INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
PRACTICA “CURVA TIPO DE AZUCARES REDUCTORES”
Integrantes:
GÓMEZ MORALES CARMEN ZIANNIA. PELAGIO JIMENEZ JENNIFER DENNISE
Grupo: 3IV1 Sección: 3

INTRODUCCIÓN Esta técnica es aplicable a todos los

Las enzimas son catalizadores proteicos que procedimientos de sistemas de cultivos de
disminuyen la energía de activación o energía medios líquidos y solidos cuya molécula de
necesaria para iniciar una reacción. Son sustrato sea azucares reductores como la
específicas, esto es que reconocen un substrato glucosa.
determinado y no forman parte del producto de
la reacción y pueden volver a utilizarse
nuevamente, por lo cual resulta ser muy OBJETIVOS
eficientes pues se requieren en pequeñas → Analizar algunos factores que modifican
cantidades. Aceleran las reacciones bioquímicas la velocidad de la reacción catalizada por
al interaccionar físicamente con los reactivos y la invertasa y caracterizar de esta
productos para brindarles un pasaje favorable manera a dicha enzima.
en la transformación de unos en otros. Las → Hallar la relación entre la concentración
enzimas aumentan la velocidad de las de azucares reductores y la absorbancia
reacciones al incrementar las probabilidades de de las muestras.
que los reactivos interactúen de manera → Obtener una curva de calibración,
productiva. mediante la cual se pueden transformar
Para su funcionamiento, además de requerir de las lecturas de absorbancia obtenidas en
cofactores y coenzimas se ven afectadas por los experimentos de cinética enzimática,
otros factores relacionados con el grado de en micro moles de azúcar reductor, para
acidez o alcalinidad, pH, la temperatura, la obtener la actividad de la enzima
concentración del substrato y la concentración invertasa en unidades internacionales
de la enzima. (UI).
Una de las enzimas más conocidas y
ampliamente estudiadas es la sacarosa β- RESULTADOS
fructofuranosidasa o invertasa, que puede Tubo Testi Problemas
go
hidrolizar diferentes sustratos, presentando una
T 1 2 3 4 5
maxima actividad con la sacarosa.
GLUCOSA 0 0.1 0.2 0.4 0.8 1.0
Los azucares reductores son aquellos azucares
0.005M
que como la glucosa, la fructosa, la lactosa, FRUCTOSA
entre otros, poseen su grupo carbonilo intacto, 0.005M
y que a través del mismo pueden reaccionar con (ml)
SACAROSA 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
otras especies.
0.2M
La curva de calibración es la representación REGULADO 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
gráfica en un eje de coordenadas de la R DE
absorbancia (eje y), frente a la concentración ACETATOS
(eje x). Se ensayan varias soluciones de 0.05M
AGUA 1.0 0.9 0.8 0.6 0.2 0
concentración conocida y se determinan sus
absorbancias. 3,5 DNS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Para la determinación de la actividad invertasa (ml)
se utilizara un ensayo indirecto en el que los DESARROL 5 minutos a 92° C (baño maria)
LO DE
productos de reacción serán detectados
COLOR
espectrofotométricamente tras su conversión en DILUCIÓN Colocar en baño con hielo y diluir con 2ml
derivados coloreados. La extensión de la de agua destilada
hidrolisis enzimática de sacarosa (azúcar no Leer en un espectrofotómetro a 540 nm
reductor) en glucosa más fructosa (azúcar ABSORBAN 0 0.1 0.17 0.51 0.90 0.50
reductor) se valorara mediante el método del CIA 31 5 9 2 1
ácido 3,5-dinitrosalicilico (DNS), el cual se basa AZUCAR 0 1 2 4 8 10
REDUCTOR
en la reducción del DNS (de color amarillo) por 2.0 ml
la glucosa u otro azúcar reductor al acido 3-
amino-5-nitrosalicilico (de color rojo ladrillo),
cuya presencia puede detectarse por la lectura
de la absorbancia en la zona de 540-570 nm.
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GÓMEZ MORALES CARMEN ZIANNIA. PELAGIO JIMENEZ JENNIFER DENNISE
Grupo: 3IV1 Sección: 3

CALCULOS: REACCIÓN QUÍMICA LLEVADA A CABO

(Este procedimiento se hizo para el resto de los
tubos, respectivamente)

Ejemplo:
Tubo No. 1

a) 0.005 mol (glucosa) + 0.005 mol (fructosa)

= 0.01 mol (total de azúcar reductor)
b) 0.01 mol – 1000 ml
X - 0.1 ml
X= 1x10-6 mol
c) 1 mol – 1000000 ml µmol
1x10-6 mol – X -----------= 1 µmol

Ejemplo 2:
Tubo No.3
a) 0.005 mol (glucosa) + 0.005 mol (fructosa)
= 0.01 mol (total de azúcar reductor)
b) 0.01 mol – 1000 ml
X - 0.4 ml
X= 4x10-6 mol
c) 1 mol – 1000000 ml µmol
4x10-6 mol – X -----------= 4 µmol
DISCUSIÓN

Se utilizó como revelador el ácido 3,5 –

GRÁFICA DE ABSORBENCIA CONTRA
dinitrosalicílico disuelto en hidróxido de sodio,
CONCENTRACIÓN DE AZÚCAR REDUCTOR
por tanto, la especie química indicadora
µMOLES
utilizada es el 3,5 dinitrosalicilato. La reacción
de la invertasa sobre la sacarosa no implica la
aparición de productos coloridos, por lo que
se requiere de una especie química que nos
permita obtener un compuesto colorido para
llevar a cabo un análisis óptico con el
espectrofotómetro. Los azúcares reductores
reducen al 3,5 dinitrosalicilato de color amarillo
a 3-nitro, 5-amino salicilato que es de color rojo.
Los productos de la reacción de la invertasa
sobre la sacarosa son azúcares reductores,
así que este compuesto es adecuado para
cuantificar la actividad enzimática Para revelar
GRAFICA 1.
la reacción se requiere una temperatura de
ebullición, por lo que el testigo y los
problemas se deben incubar por 5 minutos en
esa temperatura. Según sea la cantidad de
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azúcares reductores será la intensidad del color.

Como el compuesto es rojo, debe leerse con
una luz de color complementario, en este
caso la luz es verde y su longitud de onda es 540
nm. Cualitativamente se observo como hubo un
cambio en la coloración de un amarillo a un tono
rojizo.

CONCLUSIONES

La absorbancia es directamente proporcional

a la concentración de azúcar reductor. La curva
de calibración se basa en la existencia de una
relación en principio lineal entre un carácter
medible (la absorbancia) y la variable a
determinar (la concentración). Al modificar
alguno de los factores usados en la realización
de esta práctica, obtuvimos un estándar para
comparar como cambia la acción de la enzima
sobre el analito. Una curva nos sirve de
referencia para determinar el comportamiento
de una muestra incógnita mediante
interpolación.

Al modificar alguno de los factores usados en la

realización de esta práctica, obtuvimos un
estándar para comparar como cambia la acción
de la enzima sobre el analito. Una curva nos
sirve de referencia para determinar el
comportamiento de una muestra incógnita
mediante interpolación

REFERENCIAS
➔ Aldave Tena M., Jorin N.J (2017).
“Extracción y ensayo de la actividad
invertasa de levadura de panaderia”.
Recuperado 6-nov-2022 de:
scielo.org.col.pdf/acag/v68n2/0120-
2812-acag-68-02-115.pdf
➔ Mckee.T.,Mckee J.R. “Bioquimica” Ed.
McGraw-Hill; Interamericana, 3ª
Edición (2003). Pag. (200-233).