Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectoría Académica y de Investigación

Curso: Cromatografía
Código: 401542

Anexo 1 - Guía para el desarrollo Tarea 2 - Principios

Cromatográficos

Nombre del estudiante: Nestor Hugo Perdomo Chaquea

Código: 401542-31 Programa: Ingeniería de Alimentos

Ejercicio 1 – Descripción de las técnicas cromatográficas:

cromatografía Planar y de Columna.

Tabla 1. Ejercicio 1

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Ejercicio 2. Parámetros para el análisis e interpretación de datos de

Cromatografía Planar y de Columna.

Tabla 2. Ejercicio 2

Ítem escogido

Descripción Comparación de los valores de Rf entre una

determinación muestra analizada y soluciones patrón: (1)
Valor Rf solución 2 %w/v; (2) una muestra
seleccionada; (3) solución patrón que contiene
glucosa y fructosa 100 ppm de cada una
d R distanciarecorrida por el soluto
Rf =
d fm distanciarecorrida por la fase movil (solvente )

distancia recorrida por la fase movil ( solvente )

=1,0+1,2=2,2=15−2,20=12,8
 ?
Rf =
12,8
0,60∗12,8=7,368 distancia recorrida por soluto

Explicación El análisis del Factor de polaridad de la

factores Polaridad, Frutosilnistosa se puede analizar apartir de la
Retención y información descrita en la figura 2 donde se
Dirección puede concluir que la Frutosilnistosa es la
corrimiento especie que posee una polaridad mayor
comparada con las otras especies químicas, la
polaridad del compuesto, determinada por el
número y naturaleza de los grupos funcionales
presentes. Los solutos más polares quedarán
más retenidos puesto que se adsorben más
firmemente a los centros activos de la fase
estacionaria, mientras que los no polares se
eluirán con mayor facilidad.
Se puede analizar apartir de la información
descrita en la figura 2 donde se puede concluir
que la Frutosilnistosa es la especie que posee
menor factor de retención debido a que la
distancia recorrida por el compuesto de
Frutosilnistosa es menor con respecto a las
otras especies. La relación entre las distancias
recorridas por el soluto y por el eluyente desde
el origen de la placa se conoce como Rf, y
tiene un valor constante para cada compuesto
en unas condiciones cromatográficas
determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño
de la cubeta, temperatura, etc.). Debido a que
es prácticamente imposible reproducir
exactamente las condiciones experimentales,
la comparación de una muestra con otra debe
realizarse eluyendo ambas en la misma placa.
El análisis con respecto a la dirección de
corrimiento será en orde de elución el cual se
incrementa al aumentar la polaridad de la fase
móvil o eluyente. El eluyente puede ser un
disolvente único o dos miscibles de distinta
polaridad.

Incidencia de Si aumenta la polaridad del eluyente, el valor

cambios de de Rf disminuiría debido a que mayor polaridad
Polaridad del el desplazamiento del compuesto será menor,
eluyente y por lo tanto el valor de Rf disminuirá.
La polaridad del eluyente afecta las
velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la
columna. Los disolventes polares compiten
más eficientemente con las moléculas polares
de una mezcla por los lugares polares del
adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar
desplazará las moléculas, incluyendo las más
polares, rápidamente a través de la columna.
Si el disolvente es muy polar la elución será
muy rápida y generalmente habrá poca
separación de los componentes de la mezcla.
Si por el contrario el disolvente es muy apolar,
no eluirán los compuestos de la columna. Por
lo tanto, la elección del eluyente es crucial
para el éxito de la cromatografía 

Descripción de En principio, los componentes se diferenciarán

componentes de en solubilidad y en la fuerza de su adsorción,
sistema de forma que unos componentes se
cromatográficos desplazarán más que otros. Cuando el eluyente
según ensayo llega a la parte superior de la placa, esta se
propuesto saca de la cubeta, se seca, y los componente
Separados de la mezcla se visualizan.

Sistema de La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica

Revelado utilizada para separar los componentes de una
mezcla. Consiste en una fase estacionaria no
polar (columna) y una fase móvil. La fase
estacionaria es sílica que se ha tratado con
RMe2SiCl . La fase móvil actúa de portador de
la muestra. La muestra en solución es
inyectada en la fase móvil. Los componentes
de la solución emigran de acuerdo a las
interacciones no-covalentes de los compuestos
con la columna. Estas interacciones químicas,
determinan la separación de los contenidos en
la muestra. La utilización de los diferentes
detectores dependerá de la naturaleza de los
compuestos a determinar.
Descripción
Muestra analizada
(traza 2)

Referentes de 1. AMBER, V. Digitally Enhanced Thin-Layer

información Chromatography. Massachusetts Institute of
(norma APA 7.0) Technology, Cambridge, J. CHEM. Educ, 2007,
84(5):842.

2. CHEWCHINDA, S.; RUANGWISES, N. Y

GRITSANAPAN, G. Comparative Analysis of
Rhein Content in Cassia fistula Pod Extract by
Thin-Layer Chromatographic-Densitometric
and TLC Image Methods. JPC - Journal of
Planar Chromatography - Modern TLC, 2014,
27(1): p. 29-32.

3.DOMÍNGUEZ, A.; JARNE, C.; ET. AL. A

Hyphenated Technique based on High-
Performance Thin Layer Chromatography for
Determining Neutral Sphingolipids: A Proof of
Concept. Chromatography. 2015, 2, p. 167-
187.

Gismera García, M. J. & María del Carmen

Quintana Mani. (2014). Introducción a la
cromatografía líquida de alta resolución. (pp.
23 - 69) Editorial Universidad Autónoma de
Madrid. https://elibro-
net.bibliotecavirtual.unad.edu.co/es/ereader/u
nad/53955?page=24

Ejercicio 3: Aplicaciones de la Cromatografía Planar y de columna

en la Industria de Alimentos.

Tabla 3. Ejercicio 3

Análisis disciplinar El constante incremento en las aplicaciones

mediante ensayo de proteínas en diversos campos como la
expositivo (mín.350 medicina, el medio ambiente y la industria
palabras – Máx. 500 alimentaria; va generado un interés especial
palabras) en el desarrollo de procesos para el análisis y
purificación de proteínas. La cromatografía de
líquidos ha sido ampliamente explotada para
llevar a cabo dichos análisis debido a su
versatilidad. La resolución de mezclas de
proteínas por cromatografía de líquidos se
basa en que bajo un conjunto de condiciones
específicas, los solutos disueltos en una fase
móvil interactúan con una fase estacionaria.
Dependiendo de la naturaleza química de la
fase y del tipo de estas interacciones, existen
diferentes tipos de técnicas cromatográficas.
Los métodos cromatográficos más utilizadas
en el análisis de proteínas son: exclusión,
intercambio tónico, interacción hidrofóbica.
Las técnicas cromatográficas han sido
utilizadas en el análisis y purificación de
proteínas; sin embargo, se han realizado
diversos estudios en donde son usadas para
detectar cambios conformacionales en las
proteínas, ya sea por el proceso
cromatográfico en sí o por la naturaleza de la
muestra. Debido a esto también es posible
determinar la estabilidad de una proteína. Por
otro lado, como consecuencia de la expresión
de proteínas como cuerpos de inclusión en
microorganismos recombinantes, el
relegamiento de proteínas a través de
técnicas cromatográficas ha cobrado
relevancia en la última década, y actualmente
se están desarrollando nuevos procesos con
este propósito. Son claras sus ventajas en la
purificación de proteínas, particularmente las
de interés farmacéutico. La cromatografía ha
sido utilizada con éxito para determinar
cambios conformacionales y estabilidad en
proteínas, que además pueden ser
correlacionados con los métodos
tradicionales; como fluorescencia. Una de las
aplicaciones que ha cobrado relevancia en la
última década es el relegamiento de
proteínas, en donde se ha demostrado que el
proceso puede ser mucho más efectivo que
cuando se utilizan otros métodos (e.g. diálisis
y dilución). Además, es posible realizar el
replegamiento y el proceso de purificación de
manera simultánea. Sin embargo, es
importante considerar que la versatilidad de
las técnicas cromatográficas genera un
 sinnúmero de condiciones experimentales,
que pueden depender de las características
de cada proteína. Es por ello que se identifica
como un área de oportunidad la posibilidad
de establecer procesos generales para el
análisis de los cambios conformacionales y
estabilidad de proteínas.

Referentes de 4. FAQERYAR, N.; MORI, Y. High performance

información (norma thin-layer chromatography and image
APA 7.0) processing analysis of some essential oils
from Perovskia atriplicifolia leaves extracted
by microwave assisted heating. Natural
Science Report, Ochanomizu University,
2016, 67: 1, p. 1-11.

5.GONZALEZ R.C. Y WOODS R.E. Digital

Image Processing, 3rd Edition, Harlow:
Pearson Prentice Hall, 2008, p. 976.

Zumbado Fernández, H. (2021). Análisis

instrumental de los alimentos. (pp. 169 –
205; 333 – 359) Editorial Universitaria.
https://elibro-
net.bibliotecavirtual.unad.edu.co/es/ereader/
unad/172377?page=351