DETERMINACION DE PROTEINA BRUTA POR EL METODO DE BIURET.

Leidy Viviana Garaviz, Yennifer Miranda Ordoñez, Aylen Yoleth Rodríguez Rodríguez,
Carolina Cortes Trujillo
Estudiante de Ingeniería de Alimentos; Faculta Ingeniería; Universidad de la Amazonia
Florencia-Caquetá
Resumen

Se realizó la determinación de proteína bruta en Huevo, y queso por el método de Biuret, a partir de
una curva de calibración. Para esta se prepararon patrones de albumina a partir de una solución
patrón de concentración de Albumina de 5mg/mL. El contenido de proteína determinado para la
muestra analizada presenta un promedio de 14,8mg/L un valor cercano al reportado en literatura. Los
resultados presentan una buena correlación, por lo que los datos son confiables dentro de las
condiciones de laboratorio.

Palabras Claves. Albumina, Método de Biuret, Proteína bruta

INTRODUCCIÓN. proteínas para absorber luz en el UV, b) para la

formación de derivados químicos, o
Las proteínas ocupan un lugar de máxima
c) la capacidad que tienen las proteínas de unir
importancia entre las moléculas constituyentes
ciertos colorantes [2].
de los seres vivos (biomoléculas).
Prácticamente todos los procesos biológicos Los principales métodos empleados para la
dependen de la presencia o la actividad de este determinación de proteínas totales son los
tipo de moléculas [1]. siguientes:

Determinar la concentración de proteínas en MÉTODO DEL BIURET

una muestra biológica es una técnica de rutina
básica cuando se aborda un esquema de En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el
purificación de una proteína concreta, cuando enlace peptídico de las proteínas dando un color
se quiere conocer la actividad específica de una purpureo que se cuantifica
preparación enzimática, para el diagnóstico de espectrofotométricamente (540nm). Como
enfermedades, así como para muchos otros solución estándar se utiliza una solución de
propósitos. Existen diferentes métodos para la albumina.
cuantificación de proteínas. Muchos de estos
métodos se Proteína + Cu+2 Complejo Cu-
basan en: a) la propiedad intrínseca de las Proteína (púrpura)

1
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la La curva de calibrado es un método de
presencia de proteínas, péptidos cortos y otros química analítica empleado para medir la
compuestos con dos o más enlaces peptídicos concentración de una sustancia en una muestra
en sustancias de composición desconocida. por comparación con una serie de elementos de
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y concentración conocida. Se basa en la
sulfato cúprico (CuSO4), junto existencia de una relación en principio lineal

con tartrato de sodio y entre un carácter medible (por ejemplo la

potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color absorbancia en los enfoques de

azul, cambia a violeta en presencia de espectrofotometría) y la variable a determinar

proteínas, y vira a rosa cuando se combina con (la concentración). Para ello, se efectúan

poli péptidos de cadena corta. El Hidróxido de diluciones de unas muestras de contenido

Potasio no participa en la reacción, pero conocido y se produce su lectura y el

proporciona el medio alcalino necesario para consiguiente establecimiento de una

que tenga lugar [3]. función matemática que relacione ambas;

después, se lee el mismo carácter en la muestra
Las proteínas se clasifican según la
problema y, mediante la sustitución de la
solubilidad de la siguiente forma:
variable independiente de esa función, se
obtiene la concentración de esta. Se dice pues
Albuminas: solubles en agua y en solución
que la respuesta de la muestra puede
salina
cuantificarse y, empleando la curva de
Globulinas: poco solubles en agua,
calibración, se puede interpolar el dato de la
solubles en solución salina
muestra problema hasta encontrar la
Prolaminas: solubles en etanol 60-70%;
concentración del analito.
insolubles en etanol absoluto y agua Glutelinas:
insolubles en agua y soluciones salinas, METODOLOGÍA:
solubles en ácidos y bases
PROCEDIMIENTO PARA LA CURVA DE
diluidos.
CALIBRACIÓN.
Escleroproteinas: insolubles en agua y
soluciones salinas. Se preparó una solución patrón de albúmina de
5mg/mL. Se realizó las 7

2
mezclas indicadas a continuación en la tabla 1. adición 10 ml de NaCl al 5%, se agitó durante
10 minutos, y a continuación se centrifugó a
TABLA 1. Volúmenes adicionados de cada
3500 rpm durante 5 minutos. El sobrenadante
sustancia para obtener las Soluciones de trabajo
se transfirió a un matraz aforó de 2,5 ml y se
para la curva de calibración. El volumen final
realizó la determinación espectrofotométrica
para cada tubo fue de 6 mL
como se indicó en la tabla 1, tubos 6 y 7.

RESULTADOS:
Muestr B1 1 2 3 4 5 6 7
a/tubo TABLA 2. ABSORBANCIA OBTENIDA
Patrón 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. 0.0 PARA CADA CONCENTRACIÓN.
de
0 2 4 6 8 0 0
albúmi [Albúmina] mg/mL Absorbancia
na
Muestr 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1.0 0 0
a 0 0 0 0 0 0 5 0,166 0,066
Agua 2. 1. 1. 1. 1. 1. 1. 1.0 0,333 0,121
destila
0 8 6 4 2 0 5 0,5 0,161
da
Biuret 4. 4. 4. 4. 4. 4. 4. 4.0 0,83 0,261
0 0 0 0 0 0 0

GRAFICA 1. CURVA DE CALIBRACIÓN

B1: Blanco 0.3

y = 0.3024x + 0.0097 R² = 0.9933
0.25
0.2
Absorbanci

Se mezcló la muestra y se dejó en reposo

0.15
durante 20 minutos a temperatura ambiente. Por 0.1
último se leyó la absorbancia en un 0.05

espectrofotómetro Génesis 5 a una longitud de 0

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
onda de 310 y 560 nm. Concentracion Albúmina (mg/L)

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
Se pesaron 20 gramos de clara de huevo, y 20
gr de queso, posteriormente se La determinación de la proteína soluble, a
través del método de Biuret es uno de los

3
procesos más utilizados para la determinación CONCLUSIÓN.
de proteínas, dado que se hace necesario
El método Biuret permitió determinar la
extraerlas de la matriz en que se encuentran,
concentración de proteína soluble en la muestra
para obtener un determinado componente deben
de huevo y queso con un valor de 13,7 mg/ que
realizarse distintas operaciones, tales
resulta al interpolar los valores de absorbancia
como extracción. Así se aprovecha el gran
en una curva patrón originada a partir de
tamaño de sus moléculas, que forman con el
concentración de proteína conocida.
agua soluciones coloidales, una vez que se tiene
estas soluciones estas se pueden hacer REFERENCIAS.
precipitar con la formación de coágulos al ser
1. Berg, J.M.; John, L.T.; Lubert, S. (2008)
calentadas a temperaturas superiores a los 70ºC
Bioquímica. 2ª ed. Reverté, Barcelona.
o al ser tratadas con soluciones, ácidos, alcohol,
2. Segal, C. (2005) Manual de prácticas
enzimas, o soluciones salinas, como la que se
de biología molecular de la célula.
utilizó en el desarrollo de la práctica, solución
Editorial publidisia.
salina de NaCl del 5%. Los procesos de
3. Cambell, P.N.; Smith, A.d.; Peters,
coagulación que causan los métodos indicados,
T.J. (2006) Bioquímica ilustrada:
son procesos irreversibles, esto es debido a que
bioquímica y biología molecular en
desnaturalización, desordenan su estructura
la era posgenómica. Masson, España.
terciaria y cuaternaria.
4. Harris, D.C. (2003). Quantitative
La curva de calibración obtenida a partir de los chemical analysis. San Francisco:
patrones de albumina, generaron una buena W.H. Freeman.
linealidad (R2=0,9933), lo que indica la 5. Análisis químico cuantitativo; Daniel
proporcionalidad de los valores. L a C. Harris
concentración interpolada a partir de la curva 6. Métodos para la cuantificación de
elaborada, permitió determinar una proteínas. Fernandez Emilio, Galvan
concentración de 13,7 mg/L, así una harina Aurora.
normal tiene entre el 5 y el 11%, sin embargo
es un valor considerable, bajo las
condiciones de laboratorio.