SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERÍA, TURISMO Y ALIMENTOS

TECNÓLOGO CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
INFORME: FLORA NORMAL HUMANA

RESULTADO DE APRENDIZAJE:
29080104003 Determinar las
características nutricionales de los
FICHA: 2441263 INSTRUCTOR: Camila Ubaque alimentos frescos y procesados en
NOMBRE DEL APRENDIZ: COMPETENCIA: función de la seguridad alimentaria,
Martha Lucía Ávila Realizar en alimentos análisis de acuerdo con los protocolos
Oscar Beltrán microbiológicos de acuerdo con el establecidos y normatividad
Zaida Salazar protocolo establecido vigente.
Fecha práctica: 2022-06-14
Fecha entrega: 2022-06-21
(AVANCE)

● Realizar siembras en los medios de

INTRODUCCIÓN
Es de suma importancia antes de desarrollar
alguna actividad en el laboratorio reconocer el
ambiente de trabajo, así como los elementos
que se encuentran disponibles (material
volumétrico, equipos de laboratorio, reactivos,
insumos, etc.), con los que cuenta el laboratorio
para desarrollar alguna práctica. Así como los
aspectos a tener en cuenta durante la
preparación de medios de cultivo, que cuidados
deben tenerse, como deben ser preparados,
que función específica tiene cada medio con el
cual se trabaja.
OBJETIVOS
Objetivo general.
Establecer los lineamientos para la preparación,
esterilización, conservación y control de calidad
de medios de cultivos, homogeneizados y
reactivos en el laboratorio de microbiología.
Objetivos específicos.
● Conocer las buenas prácticas de
laboratorio microbiológico.
● Preparar dos medios de cultivo, el
primero es el medio plate count agar con
el cual se pueden aislar bacterias
aeróbicas, y el segundo medio El Agar
Violeta Rojo Bilis (VRBL) el cual es un
medio selectivo para la detección y
recuento de bacterias coliformes.
cultivo preparados e identificar el
crecimiento de colonias.
MARCO TEÓRICO
Algunas recomendaciones que se deben tener
en cuenta durante el trabajo en un laboratorio
de microbiología son las siguientes:
1. Utilizar adecuadamente los EPP’s.
2. No ingerir alimentos en el laboratorio.
3. Limpiar y desinfectar las áreas de trabajo
adecuadamente antes y después de
alguna práctica.
4. Disponer los residuos adecuadamente.
5. Mantener un adecuado orden y limpieza
antes, durante y después de desarrollar
la práctica.
6. Tener claro que se va a realizar durante
la práctica (objetivos de la práctica,
función y cálculos correspondientes de
ellos medios de cultivo).
Plate Count Agar: Es un medio de cultivo
utilizado para enumerar bacterias aeróbicas en
aguas, aguas residuales, alimentos y productos
diarios. Este medio es también recomendado
para determinar poblaciones aeróbicas. Un litro
de medio de cultivo está compuesto por 5,0g de
triptona, 2,50g de extracto de levadura, 1,0g de
glucosa, 15,0g de Agar-Agar. Se debe llevar a
un pH de 7,0 +/- 0,2. (Método de preparación
pesar 22,5 del agar llevar a un volumen de 2L y
ajustar pH). (BD Diagnostic Systems, 2019)
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RESULTADO DE APRENDIZAJE:
29080104003 Determinar las
características nutricionales de los
FICHA: 2441263 INSTRUCTOR: Camila Ubaque alimentos frescos y procesados en
NOMBRE DEL APRENDIZ: COMPETENCIA: función de la seguridad alimentaria,
Martha Lucía Ávila Realizar en alimentos análisis de acuerdo con los protocolos
Oscar Beltrán microbiológicos de acuerdo con el establecidos y normatividad
Zaida Salazar protocolo establecido vigente.
Fecha práctica: 2022-06-14
Fecha entrega: 2022-06-21
(AVANCE)

Violeta Rojo y Bilis Agar. Es un medio de disódico otorga capacidad buffer. (Quíos SAS,
cultivo selectivo para la investigación presuntiva 2022)
y recuento de coliformes en alimentos,
productos lácteos y otros materiales de
importancia sanitaria. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y
FUNDAMENTO MEDIOS DE CULTIVOS.
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto
de levadura aportan los nutrientes necesarios Materiales:
para el crecimiento bacteriano, las sales biliares ● 6 cajas Petri
y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora ● 3 tubos de ensayo tapa rosca
Gram positiva, la lactosa es el hidrato de ● 1 gradilla
carbono fermentable, y el rojo neutro es el
● 3 frascos Schott de 250mL.
indicador de pH. El agar es el agente
solidificante. Los coliformes son bacterias que ● 1 probeta plática de 100mL.
fermentan la lactosa, acidifican el medio y ● Espátula.
producen un viraje del indicador de pH al color ● Papel Parafilm.
rojo intenso. Debido a esto, se observan como ● 2 pipetas pasteur.
colonias de color rojo púrpura, de 1 a 2 mm de ● 3 Aplicadores
diámetro, rodeadas, generalmente, de una zona Equipos
rojiza de bilis precipitada. Composición: un litro ● Balanza.
de solución Agar contiene: 3,0g de extracto de ● Potenciómetro.
levadura, 7,0g de peptona, 1,0g de sales
● Horno microondas.
biliares, 5,0 de cloruro de sodio, 0,03g de rojo
neutro, 0,002g de cristal violeta, 15,0g de Agar. ● Autoclave.
Se ajusta a un pH de 7,4 +/- 0,2. (Britania Lab, ● Termómetro infrarrojo
2021) ● Cabina de flujo laminar.
Caldo B.H.I (infusión cerebro y corazón) es Reactivos
un medio rico en nutrientes La infusión de ● Soluciones Buffer pH 4,7,10.
cerebro de ternera, la infusión de corazón ● NaOH 0,1M
vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, ● HCl 0,1M
nitrógeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato ● Etanol 70%
de carbono fermentable, el cloruro de sodio
● Hipoclorito de sodio 5,25%
mantiene el balance osmótico y el fosfato
● Ácido acético 5%
Medios de cultivo
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RESULTADO DE APRENDIZAJE:
29080104003 Determinar las
características nutricionales de los
FICHA: 2441263 INSTRUCTOR: Camila Ubaque alimentos frescos y procesados en
NOMBRE DEL APRENDIZ: COMPETENCIA: función de la seguridad alimentaria,
Martha Lucía Ávila Realizar en alimentos análisis de acuerdo con los protocolos
Oscar Beltrán microbiológicos de acuerdo con el establecidos y normatividad
Zaida Salazar protocolo establecido vigente.
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(AVANCE)

● Plate Count Agar. Gráfica 2 Preparación caldo de cultivo B.H.I

● Violeta Rojo y Bilis Agar. Caldo BHI

● Caldo B.H.I (infusión cerebro y corazón)

Servir el caldo de cultivo
Retirar el caldo del en los tubos de ensayo
Realizar el
autoclave y dejar enfriar dentro de la cabina de
correspondiente cálculo
flujo laminar y rotular
METODOLOGÍA (Gráfica) para la preparación del
caldo 0,1% p/v

Antes del inicio de la práctica se realizó una Pesar 0,06g de caldo

Esterilizar el caldo de
cultivo junto al material El caldo de cultivo está
BHI y disolver en 60mL del laboratorio por listo para realizar el frotis
desinfección de las áreas de trabajo con una de agua 15minutos a 121°C y
15psi
de manos

solución de alcohol etílico al 70%.

¿El pH del caldo se
Activar el medio en
encuentra entre pH del
Gráfica 1 Preparación medio de cultivo plate count agar medio a 7,4 +/- 0.2?
Si horno microondas por 2
minutos
Fin

Plate count
No

Retirar el medio del Servir el medio de

autoclave y dejar enfriar cultivo en las cajas petri
Realizar el
a una temperatura entre dentro de la cabina de
correspondiente calculo
45 y 50°C flujo laminar ¿El pH es menor ¿El pH es mayor a
para la preparación del
No
medio a 7,2? 7,6?

Esterilizar el medio de
Pesar 1,35g de plate cultivo junto al material Dejar que el medio en la
Si Si
count Agar y disolver en del laboratorio por caja de petri se
60mL de agua 15minutos a 121°C y solidifique
Ajustar el pH a 7,4 +/-
15psi Ajustar el pH a 7,4 +/-
0,2 con solución HCl
0,2 con solución NaOH
0,1N
0,1N

¿El pH del medio se

Activar el medio en
encuentra entre pH del Realizar un frotis de
Si horno microondas por 2
medio a 7,0 +/- 0.2? garganta como se indica
minutos Fin
en el video (Ver
bibliografía)

No Realizar la siembra
frotando el aplicador en
la caja petri realizando Revisar el crecimiento
Caldo BHI
¿El pH es menor
No
¿El pH es mayor a
zig-zag de izquierda a
derecha y de arriba
de colonias.
𝑝 𝑔𝑠𝑡𝑜
a 6,8? 7,2? hacia abajo
0,1% 𝐶𝑎𝑙𝑑𝑜 𝐵𝐻𝐼 =
Si Si Tapar la caja de petri y Incubar entre 32 a 36°C
𝑣 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛
sellar con papel parafilm por 18 a 48 horas
Ajustar el pH a 7,0 +/-
Ajustar el pH a 7,0 +/-
0,2 con solución NaOH
0,1N
0,2 con solución HCl
0,1N 𝑔 𝑔𝑠𝑡𝑜
0,001 =
𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 60 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛
Cálculos
𝑔
𝟐𝟐, 𝟓𝒈
0,001 ∗ 60 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 = 𝑔𝑠𝑡𝑜
𝑷𝒍𝒂𝒕𝒆 𝒄𝒐𝒖𝒏𝒕 𝒂𝒈𝒂𝒓 = 𝒂𝒋𝒖𝒔𝒕𝒂𝒓 𝒑𝑯 𝟕, 𝟎 +⁄− 𝟎, 𝟐
𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛
𝟏𝑳
𝟐𝟐, 𝟓𝒈 𝟏𝑳
𝑔𝑠𝑡𝑜 = 0,06𝑔
𝑷𝒍𝒂𝒕𝒆 𝒄𝒐𝒖𝒏𝒕 𝒂𝒈𝒂𝒓 = ∗ 𝟔𝟎 𝒎𝑳 ∗ = 𝟏, 𝟑𝟓𝒈
𝟏𝑳 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝑳
𝟐𝟐, 𝟓𝒈
𝑪𝒂𝒍𝒅𝒐 𝑩𝑯𝑰 = 𝒂𝒋𝒖𝒔𝒕𝒂𝒓 𝒑𝑯 𝟕, 𝟎 +⁄− 𝟎, 𝟐
𝟏𝑳
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(AVANCE)

RESULTADOS
Gráfica 3 Preparación medio de cultivo VRBL
Las imágenes que se presentan a continuación
VRBL Agar
son el resultado de la prueba de frotis de
garganta realizado con el agar plate count.
Esterilizar el agua con el
Ilustración 1 Cultivo de Bacterias persona 1
cual se preparará el
Realizar la siembra
medio de cultivo junto al
frotando el aplicador en
material del laboratorio
la caja petri realizando Tapar la caja de petri y
por 15minutos a 121°C y
zig-zag de izquierda a sellar con papel parafilm
15psi
derecha y de arriba
hacia abajo

Retirar el agua del Realizar un frotis de

autoclave y dejar enfriar. manos como se indica
Incubar entre 32 a 36°C
en el video (Ver
por 18 a 48 horas
bibliografía) utilizar para
el frotis el caldo BHI

Realizar el
correspondiente calculo
para la preparación del
medio Dejar que el medio en la
Revisar el crecimiento
caja de petri se
de colonias.
solidifique

Pesar 2,49g de VRBL

Agar y disolver en 60mL
Servir el medio de
de agua previamente
cultivo en las cajas petri
esterilizada Fin
dentro de la cabina de
flujo laminar

¿El pH del medio se

Activar el medio en
encuentra entre pH del
medio a 7,4 +/- 0.2?
Si horno microondas por 2
minutos Se evidencia estreptococos color crema, lisos.
Posiblemente puede ser la bacteria
No
Streptococcus mutans, la cual es causante de
¿El pH es menor ¿El pH es mayor a
placa dental.
No
a 7,2? 7,6? Ilustración 2 Cultivo de Bacterias persona 2

Si Si

Ajustar el pH a 7,4 +/-

Ajustar el pH a 7,4 +/-
0,2 con solución HCl
0,2 con solución NaOH
0,1N
0,1N

𝟒𝟏, 𝟓𝒈
𝑨𝒈𝒂𝒓 𝑽𝑹𝑩𝑳 = 𝒂𝒋𝒖𝒔𝒕𝒂𝒓 𝒑𝑯 𝟕, 𝟒 +⁄− 𝟎, 𝟐
𝟏𝑳
𝟒𝟏, 𝟓𝒈 𝟏𝑳
𝑨𝒈𝒂𝒓 𝑽𝑹𝑩𝑳 = ∗ 𝟔𝟎 𝒎𝑳 ∗ = 𝟐, 𝟒𝟗𝒈
𝟏𝑳 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝑳
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(AVANCE)

y gramnegativas, como lo son (Lactobacillus,

Ilustración 3 Cultivo de Bacterias persona 3
Para las personas 2 y 3 se evidencian bacterias
en formas de hélices de forma irregular, de
bordes lobulados de superficie acuminada y de
superficie seca, no se tiene claro que tipo de
bacteria puede tener este tipo de estructura
macroscópica.
En la ilustración 3 se pueden identificar
estreptobacilos de forma planoconvexa color
crema, es posible que esta bacteria sea
Actinomyces israelii. La cual es común
encontrarla en la nariz y en la garganta.
Normalmente no causa enfermedad.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Como se evidencia en las 3 ilustraciones hubo
ningún tipo de crecimiento bacteriano en las
cajas de Petri, esto es un resultado normal
debido a que en la boca se encuentran
bacterias aerobias y anaerobias grampositivas
Actinobacilus, Staphylococcus o
Streptococcus.) como se evidencia en la
ilustración uno se puede identificar claramente
estreptococos los cuales son comunes en
encotran en un frotis de garganta. (Muy ilustre
colegio oficial de farmacéuticos de valencia,
2022).
El medio de cultivo plate count agar al no ser un
medio de cultivo selectivo provee de los
nutrientes necesarios para el crecimiento de
todo tipo de bacterias, este medio es útil para
identificar si una muestra analizar posee carga
bacteriana pero no es el adecuado para
identificar qué tipo de bacterias se encuentran
presentes en la muestra.
Durante la preparación y servido del medio de
cultivo VRBL en las cajas Petri se evidenció que
este medio no se solidifica adecuadamente, ya
que, al realizar movimientos suaves después de
frías las cajas el medio se fragmentó y no tenía
una consistencia adecuada de un gel. El error
en la preparación de este medio de cultivo pudo
deberse a que el medio de cultivo no se disolvió
apropiadamente en el agua generando así la
inestabilidad evidencia después de servido. No
se siguieron adecuadamente las
recomendaciones del fabricante en la etapa de
preparación (Britania Lab, 2021), en la cual
indica que el medio debe disolverse en
calentamiento y con agitación, constante
después de disuelto debe llevarse a ebullición
por un minuto. Durante la etapa de preparación
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no se aplicó temperatura para su disolución y el nutritivo no se utilizó agua destilada la cual es el

medio se sobrecalentó sin que éste se hubiese tipo de agua adecuado para la preparación de
disuelto. los medios de cultivo, si no que se empleó agua
potable para la preparación de estos.
Ilustración 4 Ejemplo colonias detectectadas con el medio
VRBL

CONCLUSIONES
● Se conocieron algunas de las buenas
prácticas de laboratorio de microbiología
como lo son la limpieza y desinfección de
las áreas de trabajo antes y después de
realizar los ensayos, el uso de cabinas
de flujo laminar para el servido y siembra
de los medios de cultivo. La adecuada
manipulación de los equipos y materiales
de laboratorio.

● Se prepararon dos medios de cultivo

Como puede verse en la ilustración 4 se espera
obtener unas colonias empleando el medio
VRBL, este medio es de utilidad en el análisis
de alimento debido a que al ser un medio
selectivo inhiben el crecimiento de bacterias
grampositivas como son las bacterias
fermentables del carbohidrato lactosa (BD
Diagnostic Systems, 2019) y así pueden
● Se realizaron siembras en el medio de
detectarse otras bacterias como coliformes y E.
Coli en productos lácteos sin generar ningún
tipo de interferencia con las bacterias
naturalmente presentes en los productos
lácteos.
para la identificación de bacterias el uno
selectivo y el otro no. Se analizó cuál es
la importancia y el empleo de cada uno
de ellos, así como, se dio un breve
vistazo de cómo se realizan algunos
controles en planta de la industria de
alimentos como los son los frotis de
manos y de garganta.
cultivo plate count agar con el fin de
identificar bacterias aerobias y conocer
como es el proceso de siembra de
muestra en un medio de cultivo.

Se debe tener en cuenta que durante la

preparación de los medios de cultivo y el caldo
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(AVANCE)

Britania Lab. (2021). Violeta Rojo y Bilis Agar.

Los Patios, Argentina: Britania Lab.
Conclusión PoliVirtual CECyT 16. (19 de 06 de 2022).
Exudado Faríngeo. Toma de Muestra.
Al ser esta la primera práctica de laboratorio de Serie: Laboratorista Clínico. Obtenido de
microbiología fue fundamental para conocer las Youtube:
instalaciones de los laboratorios de https://www.youtube.com/watch?v=udb
microbiología del SENA, las buenas prácticas QFCZvuqs
de laboratorio de microbiología, la adecuada Quíos SAS. (19 de 06 de 2022). Quíos SAS.
preparación de medios de cultivo, la correcta Obtenido de Quíos SAS:
siembra en los medios de cultivo y la https://quios.com.co/producto/caldo-b-h-
identificación de colonias en cada uno de los i/
medios de cultivo preparados y sembrados. Así
como identificar el medio de cultivo apropiado
para la identificación de los diferentes
microorganismos.

Bibliografía
Aquihuati Ramos, M., & Pérez Chabela, M.
(2004). Manual de prácticas del
laboratorio de microbiología general.
Iztapalapa, México: Universidad
autónoma metropolitana unidad
Iztapalapa.
Asebiol. (19 de 06 de 2022). frotis de manos.
Obtenido de Youtube:
https://www.youtube.com/watch?v=9p8t
V210ZSs
BD Diagnostic Systems. (2019). BD Plate
Count Agar (Standard Methods Agar).
Heidelberg, Alemania: BD Diagnostic
Systems.