TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE SAN FELIPE

DEL PROGRESO

PRE-PRACTICA NO.5

ANALISIS DE LIMITES MICROBIANOS

NOMBRE DE LA MATERIA:

ANALISIS INDUSTRIALES

NOMBRE DE LA PROFESOR:

Q.B.P HUGO LUIS RAMIREZ BAEZ

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

DAYANARA SHERLYN ANDRADE LOPEZ

BRYAN ALEXIS GARAY REMEDIOS

NAYDELIN AGLAHE GONZALEZ RAMIREZ

LLUVIA JERONIMO IGLESIAS

BRANDON MAYA MARTINEZ

ARELI SANCHEZ PEREZ

6° SEMESTRE

GRUPO: 601

FECHA DE ENTREGA: 08 DE JUNIO DEL 2023

 ANTECEDENTES
¿Qué es?
Las muestras deben recolectarse bajo las condiciones más higiénicas posibles.
Se debe evitar afectar a los microorganismos contaminantes de los productos de
prueba.

Si el producto de prueba tiene actividad antimicrobiana, se debe eliminar o

neutralizar hasta donde sea posible. Si se usan substancias tensoactivas para
preparar la muestra, se debe demostrar la ausencia de toxicidad para los
microorganismos y su compatibilidad con los neutralizantes utilizados.

Los productos farmacéuticos son agentes químicos utilizados terapéuticamente

para tratar enfermedades. Actualmente, los medicamentos son usados para la
prevención, así como para el tratamiento de enfermedades o sus consecuencias.
Se exponen los aspectos considerados en la evaluación sanitaria de productos
farmacéuticos de importación y producción nacional. Se relatan los
procedimientos establecidos para aprobar y considerar un producto como apto
para uso o consumo humano.

La evaluación de los productos farmacéuticos por el Registro sanitario se basa en

el análisis de la materia prima, producto intermedio y producto terminado, de
interés particular en casos necesarios. Se mencionan los análisis microbiológicos
más importantes.

Es importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto, su calidad, es

de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está
presente en otros procesos relacionados con dicha producción. Sin embargo, el
agua también puede actuar como vehículo de microorganismos y su carga
microbiana dependerá del método de obtención, distribución y/o almacenamiento.

La técnica consiste en diluir la muestra en un medio de cultivo y luego sembrar

una pequeña cantidad de la dilución en una placa o bien mezclarla. A
continuación, la placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas.
Una vez que se han formado colonias visibles, generalmente después de un día,
se seleccionan para el recuento de colonias las placas en las que éstas están
bien separadas.

Las placas que tienen entre 30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la
rapidez del recuento y la precisión en el resultado obtenido.

El número de colonias de una placa, junto con la dilución de la muestra que se

inoculó en ella, nos permite calcular la concentración de células presente en la
muestra original.
 OBJETIVO

 El alumno realizará el aislamiento de organismos mesófilos aerobios

(OMA) y de hongos filamentosos y levaduras (HL), a partir de diversas
muestras.
 MATERIALES
 Matraces Erlenmeyer: Son recipientes de vidrio que se utilizan en química
para contener líquidos y realizar reacciones en su interior. Tienen una
forma cónica con un cuello angosto y alargado que permite el uso de
tapones.
 Cajas Petri: Son recipientes planos y circulares de vidrio o plástico
utilizados en microbiología para el cultivo de microorganismos.
 Tipié: Es un instrumento de laboratorio que se utiliza para medir y agregar
pequeñas cantidades de líquidos, como ácidos o reactivos, a una muestra.
 Probeta: Es un tubo de vidrio graduado que se utiliza para medir el
volumen de líquidos.
 Vidrio de reloj: Es un pequeño recipiente de vidrio cóncavo utilizado en el
laboratorio para contener o evaporar pequeñas cantidades de líquidos.
 Espátula cuchara: Es un instrumento de laboratorio con una cabeza en
forma de cuchara que se utiliza para recoger y transferir pequeñas
cantidades de sustancias sólidas.
 Tramo de manguera: Es un tubo de material flexible utilizado para
transportar líquidos o gases de un lugar a otro en el laboratorio.
 Mechero Bunsen: Es un dispositivo de combustión utilizado en el
laboratorio para producir una llama caliente y estable, que se utiliza para
calentar sustancias.
 Rejilla de alambre: Es un soporte de alambre utilizado en el laboratorio
para sostener frascos, matraces y otros recipientes durante procesos de
calentamiento.
 Guantes de asbesto: Son guantes especiales utilizados en trabajos de
laboratorio que implican altas temperaturas y peligro de incendio.
 Matraz volumétrico: Es un recipiente de vidrio graduado que se utiliza para
medir un volumen fijo de líquido con gran precisión.
 Papel pH: Es un papel indicador utilizado en laboratorios y en otras
aplicaciones para determinar el pH de una solución.
 Hisopos estériles: Son pequeños bastoncillos de algodón esterilizado
utilizados en el laboratorio para tomar muestras de bacterias u otras
sustancias.
 Algodón: Es una fibra natural utilizada
 HIPOTESIS

Si se realiza un análisis de límites microbiológicos en un producto alimentario, se

podrá determinar la cantidad máxima de microorganismos permitida por la
normativa y se podrá identificar cualquier posible contaminación en el alimento. Si
se encuentra una cantidad de bacterias superior al límite permitido, entonces se
podrá considerar que el alimento puede representar un riesgo para la salud de los
consumidores, ya que la presencia de microorganismos podría indicar una posible
contaminación y un incumplimiento de los requisitos de calidad e inocuidad del
producto alimentario.

Además, se espera que el análisis de límites microbiológicos permita identificar la

fuente de contaminación, ya sea en el proceso de producción, en la manipulación
del alimento o en el almacenamiento, y se puedan tomar medidas preventivas y
correctivas para garantizar la seguridad alimentaria. También se espera que el
análisis de límites microbiológicos permita identificar posibles fallos en el sistema
de gestión de calidad y/o en la aplicación de buenas prácticas de higiene y
manipulación de alimentos, con el fin de modificar aquellos procesos,
procedimientos o prácticas que pudieran estar afectando la calidad e inocuidad
del producto.
 METODOLOGÍA

 Las muestras deben recolectarse bajo las condiciones más higiénicas

posibles. Se debe evitar afectar a los microorganismos contaminantes de
los productos de prueba.
 Si el producto de prueba tiene actividad antimicrobiana, se debe eliminar o
neutralizar hasta donde sea posible. Si se usan substancias tensoactivas
para preparar la muestra, se debe demostrar la ausencia de toxicidad para
los microorganismos y su compatibilidad con los neutralizantes utilizados.
 Las soluciones y los medios de cultivo que se indican son satisfactorios
para las pruebas descritas en esta práctica, se pueden utilizar otros medios
de cultivo si se demuestra que presentan características similares de
promoción del crecimiento de los microorganismos de referencia indicados
para cada una de las pruebas.
1. En un matraz volumétrico de 1 000 mL, disolver el fosfato en agua y ajustar
el pH a 7.2 ± 0.2 con una solución de hidróxido de sodio 1.0 N
(aproximadamente 175 mL) llevar a volumen, mezclar, envasar y
esterilizar.
2. Diluir 1.25 mL de la solución concentrada en 1 000 mL de agua purificada.
Envasar en volúmenes de 90 y 9 mL y esterilizar en autoclave usando
ciclos validados.
3. Ajustar el pH de modo que después de la esterilización sea 7.3 ± 0.2 a
25°C. Esterilizar en autoclave usando ciclos validados.
4. Ajustar el pH de modo que después de la esterilización sea 5.6 ± 0.2 a
25°C. Esterilizar en autoclave usando ciclos validados.
 PROPIEDADES FISICOQUIMICAS DE LOS REACTIVOS

ETANOL AL 70% Y AL 96%

SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE FOSFATOS PH 7.2

AGAR SOYA TRIPTICASEÍNA
A. AGAR DEXTROSA SABOURAUD
 TOXICOLOGIA
B. SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE FOSFATOS PH 7.2

El buffer fosfato, pH 7.2, se utiliza para la preparación de

blancos de dilución microbiológicos en un entorno de
laboratorio. El buffer fosfato, pH 7.2, no está destinado a ser
utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras
condiciones en humanos. La fórmula para el buffer fosfato es
especificada por la Asociación Americana de Salud Pública
(APHA) para su uso en la dilución de muestras de prueba. El
buffer fosfato, pH 7.2, se especifica para su uso en la dilución
de agua, productos lácteos y alimentos en métodos
microbiológicos. En las pruebas de agua y productos lácteos,
se recomienda la adición de cloruro de magnesio. Este buffer
también se conoce como diluyente fosfato tamponado de
Butterfield y se recomienda para las pruebas de alimentos. El
buffer fosfato, pH 7.2, estabiliza el pH del agua utilizada para
diluciones.

Ilustración 1Rombo de seguridad del Buffer Fosfato, pH 7.2

I. Contacto ocular: Puede causar irritación 

II. Contacto dérmico: El contacto puede provocar
enrojecimiento e irritación.  Inhalación: Irritación del
sistema respiratorio 
III. Ingestión: Puede ocasionar náuseas, vómitos y
malestares estomacales.

Ilustración 2 Irritante.

C. ETANOL AL 70% Y AL 96%

El alcohol etílico también conocido como etanol, alcohol

vínico y alcohol de melazas, es un líquido incoloro y volátil de
olor agradable, que puede ser obtenido por dos métodos
principales: la fermentación de las azúcares y un método
sintético a partir del etileno. El etanol se utiliza
industrialmente para la obtención de acetaldehído, vinagre,
butadieno, cloruro de etilo y nitrocelulosa, entre otros. Es muy
utilizado como disolvente en síntesis de fármacos, plásticos,
lacas, perfumes, cosméticos, etc. También se utiliza en
mezclas anticongelantes, como combustible, como
antiséptico en cirugía, como materia prima en síntesis y en la
preservación de especímenes fisiológicos y patológicos.

Ilustración 3 Rombo de seguridad Alcohol Etílico.

Vía Síntomas Irritante

Inhalación: Una inhalación prolongada de Si
concentraciones altas (mayores de
5000 ppm) produce irritación de
ojos y tracto respiratorio superior,
náuseas, vómito, dolor de cabeza o
depresión, adormecimiento y otros
efectos narcóticos, coma o incluso,
la muerte.
Ojos Se presenta irritación solo en Si
concentraciones mayores a 5000 a
10000 ppm.
Piel : El líquido puede afectar la piel, Si
produciendo dermatitis
caracterizada por resequedad y
 agrietamiento
Ingestión Dosis grandes provocan Si
envenenamiento alcohólico,
mientras que su ingestión
constante, alcoholismo. También
se sospecha que la ingestión de
etanol aumenta la toxicidad de
otros productos químicos presentes
en las industrias y laboratorios, por
inhibición de su excreción o de su
metabolismo, por ejemplo: 1,1,1-
tricloroetano, xileno, tricloroetileno,
dimetilformamida, benceno y
plomo. La ingestión constante de
grandes cantidades de etanol
provoca daños en el cerebro,
hígado y riñones, que conducen a
la muerte. La ingestión de alcohol
desnaturalizado aumenta los
efectos tóxicos, debido a la
presencia de metanol, piridinas y
benceno, utilizados como agentes
desnaturalizantes, produciendo
 ceguera o, incluso, la muerte a
corto plazo.
Riesgos Existen evidencias de toxicidad al Si
reproductivo feto y teratogenicidad en
s experimentos con animales de
laboratorio tratados con dosis
grandes durante la gestación. El
etanol induce el aborto.

Ilustración 4 Inflamable e irritante.

D. AGAR SOYA TRIPTICASEÍNA

Agar Soya Tripticaseína (AST) es un medio de cultivo

utilizado para el crecimiento y cuenta de bacterias, levaduras
y hongos. Es un medio de cultivo rico en nutrientes que
permite el crecimiento de microorganismos fastidiosos y no
fastidiosos.
 Ilustración 5 Rombo de seguridad del Agar Soya.

En caso de exposición repetitiva, prolongada o a

concentraciones superiores a las establecidas por los límites
de exposición profesionales, pueden producirse efectos
adversos para la salud en función de la vía de exposición:

A. Ingestión (efecto agudo):

I. Toxicidad aguda: La ingesta de una dosis considerable puede
originar irritación de garganta, dolor abdominal, náuseas y
vómitos.
II. Corrosividad/Irritabilidad: El producto ha sido evaluado con
los datos disponibles y no satisface los criterios de
clasificación, no presentando sustancias clasificadas como
peligrosas por este efecto.
B. Inhalación (efecto agudo):
I. Toxicidad aguda: El producto ha sido evaluado con los datos
disponibles y no satisface los criterios de clasificación, no
 presentando sustancias clasificadas como peligrosas por
inhalación.
II. Corrosividad/Irritabilidad: El producto ha sido evaluado con
los datos disponibles y no satisface los criterios de
clasificación, no presentando sustancias clasificadas como
peligrosas por este efecto.
C. Contacto con la piel y los ojos (efecto agudo):
I. Contacto con la piel: El producto ha sido evaluado con los
datos disponibles y no satisface los criterios de
clasificación, no presentando sustancias clasificadas como
peligrosas por contacto con la piel.
II. Contacto con los ojos: El producto ha sido evaluado con
los datos disponibles y no satisface los criterios de
clasificación, no presentando sustancias clasificadas como
peligrosas por este efecto.

Ilustración 6 Irritante.

E. AGAR DEXTROSA SABOURAUD

Agar Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula

original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymond
Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos
patógenos y no patógenos que se logra mediante la adición
de cloranfenicol, particularmente de aquellos asociados con
infecciones de piel. La alta concentración de dextrosa y la
acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos.
Con la adición de cicloheximida, estreptomicina y penicilina,
se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario
de dermatofitos. Este medio es también utilizado para la
determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la
presencia de hongos en alimentos. En este medio las
peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el
crecimiento de los microorganismos, la dextrosa actúa como
fuente de energía y el agar es agregado como agente
solidificante.

Ilustración 7 Rombo se seguridad del Agar Dextrosa.

 Lesiones oculares graves o irritación ocular: No se clasificará

como causante de lesiones oculares graves o como irritante
ocular
 Sensibilización respiratoria o cutánea: No se clasificará como
sensibilizante respiratoria o sensibilizante cutánea.
 Mutagenicidad en células germinales: No se clasificará como
mutágeno en células germinales.
 Carcinogenicidad: No se clasificará como carcinógeno
 Corrosión o irritación cutánea: No se clasificará como
corrosivo/irritante para la piel

Ilustración 8 Irritante.
 TRATAMIENTO DE RESIDUOS
En el laboratorio se manejan gran cantidad de productos y se efectúan diversas
operaciones que conllevan la generación de residuos, en la mayoría de los casos
peligrosos para la salud y el medio ambiente. Aunque el volumen de residuos que
se generan en los laboratorios es generalmente pequeño en relación al
proveniente del sector industrial, no por ello debe minusvalorarse el problema.
Unas adecuadas condiciones de trabajo en el laboratorio implican inevitablemente
el control, tratamiento y eliminación de los residuos generados en el mismo, por lo
que su gestión es un aspecto imprescindible en la organización de todo
laboratorio.
Otra cuestión a considerar es la de los derrames, que, si bien tienen algunos
aspectos coincidentes con los métodos de tratamiento para la eliminación de
residuos, la actuación frente a ellos exige la consideración de otros factores como
la rapidez de acción,
aplicación de métodos de descontaminación adecuados, etc. Para una correcta
realización de lo indicado anteriormente es aconsejable designar personas
responsables, así como facilitar una completa información a todo el personal del
laboratorio sobre estos temas.
Nosotros como personal capaz de entrar a un laboratorio debemos de tratar los
residuos que llegamos a utilizar los cuales se deben almacenarse en recipientes
específicos convenientemente señalizados y retirarse siguiendo procesos
preestablecidos. Normalmente se esterilizan y se incineran.
Tratamiento de residuos como medio de cultivo
Los residuos peligrosos biológico-infecciosos deben ser tratados por métodos
físicos o químicos que garanticen la eliminación de microorganismos patógenos y
deben hacerse irreconocibles para su disposición final en los sitios autorizados.

Materia prima: Fueron tomados residuos orgánicos procedentes del

tecnológico de Estudios superiores de san Felipe del progreso
En la elaboración de los medios de cultivo líquidos a partir de los residuos-sólidos
se realizó

Desecho de medios de cultivo

Directamente al desagüe ni en los depósitos de basura. recipientes irrompibles y
resistentes al calor, ubicados en el área de trabajo. Si el material es desechable
debe ser colocado directamente en las bolsas rojas de desechos biológicos para
posteriormente ser esterilizados y descartados.
Todo el material contaminado (vidrio, metálico, etc.) deberá ser colocado en
recipientes irrompibles y resistentes al calor, ubicados en el área de trabajo. Si
el material es desechable debe ser colocado directamente en las bolsas rojas
de desechos biológicos para posteriormente ser esterilizados y descartados.
• No se debe retirar el material contaminado una vez que ha sido colocado en
los recipientes destinados a su recolección, pues ello puede ocasionar accidentes
por cortaduras, pinchazos o contacto directo con material contaminado.
• No se debe transferir el material de un recipiente a otro.
 REFERENCIAS
o Farmacopea de los Estados Unidos de América; Formulario Nacional; Vol.
1; Edición anual en español (USP)
o NOM-113-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Método para la cuenta de
microorganismos coliformes totales en placa
o .NOM-115-Ssa1-1994, Bienes y Servicios. Método para la determinación
de Staphylococcus aureus en alimentos
o .NOM-127-SSA1-1994, "Salud Ambiental, Agua para uso y consumo
HumanoLimites permisibles de calidad y tratamientos a que debe
someterse el agua para su potabilización".
o .Jean F. Mac Faddin Pruebas Bioquímicas para Identificación de Bacterias
de Importancia Clínica, , 3ª edición, Editorial Medica Panamericana