BIOQUIMICA GENERAL

RAMIREZ CARMONA DANIELA

QUEZADA FLORES LUIS ANTONIO
SECCION 1 4QV3

SEPARACION, PRECIPITACIÓN Y PUNTO ISOELECTRICO DE LAS PROTEÍNAS

Introducción TABLA 1. RESULTADOS DE SALTING-OUT

Es importante primero hablar de la solubilidad de las Muestra Biuret Interpretación

proteínas, en la mayoría se dé gracias la interacción Precipitado 1 + Aún hay
hidrofílica de las moléculas polares del agua y los proteínas
grupos y ionizados de las proteínas. Sobrenadante 1 + Aún hay
proteínas
Existen factores que afectan la solubilidad de las Precipitado 2 + Aún hay
proteínas como: Fuerza y iónica: un aumento provoca proteínas
una disminución en el grado de hidratación de los Sobrenadante 2 + Aún hay
grupos iónicos superficiales de la proteína, ya que, estos proteínas
solutos compiten por el agua y rompen los puentes de
hidrógeno o las interacciones electrostáticas. (Treijon, J. IMAGEN 1. RESULTADOS DE SALTING OUT
Et.al., 20009)

pH: los iones hidrógeno e hidróxido del agua provocan

efectos parecidos, afecta la envoltura acuosa de las
proteínas y también la carga eléctrica de los grupos
ácidos y básicos de las cadenas laterales de
aminoácidos. Esta alteración de la carga superficial de
proteínas elimina las interacciones electrostáticas que
estabiliza la estructura terciaria y a menudo provoca su
precipitación. (Lehninger, N. 2019)

Temperatura: cuando es elevada aumenta la energía

cinética de las moléculas, con lo que se desorganiza la
envoltura acuosa de las proteínas y se desnaturalizan.
También este aumento destruye las interacciones
débiles y desorganiza la estructura de la proteína, de TABLA 2. PRECIPITACION POR EFECTO DEL pH Y
forma que el interior hidrofóbico interacciona con el SOLVENTES
medio acuoso y se produce la agregación y precipitación
de la proteína desnaturalizada. (Zumbahl, S. 2012) Tubo 1 2 3 4
Clara de 3.0 3.0 3.0 3.0
Por último, la constante dieléctrica: para que un soluto huevo filtrada
se disuelva es necesario que el segundo disgregue y diluida 1:3
moléculas del primero y facilite la solvatación aquí (ml)
depende de la constante dieléctrica de cada uno. HCl 0.1 N(ml) 1.0 - - -
NaOH 0.1N - 1.0 - -
Objetivos (ml)
Regulador de - - 1.0 -
 Observar las consecuencias de cambiar los acetatos 0.1
factores fisicoquímicos en la solubilidad de las M, pH 4.7 (ml)
proteínas. Agua - - - 1.0
 Atender al cambio de coloración en cada Observaciónes Insoluble Soluble Insoluble Insoluble
experimento, comprobando su comportamiento
ante cada cambio. Etanol 96° (ml) 3.0 3.0 3.0 3.0
 Establecer el punto isoeléctrico de la insulina,
revisando sus características en cuanto a la Observaciones Insoluble Soluble Insoluble Insoluble
solubilidad a distintos valores de pH.
 IMAGEN 2. RESULTADOS PRECIPITACION POR
EFECTO DEL pH Y SOLVENTES

IMAGEN 4. DETERMINACIÓN DEL PUNTO

TABLA 3. PRECIPITACION POR METALES PESADOS ISOELÉCTRICO DE LA INSULINA

Tubo # 1 2 3 4 5
Clara 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
de
huevo
filtrada
y diluida
1:3 (ml)
Cloruro 0.25 - - - -
mercúri
co 5%
(ml)
Nitrato - 0.25 - - -
de plata
2% (ml)
Acetato - - 0.25 - - Discusión
de
plomo Para la parte de salting out se observa que después de
5% (ml) realizar la centrifugación y los distintos lavados con
Cloruro - - - 0.25 - sulfato de amonio, aun es posible observar la presencia
de de proteínas en los sobrenadantes por medio de la
sodio reacción de Biuret, dicha reacción es positiva al
5% (ml)
observar un color violeta y se observó este color
Agua - - - - 0.25
característico en todas las pruebas que se hicieron a la
(ml)
muestra.
Observ Prec Prec Prec No No
aciones ipito ipito ipito Prec Prec Para el segundo experimento que fue el de precipitación
ipito ipito por medio del pH y solventes, se observa que las
proteínas contenidas en la muestra para la primera parte
IMAGEN 3. RESULTADOS PRECIPITACIÓN POR solo el tubo que contenía regulador de acetatos no se
METALES PESADOS observaba precipitación ya que es muy probable que el
punto isoeléctrico de las proteínas que conformaban la
muestra tendrían un punto isoeléctrico muy diferente al
pH en el que tiene efecto la solución reguladora.
Posteriormente al agregar etanol se formaron con mayor
visibilidad los precipitados de los demás tubos a
excepción del tubo con solución reguladora, lo que
implica que las proteínas son solubles en líquidos
polares.

En el siguiente experimento que fue el de precipitación

por metales pesados los tubos en los que no precipito la
nuestra fue el tubo con cloruro de sodio y agua ya que al
no ser metales fuertemente densos no precipitaron a las
proteínas de la muestra.

Por último, para la determinación del punto isoeléctrico

de la insulina debemos saber que el punto isoeléctrico
de la insulina es de 5.4 y se observa que en el
laboratorio el punto isoeléctrico se encontraría entre un
pH de 3 a 4.

Conclusiones
 La muestra analizada en su conformación tiene
una mayor cantidad de proteínas solubles en
soluciones polares
 Salting out es un método de separación eficiente
y que no es destructivo
 Las soluciones reguladoras amortiguan los
cambios de pH del medio haciendo que las
proteínas de la muestra no precipiten.

Referencias
Lehninger, N. 2019. Principios de bioquímica. 7° ed.
España, Omega. ISBN 978-842-8216-67-8.
1304 pp

Treijon, J.P. y Garrido, E. 2009. Fundamentos de

bioquímica estructural. 2° ed. España: Madrid.
Tébot.

Zumdahl, S.y Decoste, D. 2012. Chemical principles.

Estado Unidos de Ámerica, Cegage Leaning.