, et al, 2019)
Estos en teoría deberían ser el método más eficiente
para la degradación del plástico ya que se degrada
de forma natural por la actividad microbiana. Sin
embargo, investigadores advierten sobre esta
alternativa calificándola como una amenaza
química similar a los plásticos convencionales
(ONU, 2021), ya que en algunos casos puede
suponer la liberación de intermediaros que suponen
un peligro para los seres vivos al formar micro
plásticos y su eficiencia dependerá de las
condiciones del ambiente, por lo cual no siempre
será efectiva su degradación (Meng, et al, 2019).
• El reciclaje, es otra de las alternativas utilizadas
para tratar los desechos plásticos, y se ha convertido
en un método relativamente eficiente, sin embargo,
presenta ciertas desventajas como que no todos los
plásticos cumplen con las condiciones necesarias
para ser reciclados, (Hopewell, Dvorak y Kosior,
2009) por ello los investigadores rechazan que esta
alternativa sea la salida a esta crisis.
• La incineración, es una alternativa que permite
recuperar la energía almacenada en los plásticos en
forma de calor, esto le da una ventaja con respecto
a las otras alternativas debido a que permite sacar
provecho de la descomposición del plástico, el
problema con esta opción es que se generan gases
tóxicos como el monóxido de carbono y dioxinas,
además de liberarse metales pesados como el
cadmio. (Sinha, Patel M.R y Patel J.V, 2008).
• La estrategia que parece más conveniente en la
actualidad es la biodegradación ya que se hace
manera natural y así son sus productos, Si la
degradación es aerobia, se liberará CO2 y H2O,
mientras que si es anaerobia se liberarán CH4, CO2
y H2O (Jacquin, et al, 2019) no son tóxicos para el
medioambiente, lo que comparada con las otras
alternativas es más ecológica y económica, sin
embargo su desventaja es la velocidad de las
reacción con respecto a las otras opciones (Farzi,
Dehnad y Fotouhi, 2019) a pesar de esto sigue
siendo una de las alternativas más prometedoras y
por ello el interés en estudiar su cinética y la
posibilidad de un proceso industrial que permita la
biodegradación de plásticos.
La biodegradación de plástico ocurre gracias a la
degradación enzimática, en la cual los microorganismos
producen enzimas, que generan alteraciones en la
estructura química y física de la cadena polimérica del
plástico. Cuando este proceso inicia, la molécula de
sustrato en el polímero se une al sitio activo de la enzima
creando un complejo enzima-sustrato, luego durante esta
unión se rompen los enlaces de poliéster y se generan los
productos de la reacción, formando un complejo entre la
enzima y el producto, para que finalmente el producto se
separe del sitio activo de la enzima permitiendo así que
vuelva a iniciar el proceso. (Viteri, 2018)
Dentro de los diferentes tipos de plásticos
encontramos el PET el cuál es un poliéster perteneciente
a la familia de los termoplásticos, utilizado
principalmente en la industria textil como fibras
sintéticas para la ropa y como empaques en la industria
de alimentos y bebidas. Está compuesto principalmente
por ácido tereftálico (TPA) y etilenglicol (EG) unidos
por enlaces éster; por ello aquellos microorganismos que
posean enzimas hidrolíticas capaces de atacar y romper
estos enlaces podrían generar monómeros, los cuales son
compuestos de bajo peso molecular, asimilables por la
célula. (Glaser, 2019).
Las principales enzimas capaces de degradar PET
son las denominadas hidrolasas, principalmente
cutinasas, carboxilesterasas, esterasas y lipasas, las
cuales puede catalizar la escisión de los enlaces éster por
medio de una reacción en las que se consume una
molécula de agua (de Castro, et al, 2017)
Dentro de los distintos microorganismos que
tienen la capacidad de degradar el PET encontramos
estudios recientes con la Ideonella sakaiensis descrita en
2016 por Yoshida et al. los cuales menciona que esta
bacteria es capaz de degradar y asimilar las moléculas
del poliéster y utilizarlo como fuente de carbono y
energía a través de la producción de dos enzimas
hidrolíticas llamadas PETasa y MHETasa las cuales
atacan al polímero y a sus intermediarios para
convertirlos en monómeros fácilmente asimilables por la
bacteria con una velocidad de reacción superior a otras
hidrolasas.
Otro tipo de microrganismo que también
puede realizar este proceso de degradación son los
pertenecientes a la familia fungi, hongos, como es el
caso de la Pestalotiopsis microspora, la cual fue
descubierta en un viaje de investigación llevada a cabo
por estudiantes de Yale en Ecuador en 2011,
descubriendo que este hongo puede crecer en
poliuretano, un polímero común en productos plásticos,
y usarlo como su única fuente de carbono. (Khan,
Sehroon, et al, 2016)
En el año 2005, Müller et al. Descubrieron una
hidrolasa extracelular, que es producida por un
actinomiceto termófilo (Thermobifida fusca DSM
43793), la cual posee la capacidad de despolimerizar el
PET a alta velocidad, demostrando así por primera vez
que las enzimas pueden hidrolizar este de manera
efectiva y siendo una posibilidad para el reciclaje
biológico del PET que hasta el momento era una opción
considerada inviable. En el estudio se menciona que la
actividad de la TfH para hidrolizar el PET se debe, en
gran medida, a su termo-estabilidad, la cual le permite
mantener su actividad a temperaturas altas. Adicional a
esto, la enzima presenta características estructurales las
cuales le dan la capacidad de degradar con mayor
facilidad las cadenas menos móviles del polímero
Consecuentemente se describió una cutinasa,
secretada por T. fusca KW3, que también tiene una
actividad hidrolítica sobre el PET a la cual se le
denominó TfCut2; entre sus características más
importantes se destaca su termo estabilidad al igual que
en la tfH. (Acero, et al, 2011). Cuando el TfCut2 cataliza
la reacción de hidrólisis del PET se producen
principalmente los siguientes productos; ácido mono (2-
hidroxietil) tereftálico (MHET) y, en menor cantidad,
ácido bis(2-hidroxietil) tereftálico (BHET) y TPA.
Aunque la enzima tiene una alta actividad hidrolítica,
existe un inconveniente, debido a que los productos
intermediarios de BHET y MHET pueden ocupar el sitio
de unión del PET con el sustrato, actuando como
inhibidores competitivos en la reacción (Barth et al,
2015).
• HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA
La hidrólisis enzimática del PET puede
considerarse como un proceso de erosión que tiene lugar
en la superficie del material (Gusakov y Allen, 2003).
Las nanopartículas de PET tienen una alta relación
superficie-volumen y pueden ser hidrolizadas
considerablemente más fácilmente que las películas o las
fibras (Okazaki y Mooyoung, 1978). También se ha
demostrado que la hidrólisis enzimática del material de
poliéster está muy influenciada por la movilidad de las
cadenas poliméricas, que está regulada por la
cristalinidad del material (Wei et al, 2014). En cierto
modo, la degradación enzimática del PET es un proceso
catalítico heterogéneo comparable con la hidrólisis de la
celulasa por la celulosa. (Herzog et al, 2006) Se ha
demostrado que la celobiosa, un intermedio liberado y
producto final del proceso de hidrólisis de la celulosa,
bloquea las enzimas celulolíticas (Walter et al, 1995).
Se ha demostrado que los productos principales de
reacción en la hidrólisis enzimática son el TPA,
etilenglicol, MHET, BHET. De los cuales se ha
identificado una inhibición competitiva y una inhibición
no competitiva.
• EFECTO DE LA INHIBICIÓN EN
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA
En varias ramas de la ciencia como la
enzimocinética y la enzimología de enfoque clásico, se
han estudiado ampliamente los efectos de los inhibidores
en los sistemas de reacción, en particular su influencia
en la velocidad de reacción inicial como principal
parámetro. Durante mucho tiempo, uno de los
principales métodos utilizados en la investigación
farmacéutica para analizar y cuantificar la acción de los
productos farmacéuticos y su desarrollo ha sido la
evaluación de la inhibición de las enzimas por diferentes
causas (Levenspiel, 1993). Como principal agente se
sabe que la inhibición del producto puede impedir la
obtención de altos rendimientos y altas tasas de
conversión en la tecnología enzimática a nivel industrial
(Riebel y Bommarius, 2004; Frieden y Walter, 1963;
Fullbrook,1996). Sin embargo, los efectos negativos de
la inhibición del producto han dado lugar,
sorprendentemente, a cambios drásticos en los
regímenes de procesamiento y en el diseño y estudio de
los reactores para llevar a cabo las reacciones
enzimáticas a nivel de laboratorios, a mediana escala y a
escalas industriales.
Reacción Principal:

O O OH O O
O O HO
HO
O OH HO OH
O O
MHET ETYLENGLICOL
n ÁCIDO TEREFTÁLICO
TEREFTÁLATO DE POLIETILENO

Durante mucho tiempo se tenía consciencia de que las Aplicando la hipótesis de equilibro rápido para simplificar
reacciones catalizadas por enzimas se separaban de los las expresiones matemáticas, se obtiene que la concentración
modelos ideales debido a que las velocidades de reacciones del complejo de enzima sustrato puede ser descrito como:
obtenidas experimentalmente eran menores a las esperadas
por los modelos teóricos, pero no se lo daba la importancia 𝐾[𝐸0 ][𝑆] ( 4)
requerida, lo cual llevó a que la mayoría de las reacciones [𝐸𝑆] =
1 + 𝛽[𝑃] + 𝐾[𝑆]
enzimáticas se llevaran a cabo en reactores por lotes
despreciando el hecho de la inhibición. La concentración total de la enzima en el proceso
vendrá dada por:

• MODELO PARA LA HIDRÓLISIS [𝐸0 ] = [𝐸] + [𝐸𝑆] + [𝐸𝑃] ( 5)

ENZIMÁTICA HETEROGÉNEA DE
POLÍMEROS Donde:

El esquema de reacción para la hidrólisis 𝛽1 ( 6)

enzimática heterogénea del PET es el siguiente. [𝐸𝑃] = [𝐸][𝑃]
𝛽2
(Cleverton, 2020)
Haciendo las simplificaciones necesarias obtenemos el
𝐸 + 𝑆 ↔ [𝐸𝑆] ↔ [𝐸𝑃] ↔ 𝐸 + 𝑃] ( 1) modelo de la velocidad inicial para la formación de los
𝑘𝑎 𝑘
productos solubles que es proporcional a la concentración
𝐸 + 𝑆 ← → [𝐸𝑆] → 𝐸 + 𝑃 ( 2) del complejo de enzima y sustrato
𝑘𝑑
𝛽𝐼 ( 3)
𝐸 + 𝑃 ←→ [𝐸𝑃] 𝑘[𝐸][𝑆] ( 7)
𝛽2 𝑟𝑃 = −𝑟𝑆 =
[𝑃]
[𝑆] + 𝐾 [1 + ( )]
𝐾𝐼

𝐾[𝑆][𝐸] ( 8)
La enzima libre (E) se une a la superficie del 𝑟𝐼 = 𝑘
PET (S). La enzima adsorbida se une a los enlaces éster 1 + 𝛽[𝑃] + 𝐾[𝑆]
disponibles (S) y forma un complejo enzima-sustrato
(ES) en la superficie del PET ("enlace efectivo"). Estas ecuaciones y mecanismos describen la forma
Finalmente, la enzima cataliza la hidrólisis de un enlace en la cual una enzima actúa sobre la superficie del PET
éster, liberando el producto o combinación de productos mediante una reacción de hidrólisis. Según la triada
solubles (P). La enzima que aún queda libre (E) también catalítica del polyester y los sitios activos que este
puede unirse a los productos liberados, haciendo que no disponga en función de su área superficial efectiva, la
esté disponible temporalmente para unirse a más sustrato enzima tendrá una mayor o menor actividad catalítica
de PET, lo que genera la inhibición. En la ecuación, ka
y kd son las constantes de adsorción y desorción para la
formación reversible del complejo ES, respectivamente.
𝛽1 y 𝛽2 son las constantes de unión para los productos
solubles, y k es la constante de velocidad de reacción
para la formación de productos.

Figura. 1: Modelo molecular simulado de la interacción

de la enzima con el sustrato y ampliación de la triada
catalítica (Sehroon, 2017)
 • PET HIDROLASAS
Las hidrolasas de PET mejor caracterizadas son las
enzimas fúngicas de F. solani. T. insolens, T lanuginosus y
las cutinasas bacterianas de Ideonella S, P mendocina y
Termobifida. fusca. (Tabla 1). Siendo esta última la utilizada
a lo largo del estudio
Tabla 1: Comparación de distintas PET hidrolasas
(Zimmermann, 2010)
MARCO METODOLÓGICO
Como este trabajo está basado principalmente en
diversos conceptos teóricos, se implementó la técnica de
la investigación documental como sustento
metodológico fundamental cuyas etapas y estrategias
ejecutadas serán descritas a continuación.
• Selección de las fuentes de información
primarias:
Se realizó un análisis, evaluación y recolección de
artículos científicos de investigación escritos por
diversos autores de universidades reconocidas en el
sector de la ingeniería de las reacciones químicas, el
modelado de sistemas reactivos y la bioingeniería. Para
determinar la validez de estas fuentes se tomaron en
cuenta los siguientes criterios: autenticidad,
credibilidad, contenido y reconocimiento de publicación
mediante investigaciones derivadas.
• Selección de las fuentes de información
segundarias:
Para complementar la información extraída de los
artículos científicos recolectados y clasificados se
procedió a realizar una búsqueda en línea en diferentes
portales que disponen de información auténtica en el
área de biología, química y farmacéutica. Incluyendo
portales universitarios de investigaciones publicadas.
• Complementación de la información con
reportes experimentales
A manera de completitud se recolectaron datos
experimentales y propiedades mensurables reportados
en varios bancos de datos online como punto de partida
de la investigación. Se incluyeron bancos de datos de
valores enzimáticos y reportes de simuladores químicos
como “Schrodinger Suites”.
• Organización de la información recolectada
Una vez recolectada la información consultada,
se procedió a construir el conjunto de factores
relevantes durante el estudio y las principales
etapas del proceso
• Estudio de la inhibición durante la
Hidrolisis
Se utiliza una hidrolasa de poliéster TfCut2 de la
Termobifida fusca para simular la hidrólisis
enzimática del PET en presencia de diferentes
cantidades de sustancias que se teorizan
inhibidoras para analizar su influencia sobre las
velocidades de reacción.
• Dimensionamiento de reactores
para la degradación
enzimática del PET
Siguiendo los principios de funcionamiento de
los reactores que cuentan con mayor data
bibliométrica y considerando sus modelos de
operación, se hace el dimensionamiento y estudio
de variables para los posibles sistemas de reacción
acorde al sistema reactivo que se presenta. Se toma
el arreglo que permita mayores grados de
conversión en menores tiempos y se diseña un
modelo que pueda ser validado de manera
experimental en futuros estudios.
• Análisis sensitivo
Se simula un análisis sensitivo del sistema
de reacción que permita determinar la
influencia de los parámetros principales sobre
los porcentajes de hidrolisis.
RESULTADOS Y DISCUSIONES
1. Dimensionamiento de reactores ideales para la
degradación enzimática del PET
Para llevar a cabo reacciones enzimáticas de manera
industrial se utilizan reactores químicos que permitan
realizar estas reacciones en una mayor escala. Dentro de los
diferentes tipos de reactores podemos encontrar:
Reactor discontinuo también conocido como reactor
Batch, es aquel donde los reactante entran al reactor durante
un tiempo determinado, luego se deja reaccionar durante un
tiempo determinado para finalmente descargar la mezclar
resultante. Esta es una operación no estacionaria, la cual está
regida por la siguiente ecuación: (Fogler, 2001)
 𝑑𝑋 −𝑟𝐴 𝑉 (9)
=
𝑑𝑡 𝑁𝐴0

El reactor de tanque con agitación continua o CSTR, el

cual es un recipiente agitado en el cual existe una entrada de
reactivos y una salida de productos los cuales ocurren de
manera continua, normalmente en estado estacionario para
evitar acumulación en su interior y se rige bajo las siguientes
ecuaciones (Fogler, 2001)

𝐹𝐴0 𝑋 (10)
𝑉=
−𝑟𝐴

𝐶𝐴0 𝑋𝐴 (11)
𝜏=
−𝑟𝐴 Figura. 2: Perfiles de concentración de los productos de
reacción para la hidrólisis de partículas de PET
hidrolizadas por TfCut2. BHET (azul), TPA (magenta),
El reactor tubular o FPI es un cilindro, el cual trabaja MHET (verde) y la concentración total de productos
(rojas) que se supone contiene trazas de otros
normalmente en estado estacionario, donde los reactivos se compuestos liberados en cantidades menores al 3%.
consumen continuamente a medida que fluyen a lo largo del
reactor; los elementos de fluido están el mismo tiempo en el La corrida se llevó a cabo a cantidades de escala de
interior y las propiedades son constantes en cada sección laboratorio en un volumen de reacción de 0.1L para un
transversal, pero no longitudinal, y se rige bajo las siguientes tiempo de reacción de 2h a T=60°C cercana a la temperatura
ecuaciones (Fogler, 2001) de transición vítrea del polímero para maximizar la reacción
con un área superficial de PET en el rango desde
𝑑𝑋 −𝑟𝐴 (12) 1 cm2 mL−1 hasta 100 cm2 mL−1 y una concentración inicial
=
𝑑𝑉 𝐹𝐴0 de la enzima de 50μg mL−1 .
𝑋𝐴𝑓
𝑑𝑋𝐴 (13) La experiencia se repitió aumentando el tiempo de
𝜏 = 𝐶𝐴0 ∫ reacción a 25h aproximadamente para ver si la tendencia se
0 −𝑟𝐴
mantenía y se reportaron nuevamente los perfiles de
concentración. Durante estas corridas también se estudió la
influencia la de temperatura al sistema reactivo. Se
2. Estudio de la inhibición durante la hidrólisis graficaron los perfiles de concentración en función del
tiempo de reacción
Para estudiar el comportamiento de inhibición por
producto y el tipo de inhibición presente para determinar la
influencia sobre la velocidad de reacción se debe seguir por
separado cada producto de reacción.

Considerando los productos solubles de reacción y los

intermedios formados se procedió a llevar a cabo la reacción
en un reactor intermitente donde se consideraron cantidades
iniciales de los diferentes productos por separado y se
determinó el parámetro de inhibición de cada especie y se
comparó la velocidad influenciada por este parámetro con
los las velocidades iniciales de reacción despreciando
cualquier presencia de los productos

Figura. 3: Perfiles de concentración de los productos

solubles de reacción para la hidrólisis de partículas de
PET hidrolizadas por TfCut2 para u tiempo de reacción
de 25h. BHET (azul), TPA (magenta), MHET (verde) y
la concentración total de productos (rojas) que se supone
contiene trazas de otros compuestos liberados en
cantidades menores al 3%.

Figura. 4: Perfiles de inhibición como inverso de la
velocidad de reacción en función del área superficial del
sustrato para distintas concentraciones iniciales del
MHET como cantidad de inhibidor bajo las mismas
condiciones de reacción. Datos simulados en colores y
datos teóricos reportados como línea sólida.
Figura. 5: Perfiles de inhibición como inverso de la
velocidad de reacción en función del área superficial del
sustrato para distintas concentraciones iniciales del
BHET como cantidad de inhibidor bajo las mismas
condiciones de reacción. Datos simulados en colores y
datos teóricos reportados como línea sólida.
De esta manera se obtiene los parámetros de las
constantes de asociación para el MHET, TPA, EG y para el
BHET tal como indica la tabla 2.
1 (14)
𝑖𝑀𝐻𝐸𝑇 =
1 + 𝐾𝑀𝐻𝐸𝑇 [𝑀𝐻𝐸𝑇]
1 (15)
𝑖𝐵𝐻𝐸𝑇 =
1 + 𝐾𝐵𝐻𝐸𝑇 [𝐵𝐻𝐸𝑇]
1 (16)
𝑖𝐸𝐺 =
1 + 𝐾𝐸𝐺 [𝐸𝐺]
1 (17)
𝑖 𝑇𝑃𝐴 = Parámetros
1 + 𝐾𝑇𝑃𝐴 [𝑇𝑃𝐴]
Tabla 2: Constantes de asociación para el estudio de los inhibidores
competitivos
Inhibidor 𝑬𝟎 (𝝁𝒈𝒎𝑳−𝟏 ) 𝑲𝑰 (𝑳𝒎𝒎𝒐𝒍−𝟏 ) 𝑹𝟐
MHET 50 0.787 0.999
BHET 50 0.342 0.997
TPA 50 5.3∙ 10−5 0.989
EG 50 1.3∙ 10−5 0.992
Se puede observar que la constante de asociación que se
obtuvo para el MHET es la mayor de todas siendo 6 órdenes
de magnitud mayor que la constante para el TPA y EG cuyo
efecto inhibidor sobre la enzima es prácticamente
despreciable. Al compara los valores obtenidos para el
BHET y el MHET con estudios previos (Thaothy, et al,
2017) realizados se verifica la influencia de estos productos
como inhibidores de la reacción, siendo el MHET el que
representa mayor actividad competitiva ocasionando así una
disminución de la velocidad de reacción lo cual presenta una
validación a la teoría de que la reacción de degradación
enzimática del PET es retardada por causa de este fenómeno.
3. Reactores ideales continuos
El reactor de tanque agitado continuo de mezcla
perfecta (CSTR) es una configuración de reactor
adecuada para las reacciones biocatalíticas en general
cuando hay presencia de inhibición debido al sustrato,
porque el diseño permite minimizar la concentración de
sustrato en el medio. En comparación con los CSTR, los
reactores de flujo tapón (PFR) se consideran más
ventajosos para las reacciones sujetas a la inhibición del
producto, ya que permiten reducir el volumen del reactor
para altos grados de conversión minimizando así el
efecto inhibidor (Riebel et al 2004).
Se ha demostrado que es la reacción de interés hay
presencia de inhibición por producto, por tanto, debe
utilizarse la cinética antes descrita adaptada al modelo
de inhibición de las reacciones enzimáticas. Este modelo
puede utilizarse para comparar las dimensiones
necesarias, es decir, el volumen y/o la longitud, de
reactores continuos "hipotéticos" ideales de los tipos
CSTR y PFR, respectivamente, para obtener un
porcentaje de hidrólisis determinad0 de PET. Para un
porcentaje determinado (hemos elegido el 30% de
conversión como objetivo), el tiempo de reacción
necesario en un reactor discontinuo (tBR=5 h) y el
tiempo de permanencia en el reactor continuo
(τCSTR=25h, τPFR=5 h), se obtienen a partir de las
ecuaciones de diseños de los reactores (Tabla 3)
Tabla 3. Parámetros de reacción
Valor
Temperatura [°C] 60°C
pH 8
E0[μg mL−1 ] 50
S0 [𝑐𝑚2 /𝑚𝐿] 30

Tabla 4: Comparación del dimensionamiento de
reactores ideales para la degradación enzimática de PET con un
porcentaje de hidrólisis objetivo del 30% (valor fijado para
comparar con los arreglos subsecuentes). Los tiempos de
residencia de los reactores fueron calculados de sus ecuaciones
de diseño.
Bajo el régimen de iguales condiciones, el tamaño
del equipo obviamente aumentará profundamente con el
aumento de las concentraciones de producto deseadas y
el aumento del porcentaje de hidrólisis deseado, ya que
la mayor concentración de producto exigirá grados
hidrólisis más altos.

Reactores Ideales 4. Diseño de un reactor de membrana con sistema de

ultrafiltración para la hidrólisis enzimática
BATCH CSTR PFR
tiempo (h) 𝜏𝐵𝑅 = 5ℎ 𝜏𝐶𝑆𝑇𝑅 = 25ℎ 𝜏𝑃𝐹𝑅 = 5ℎ El uso de la tecnología de los reactores de
Caudal membrana en sistemas de hidrólisis enzimática con
--- 0.001 0.001
[L/h] inhibición por productos soluble ha mostrado ser una
--- 1 1 alternativa viable y prometedora para las reacciones de
--- 1000 1000 este tipo (Pinello et al, 2019)
Volumen
0.008 0.25 0.008
[L] Un biorreactor de membrana es básicamente un
8 25 8 reactor multifuncional que combina el sistema de
8000 25000 8000 reacción química con un sistema de separación física con
%Hidrólisis 30% 30% 30% características químicas. Estas dos unidades pueden
pertenecer a una misma unidad como un todo o trabajar
como unidades separadas según sea el caso de estudio.
Para demostrar la relación entre los grados de
hidrólisis deseados en el poliéster y las dimensiones del La primera aplicación de los reactores de
reactor, se calcularon las dimensiones ideales del reactor membrana de ultrafiltración fue el desarrollo de nuevas
a partir de tres escalas diferentes de caudales técnicas de inmovilización de enzimas. Sin embargo, las
volumétricos correspondientes a la escala típica de enzimas inmovilizadas no son adecuadas para los
laboratorio, intermedia y a una planta piloto/industrial, sustratos poliméricos insolubles como el PET, debido a
respectivamente: La hidrólisis continua del tereftalato de la necesaria adsorción de la enzima en las partículas de
polietileno requiere reactores ideales de gran tamaño, sustrato macromolecular, que se vuelve muy limitada la
incluso para obtener rendimientos muy bajos, transferencia de masa con las enzimas inmovilizadas
(Alfani et al., 1983). El uso de enzimas libres, no
Con finalidad de ver como aumentaba el inmovilizadas, en los reactores de membrana evita
dimensionamiento de estos reactores ideales algunos de estos problemas, al tiempo que permite la
considerando la inhibición y suponiendo que no exista la eliminación continua del producto de reacción o
misma, se realizó una segunda corrida para distintos intermedio activo que inhibe la reacción y justifica su
grados de hidrólisis con y sin presencia del inhibidor, implementación (Hägerdal et al., 1981). La figura 6
adaptando la ecuación cinética en cada caso y muestra algunas configuraciones estándares para los
resolviendo las respectivas ecuaciones de diseño. sistemas reacciones enzimáticas con módulos de
membranas.
Tabla 5. Comparación del volumen reactores
ideales continuos como función del aumento del grado
de hidrólisis. Para un caudal de operación a escala
industrial de 1000L/h y una masa de PET de 10mg con
un área superficial efectiva de 30 [𝑐𝑚2 /𝑚𝐿]

Volumen del Reactor

[L]
%Hidrólisis CSTR PFR
Con Inhibición Figura. 6: Estrategias de operación de algunos sistemas de
membrana implementados según la data bibliométrica para
10 4 2.4
reacciones de hidrólisis enzimática con inhibición por productos
20 25 17.3 soluble.
40 67.5 38.78
50 345 101.3 Para el diseño efectivo de un reactor enzimático de
membrana se utilizará la configuración C que es básicamente
Sin Inhibición un sistema de mezcla junto a una unidad de ultrafiltración.
10 2.5 1.5
20 11 8.45
40 34.5 26
50 62 39.3
 ESQUEMA DEL MODELO
𝐹1 𝐹4 (19)
𝐷= =
𝑉 𝑉

Concentración de la Enzima

El balance de masa para la concentración de la enzima

viene dado por:

𝑑[𝐸2 ] (20)
𝑉 = 𝐹3 [𝐸3 ] − 𝐹2 [𝐸2 ] + 𝑉𝑟
𝑑𝑡

Como no hay perdida de la enzima en la unidad de

Figura. 7: Esquema de un sistema continuo de reactor de membrana
externa que funciona como un tanque de mezclado donde ocurre la
hidrólisis enzimática con una unidad de ultrafiltración donde se
eliminan los productos solubles.
ultrafiltración y considerando las condiciones iniciales de
[𝐸1 ] = 0 y [𝐸2 ] = [𝐸0 ] a t=0. La ecuación (20) puede
simplificarse como sigue

𝑑[𝐸2 ] (21)
= −𝑘𝐸 [𝐸2 ]
Construcción del modelo 𝑑𝑡

El modelo cinético que se utilizará para modelar este Concentración del MHET
reactor es el mismo deducido anteriormente para
hidrólisis enzimática heterogénea del PET El balance de masa para la concentración del MHET viene
dado por:
Las suposiciones que se realizan para la deducción de las
ecuaciones dinámicas y el modelado matemático del 𝑑[𝑀2 ] (22)
𝑉 = 𝐹3 [𝑀3 ] + 𝐹1 [𝑀1 ] − 𝐹2 [𝑀2 ] + 𝑉𝑟
sistema son: 𝑑𝑡

• El volumen de las tuberías y de la unidad de Simplificando

ultrafiltración son despreciables en
comparación con el volumen del reactor de
hidrólisis. Es decir, el reactor es la única parte 𝑑[𝑀2 ] 𝑘[𝐸][𝑆] (23)
= −𝐷[𝐸2 ] +
en todo el sistema que proporciona tiempo y 𝑑𝑡 [𝑃]
[𝑆] + 𝐾 [1 + ( )]
espacio para la reacción. 𝐾𝐼

• No hay efectos sobre la concentración de los Concentración del Producto total

compuestos de bajo peso molecular de la
mezcla de reacción cuando pasan por la unidad 𝑑[𝑃2 ] 𝑘[𝐸][𝑆] (24)
= −𝐷[𝑃2 ] +
de ultrafiltración. 𝑑𝑡 [𝑃]
[𝑆] + 𝐾 [1 + ( )]
𝐾𝐼
• No hay perdida alguna de enzima en la unidad
de ultrafiltración. Recuperación total.
Resolviendo el conjunto de ecuaciones diferenciales se
obtienen los perfiles de concentración de los productos
Las siguientes ecuaciones diferenciales describen la solubles del sistema reactivo. Como se evidencia en la figura
hidrólisis enzimática del PET en un reactor de membrana 1, el producto intermedio MHET es el que se encuentra en
con ultrafiltración mayor proporción para un tiempo de 10h. La curva de mayor
pendiente representa la suma de todos los productos de
Variación del Volumen reacción.
El cambio de volumen en la unidad de hidrólisis puede
ser descrito como

𝑑𝑉 (18)
= 𝐹1 − 𝐹4 = 𝐹1 + 𝐹3 − 𝐹2
𝑑𝑡

Los flujos 𝐹1 y 𝐹4 deben de ser iguales para mantener un

volumen constante en la unidad de hidrólisis, por tanto; la
tasa de dilución puede ser definida como:
 Las figuras 10 y 11 reflejan el comportamiento del sistema a
medida que se varían las condiciones de reacción
permitiendo así establecer un valor objetivo para el grado de
hidrólisis y la eficiencia enzimática.

Figura. 8: Perfiles de concentración

Se analizó la influencia del retiro del inhibidor en el

modulo de ultrafiltración cuantificado por el parametro
D (tasa de dilucón) en el grado de hidrólisis de reacción,
obteniendose que a medida que aumenta la la tasa de
dilucion aumenta el grado de hidrólisis para las msimas
condiciones de reacciones ya estudiadas. Figura. 10: Análisis de la variación del grado de hidrólisis en
función de la tasa de dilución y la variación de la temperatura

Figura. 9: Variación de la tasa de dilución (retiro a través de la

membrana) e influencia del retiro del inhibidor sobre el grado de
hidrólisis de la reacción

Como se evidencia en la figura 9 el uso de un sistema de

ultrafiltración por membranas permite obtener mayores
grados de hidrólisis variando el sistema de operación,
para un valor de D=0.01 que corresponde a un reactor Figura. 11: Análisis de la variación de la eficiencia enzimática en
batch se obtiene un grado de hidrólisis menor al 1% en función de la tasa de dilución y la variación de la temperatura
comparación con un valor de D=0.6 que permite tener
grados de conversión cercanos al 50%, lo cual se debe al
retiro de los productos solubles del sistema reactivo. CONCLUSIÓN

Análisis sensitivo A lo largo de este estudio se analizó el comportamiento de

Habiendo establecido los parámetros principales que
influyen en el avance de la reacción, se realizó un análisis
sensitivo de la combinación de estos parámetros para
determinar las condiciones óptimas que permitan los
mayores grados de degradación de las partículas del PET.
una reacción de hidrólisis en distintos sistemas reactivos. Se
realizo el dimensionamiento y análisis detallado de reactores
idéales considerando la inhibición por producto en la
reacción de hidrólisis y considerando la cinética sin
inhibición de los modelos clásicos. Se observo que el
suponer que el sistema no tiene inhibición arroja resultado
 alejados de las datas experimentales por lo cual se concluye
que no es conveniente el diseño de reactores simples de los
modelos idéales cundo se presenta una reacción enzimática
de este tipo.
En este sentido, se plantea una alternativa a los modelos
ideales de reactores clásicos el cual integra una tecnología
de separación por membranas de los productos solubles de
reacción, dentro de ellos los inhibidores incluidos
obteniéndose así que los grados de hidrólisis de la reacción
aumentan a medida que se aumenta el retiro del inhibidor del
sistema de reacción lo que se traduce en un aumento de la
velocidad de degradación enzimática y a su vez en una
disminución de los tiempos reactivos.
En ese sentido, se concluye que en la presencia de
inhibidores en sistemas de hidrólisis enzimática la mejor
opción corresponde a un reactor de membrana compuesto
por un módulo de hidrólisis, básicamente un tanque de
mezcla y una unidad de separación por ultrafiltración.
RECOMENDACIONES
1. Para los sistemas de reacción de hidrólisis enzimáticas
donde haya la presencia de una sustancia inhibidora, el
mejor diseño corresponde a un reactor de membrana
compuesto por el esquema descrito anteriormente el cual
se compone de una unidad de hidrolisis y de una unidad
de ultrafiltración.
2. Mantener la tasa de dilución a través del sistema de
ultrafiltrado entre 0.4ℎ−1 y 0.6ℎ−1 debido a que entre
este intervalo se obtienen grados de hidrólisis semejantes
y que van acorde a la literatura consultada.
3. Un valor de la tasa de dilución muy alto tendrá un efecto
contraproducente sobre la velocidad de reacción
eliminando así la ventaja de la separación en la unidad
de ultrafiltración, pues se estaría retirando demasiado
rápido los productos solubles haciendo que el sistema se
desactive y la reacción no se lleve a cabo dentro de
tiempos útiles.
4. Se recomienda trabajar en un rango de temperatura de
45°C. a 70°C. Esto porque a estas temperaturas la
enzima aun es estable y son temperaturas cercanas a la
temperatura de transición vítrea del poliéster, haciendo
que las moléculas estén menos densas o empacadas y de
esta manera maximizando la difusión de la enzima sobre
la superficial de la molécula.
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