Instituto Politecnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biologicas

Departamento de bioquimica
Laboratorio de Bioquimica general

Cinetica Enzimatica : Efecto de la concentración de la encima y el efecto del pH en la velocidad de la

reacción.

Informe. Seccion: 3. Grupo: 3FV1.

Alumnos:
Padilla Navarrete Claudia Alitzel
Santana Reyna Daniel

Introducción. Describir el efecto del pH en la cinética

enzimática de la invertasa
La mayoría de los enzimas son muy sensibles
Determinar el pH óptimo de la invertasa
a los cambios de pH. Desviaciones de pocas
décimas por encima o por debajo del pH Resultados.
óptimo pueden afectar drásticamente su
actividad. La velocidad puede determinarse Absorbancia AR
(nm) (umoles) Vo (UI) B Pendiente
bien midiendo la aparición de los productos o
la desaparición de los reactivos. ... Para 0.064 1 0.1 0.089 0.0921

estudiar la cinética enzimática se mide el 0.189 2 0.2 0.089 0.0921

efecto de la concentración inicial de sustrato 0.359 4 0.4 0.089 0.0921
sobre la velocidad inicial de la reacción,
0.76 8 0.8 0.089 0.0921
manteniendo la cantidad de enzima constante.
0.885 10 1 0.089 0.0921
El cambio de pH también provoca que se
Tabla 1. Valores de la cuerva tipo azucares.
modifique la estructura terciaria de la enzima,
lo que tiene como resultado la perdida de la # Tubo [E] ug/2mL [AR] umol/2mL Vo(UI)
actividad biológica de la enzima. Un cambio 1 0.0000138 0.715 0.143
brusco en el pH de la solución en donde se 2 0.00002775 0.98 0.196
encuentra la enzima, la enzima se 3 0.00004165 1.85 0.37
desnaturaliza; por lo tanto pierde su capacidad 4 0.0000555 2.71 0.542
de catálisis. 5 0.000069 3.55 0.71

Objetivos. Tabla 2. Efecto de la concentración de la enzima en la velocidad

de reacción enzimática

Analizar la variación de enzima en la

cinética enzimática de la invertasa

1
 0.8 Vo/ [E]
0.7 Discusión.
y = 10706x - 0.0525
0.6
R² = 0.9744
0.5 La adición del ácido 3,5-dinitro salicílico
Vo (UI)

0.4
(acido 3, 5-DNS ) tiene un papel muy
0.3
0.2 importante dentro del desarrollo de esta
0.1
práctica, a continuación se describen los usos
0
0.0000 0.0000 0.0000 0.0001 0.0001 de 3, 5-DNS: a) permite coloración de la
[E] ug/2mL reacción para poder cuantificar la presencia de
Grafica. 1. Efecto de la concentración del sustrato entre la
azucares reductores, b) proporciona un medio
velocidad de reacción enzimática
alcalino que permite la isomerización de la
pH nm [AR] Vo (UI) fructosa a glucosa y c) detiene la reacción
micromol/2ml enzimática. El ácido 3,5 DNS presenta un
3 0.112 0.6292 0.1258 color amarillo en su estado oxidado, al tener
4 0.332 1.8652 0.3730 contacto con un azúcar reductor, desata una
4.5 0.426 2.3933 0.4787 reacción de óxido-reducción en la cual se
5 0.577 3.2416 0.6483 forma un compuesto con coloracion diferente

6.5 0.307 1.7247 0.3449 a la inicial (formación d e una mezcla de 3-

7.5 0.193 1.0843 0.2169 nitro, 5-amino salicilato y de ácido 3-amino,

Tabla 3. Efecto del pH en la velocidad de reacción a distinto pH

5-nitro salicilato). El ácido 3, 5-DNS se reduce
formando un compuesto con coloración rojiza,
la glucosa se oxida formando el gluconato, en
Vo/[pH]
0.7 la ilustración 1 se muestra la reacción general
0.6 de óxido-reduccion. La aromaticidad del
0.5
compuesto formado es la que permite la
Vo (UI)

0.4
0.3
lectura y cuantificación mediante el
0.2 espectrofotómetro a 540 nm. (Carey, 2006).
0.1
0
El cambio de pH también provoca que se
3 4 5 6 7 modifique la estructura terciaria de la enzima,
pH
lo que tiene como resultado la perdida de la
actividad biológica de la enzima. Un cambio
Grafica. . Efecto del pH entre la velocidad de reacción
enzimática brusco en el pH de la solución en donde se
encuentra la enzima, la enzima se
desnaturaliza; por lo tanto pierde su capacidad

2
de catálisis. Las modificaciones del pH pueden • Caray, F.A. Química orgánica. 6a Edición.
hacer que la enzima se acerque a su punto McGraw Hill interamericana. México
isoeléctrico, observando la precipitación de 2006. Página consultada 1027.
esta. Al haber cierto porcentaje de enzima • Fonseca, S.E. Revista Especializada en
precipitada, la actividad enzimática va a ser Ciencias Quimico-Biologicas. Métodos
menor. Este comportamiento se observó en los no enzimáticos de isomerización de
tubos 1 y 2 con pH de 3 y 4 respectivamente, aldosas a cetosas. 2009
por lo que podemos afirmar que el punto • McKee, J.R. bioquímica. La base
isoeléctrico de la invertasa se encuentr a molecular de la vida. 3ª Edición. McGraw-
alrededor de esos valores de pH; para Hill. España, 2003. Paginas consultadas
contrarrestar este efecto, se le agregó NaOH 167-173.
después del desarrollo de color. Otra • Methods in enzimology, 1975
consecuencia del cambio del pH es la
• Brown, T.L. química. La ciencia central.
modificación del sustrato, en esta
Pearson educación. México, 2004.
experimentación este no fue el caso ya que la
Paginas consultadas 258
sacarosa no puede ser ionizada tan fácilmente
(McKee, 2003).

Conclusiones.
• El pH óptimo de la invertasa es de 6.5
• El pH puede modificar la estructura
terciaria de la invertasa, haciendo que
pierda actividad enzimática
• El pH modifica el estado de ionización del
sitio activo de la sacarosa
• La concentración de enzima es
directamente proporcional a la actividad
enzimática, siempre y cuando la
concentración de sustrato sea constante y
no se agote
• Poca concentración de enzima puede
hidrolizar gran cantidad de sacarosa.

Referencias.

3
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