Instituto Politecnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biologicas

Departamento de bioquimica
Laboratorio de Bioquimica general

Cinetica Enzimatica : Efecto de la concentración de la encima y el efecto del pH en la velocidad de la

reacción.

Informe. Seccion: 3. Grupo: 3FV1.

Alumnos:
Padilla Navarrete Claudia Alitzel
Santana Reyna Daniel

Introducción. Describir el efecto del pH en la cinética

enzimática de la invertasa
La mayoría de los enzimas son muy sensibles
Determinar el pH óptimo de la invertasa
a los cambios de pH. Desviaciones de pocas
décimas por encima o por debajo del pH Resultados.
óptimo pueden afectar drásticamente su
actividad. La velocidad puede determinarse Absorbanci AR
a (nm) (umoles) Vo (UI) B Pendiente
bien midiendo la aparición de los productos o
la desaparición de los reactivos. ... Para 0.064 1 0.1 0.089 0.0921

estudiar la cinética enzimática se mide el 0.189 2 0.2 0.089 0.0921

efecto de la concentración inicial de sustrato 0.359 4 0.4 0.089 0.0921
sobre la velocidad inicial de la reacción,
0.76 8 0.8 0.089 0.0921
manteniendo la cantidad de enzima constante.
0.885 10 1 0.089 0.0921
El cambio de pH también provoca que se
Tabla 1. Valores de la cuerva tipo azucares.
modifique la estructura terciaria de la enzima,
lo que tiene como resultado la perdida de la # Tubo [E] ug/2mL [AR] umol/2mL Vo(UI)
actividad biológica de la enzima. Un cambio 1 0.0000138 0.715 0.143
brusco en el pH de la solución en donde se 2 0.00002775 0.98 0.196
encuentra la enzima, la enzima se 3 0.00004165 1.85 0.37
desnaturaliza; por lo tanto pierde su 4 0.0000555 2.71 0.542
capacidad de catálisis. 5 0.000069 3.55 0.71

Objetivos. Tabla 2. Efecto de la concentración de la enzima en la

velocidad de reacción enzimática

Analizar la variación de enzima en la

cinética enzimática de la invertasa

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Grafica. 1. Efecto de la concentración del sustrato entre la

velocidad de reacción enzimática
Discusión.
La adición del ácido 3,5-dinitro salicílico
(acido 3, 5-DNS ) tiene un papel muy
importante dentro del desarrollo de esta
0.8 Vo/ [E]
práctica, a continuación se describen los usos
0.7
0.6 f(x) = 10706.1605340411 x − 0.052533908584069 de 3, 5-DNS: a) permite coloración de la
R² = 0.97436566520124
Vo (UI)

0.5 reacción para poder cuantificar la presencia

0.4
0.3 de azucares reductores, b) proporciona un
0.2 medio alcalino que permite la isomerización
0.1
de la fructosa a glucosa y c) detiene la
0
0.0000 0.0001 0.0001 reacción enzimática. El ácido 3,5 DNS
[E] ug/2mL
presenta un color amarillo en su estado
pH nm [AR] Vo (UI) oxidado, al tener contacto con un azúcar
Vo/[pH]
0.7 micromol/2ml reductor, desata una reacción de óxido-
0.6
3 0.112 0.6292 0.1258 reducción en la cual se forma un compuesto
0.5
4 0.332 1.8652 0.3730 con coloracion diferente a la inicial
0.4
Vo (UI)

0.3 4.5 0.426 2.3933 0.4787 (formación d e una mezcla de 3-nitro, 5-

0.2 5 0.577 3.2416 0.6483 amino salicilato y de ácido 3-amino, 5-nitro
0.1
6.5 0.307 1.7247 0.3449 salicilato). El ácido 3, 5-DNS se reduce
0
3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 formando un compuesto con coloración
7.5 0.193 1.0843 0.2169
pH rojiza, la glucosa se oxida formando el
Tabla 3. Efecto del pH en la velocidad de reacción a distinto
gluconato, en la ilustración 1 se muestra la
pH
reacción general de óxido-reduccion. La
aromaticidad del compuesto formado es la
que permite la lectura y cuantificación
Grafica. . Efecto del pH entre la velocidad de reacción mediante el espectrofotómetro a 540 nm.
enzimática
(Carey, 2006).

El cambio de pH también provoca que se

modifique la estructura terciaria de la enzima,

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lo que tiene como resultado la perdida de la  La concentración de enzima es

actividad biológica de la enzima. Un cambio directamente proporcional a la actividad
brusco en el pH de la solución en donde se enzimática, siempre y cuando la
encuentra la enzima, la enzima se concentración de sustrato sea constante y
desnaturaliza; por lo tanto pierde su no se agote
capacidad de catálisis. Las modificaciones del  Poca concentración de enzima puede
pH pueden hacer que la enzima se acerque a hidrolizar gran cantidad de sacarosa.
su punto isoeléctrico, observando la
precipitación de esta. Al haber cierto Referencias.
porcentaje de enzima precipitada, la actividad
 Caray, F.A. Química orgánica. 6a
enzimática va a ser menor. Este
Edición. McGraw Hill interamericana.
comportamiento se observó en los tubos 1 y 2
México 2006. Página consultada 1027.
con pH de 3 y 4 respectivamente, por lo que
 Fonseca, S.E. Revista Especializada en
podemos afirmar que el punto isoeléctrico de
Ciencias Quimico-Biologicas. Métodos
la invertasa se encuentr a alrededor de esos
no enzimáticos de isomerización de
valores de pH; para contrarrestar este efecto,
aldosas a cetosas. 2009
se le agregó NaOH después del desarrollo de
 McKee, J.R. bioquímica. La base
color. Otra consecuencia del cambio del pH
molecular de la vida. 3ª Edición.
es la modificación del sustrato, en esta
McGraw-Hill. España, 2003. Paginas
experimentación este no fue el caso ya que la
consultadas 167-173.
sacarosa no puede ser ionizada tan fácilmente
(McKee, 2003).  Methods in enzimology, 1975
 Brown, T.L. química. La ciencia central.
Conclusiones. Pearson educación. México, 2004.
Paginas consultadas 258
 El pH óptimo de la invertasa es de 6.5
 El pH puede modificar la estructura
terciaria de la invertasa, haciendo que
pierda actividad enzimática
 El pH modifica el estado de ionización
del sitio activo de la sacarosa

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