Anexo 2 - Guía para el desarrollo de la tarea 3.

Este anexo tiene la finalidad de brindar una guía para la solución de la Tarea
3.

Nombre del estudiante: Erika Alejandra Hernandez Rodriguez

Código: 1055314002

Programa: Ingeniería de Alimentos

Ejercicio 1 – Características, Propiedades y definiciones de la Cromatografía de Gases

y Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC).

Tabla 1. Ejercicio 1.
Enlace video

https://www.youtube.com/watch?v=WoR2TWelIOc

Ejercicio 2. Funcionamiento de las técnicas cromatográficas y planteamiento de

ejercicios modelos para el análisis de datos e interpretación de resultados.

Diagrama, partes y
funciones del
Cromatógrafo de Gases

Los componentes fundamentales de un cromatógrafo de gases son :

• Fuente de gas
• Sistema de inyección
• Horno y columna cromatográfica
• Sistema de detección
• Sistema de registro
Esquema cromatógrafo gases agilent 7890A
 En la cromatografía de gases se presentan tres pasos principales en la separación e
identificación de los componentes de una mezcla mediante GC, estos son:
• Inyectar : una muestra en el GC (se realiza en el inyector).
• Separar: la muestra en componentes individuales ( se realiza dentro de la
columna del horno).
• Detectar: que compuestos había en la muestra ( se realiza en el detector).
La GC se utiliza para separar compuestos polares y no polares que sean volátiles. Las
áreas de aplicación son muy diversas y abarcan la gran mayoría de actividades en
que interviene la química , y se emplean por ejemplo en:

• Análisis de alimentos y aromas.

• Análisis medioambiental (HAP, pesticidas, herbicidas, benceno, GEI, etc.).
• Análisis químicos industriales (alcoholes, hidrocarburos halogenados,
disolventes aromáticos, fenoles, etc.).
• Análisis del sector del petróleo (gasolina, compuestos de azufre volátiles, gases
de refinería, etc.).
• Análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como sangre , saliva y orina.
• Control calidad productos químicos y fármacos.

Si un compuesto no es volátil (como sucede con las proteínas, las sales y los
polímeros), en ese caso la cromatografía de líquidos será una técnica de separación
más adecuada.

Diagrama, partes y
funciones del
Cromatógrafo HPLC

Fuente: adaptado de Giri (2015).

Los componentes fundamentales de un cromatógrafo hplc son:

• Reservorio fase móvil : mezcla de sustancias polares y no polares que varían
en concentración dependiendo de la muestra a analizar.
• Bomba : succionar la fase móvil del reservorio para hacerla fluir por todo el
sistema a una velocidad precisa y constante.
• Inyector : puede ser manual o automático, el sistema de inyección automático
permite que la muestra sea introducida a la fase móvil presurizada de manera
exacta y precisa, por lo que actualmente los inyectores manuales son
raramente empleados (Snyder et ál., 2010).
• Horno: regular y mantener la temperatura dentro de la columna.
• Detector: ubicado al final de la columna , es el encargado de captar los
cambios en los efluentes de la columna y convertirlos en señales eléctricas.
 Esquema cromatógrafo hplc agilent infinity 1260

La cromatografía líquida de alta presión, ahora conocida como cromatografía líquida de

alto rendimiento (HPLC), es una técnica cromatográfica utilizada para identificar,
cuantificar, separar y purificar los distintos compuestos presentes en una mezcla. La
HPLC se puede utilizar como técnica preparativa o como técnica analítica, permitiendo
la purificación, identificación y cuantificación del analito deseado.

Aplicaciones:
• Separación y purificación de metabolitos
• Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de
muestras de orina
• Purificación y separación de enantiómeros
• Purificación de compuestos naturales
• Purificación y caracterización de enzimas y proteínas
• Análisis de plaguicidas (trazas).
• Control de calidad en bioquímica , química analítica , productos farmacéuticos
, ciencias forenses.
• Investigación alimentaria.
Resolución y discusión del Teniendo de cuenta que el consumo de café a nivel mundial ha generado aumento en
ejercicio n (ejercicio CG) su producción y comercialización, un grupo de estudiantes de Ingeniería de Alimentos
ha decidido realizar un estudio de evaluación sensorial, teniendo en cuenta que las
características del grano dependen de un gran número de componentes químicos que
le dan propiedades de olor, aroma, gusto, sabor y textura. De acuerdo con lo anterior,
se realizó un estudio para determinar los componentes del aroma de cinco muestras de
café provenientes de Colombia, Vietnam, Turquía, Brasil y Nepal, las cuales fueron
aisladas mediante microextracción en fase sólida y analizadas por cromatografía de
gases acoplada a espectrometría de masas (GC/MS), equipado con una columna de 60
m de longitud. En Tabla 1, se registran los compuestos con mayores valores de
concentración para cada muestra, así como los valores de tiempo muerto-min (tM),
tiempo de retención-min (tR), área de pico (altura) y el ancho de banda (W). se plantean
los siguientes valores.
Compuesto concentración TM (min) TR (min) W
en ppm
3,4-dimethylthiophene 20 1,24 13,80 0,32

menhir propyl disulfide 65 1,04 14,80 0,21

methyl 1-propenyl 421 1,28 15,15 0,24

disulfide

dimethyl trisulfide 54 1,72 16,40 0,13

Determinar:
• Tiempo de Retención corregido.

Compuesto tR´= tR – Tm
3,4-dimethylthiophene tR´= 13,80-1,24 = 12.56

menhir propyl disulfide tR´=14,80-1,04 = 13.76

methyl 1-propenyl disulfide tR´=15,15-1,28 = 13.87

dimethyl trisulfide tR´=16,40-1,72 = 14.68

• Número de platos teóricos.

Compuesto N= 16(Tr/W)2 o N = (tR)2/(w/4)2

3,4-dimethylthiophene N= 16(13.80/0.32)2 = 29.756

Tiempo de retención corregido
N= 16(12.56/0.32)2= 24.649

menhir propyl disulfide N= 16(14.80/0.21)2 = 79.470

Tiempo de retención corregido
N= 16(13.76/0.21)2= 68.693

methyl 1-propenyl disulfide N= 16(15.15/0.24)2 = 63.756

Tiempo de retención corregido
N= 16(13.87/0.24)2= 53.438

dimethyl trisulfide N= 16(16.40/0.13)2 = 254.636

Tiempo de retención corregido
N= 16(14.68/0.13)2= 204.025
• Altura de Plato.
Compuesto
3,4-dimethylthiophene
menhir propyl disulfide
methyl 1-propenyl disulfide
dimethyl trisulfide
• Velocidad Lineal de la fase.
Compuesto
3,4-dimethylthiophene
menhir propyl disulfide
methyl 1-propenyl disulfide
dimethyl trisulfide
• Coeficiente de distribución.
Compuesto
3,4-dimethylthiophene
menhir propyl disulfide
methyl 1-propenyl disulfide
dimethyl trisulfide
H = L/N
N = (tR)2/(w/4)2
L es la longitud de la columna
H = 60 m / 29.756 = 2.01
Tiempo retención corregido
H= 60 m/ 24.649 = 2.43
H = 60 m /79.470 = 0.75
Tiempo retención corregido
H= 60 m/ 68.693 = 0.87
H = 60 m / 63.756 = 0.94
Tiempo retención corregido
H= 60 m/ 53.438 =1.12
H = 60 m / 254.636 = 0.23
Tiempo retención corregido
H= 60 m/ 204.025 =0.29
u= L/tM
u=60/1.24 = 48.38
u=60/1.04 = 57.69
u=60/1.28 = 46.87
u= 60/1.72 = 34.88
factor de retención(k)=tc/tm
K=CS/CM
Factor de retención (k) = tC/ tM
k = 12.56/1.24= 10.12
k' =K/β. K= k'* β
R/2 espesor de la F.E.
Se requiere el diámetro de la columna y
espesor de la fase estacionaria para poder
determinar el coeficiente de distribución.
k=13.76/1.04= 13.23
k=13.87/1.28= 10.83
k=14.68/1.72= 8.53
Resolución y discusión del En un laboratorio de desarrollo de nuevos productos alimenticios, se solicita determinar
ejercicio (ejercicio HPLC) la concentración de un analito en un extracto de residuos de mora que se utiliza en la
saborización de alimentos. El análisis realizado implicó mediante la preparación e
inyección en un cromatógrafo de cuatro disoluciones patrones cuya concentración de
patrón interno (Pi) se indican en la tabla expresado en unidades mg/L. Realizado el
ensayo se obtuvieron los siguientes resultados hipotéticos. Determine la concentración
de la muestra problema (expresado en unidades mg/L):

N°Patron concentració concentració área de pico área de pico

n en mg/L n en mg/L del analito de EI
analito patrón
1 300 325 810.9 908.3
2 400 325 958.9 887.6
3 500 325 1160.8 900.3
4 600 325 1050.6 896.7
Muestra ¿? 325 1275.7 923.7
problema

Primero hallaremos la concentración analito / concentración del patrón interno

y el área de analito / área del patrón interno ;para así graficar su respectiva
curva.

conc analito/ conc PI mg/L área analito / área PI

0.92 0.89
1.23 1.08
1.54 1.29
1.85 1.17
2.19 1.38

2,00

1,80
y = 0,3398x + 0,638
1,60 R² = 0,6506
area analito/area PI

1,40

1,20

1,00

0,80

0,60

0,40
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00
Concentracion analito/Concentracion PI

Gráfico 1. Curva calibración a partir de los datos obtenidos.

Para calcular la concentración en el extracto de la muestra se seguirán los

siguientes pasos:

En la ecuación de la curva de calibrado se sustituye “y” por el área de analito/área de

p.i. obtenida en el cromatograma de la muestra (1.275.7/923.7 = 1,38) y se despeja
“x” que es la concentración de analito/concentración de p.i. en el extracto de la
muestra: C analito/C p.i. =x=(X+b)/m
x = (1,38-0,638)/0.3398 = 2.19
 La concentración de analito se obtiene multiplicando el valor calculado para “x” (5.94) por la
concentración de p.i. (325mg/L).

concentración de analito en el extracto de la muestra = 2.19*325mg/L = 711

mg/L

Bibliografía
Hernández, D. S. (20 de 04 de 2018). PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO
PARA LA SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE MEZCLAS . Obtenido de PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA CROMATOGRAFÍA
LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO PARA LA SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE MEZCLAS :
http://repository.uamerica.edu.co/bitstream/20.500.11839/7731/1/6131978-2018-1-IQ.pdf
SENA, S. ,. (01 de 10 de 2016). GUÍA SOBRE PRINCIPIOS BÁSICOS DE CROMATOGRAFÍA Y SUS APLICACIONES. Obtenido
de GUÍA SOBRE PRINCIPIOS BÁSICOS DE CROMATOGRAFÍA Y SUS APLICACIONES:
https://repositorio.sena.edu.co/bitstream/handle/11404/4694/guia_cromatograf%EDa.pdf?sequence=1
TECHNOLOGIES, A. (01 de 01 de 2010). Agilent 7890A Cromatógrafo de gases. Obtenido de Agilent 7890A
Cromatógrafo de gases: https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3430-95011.pdf
TECHNOLOGIES, A. (01 de 01 de 2012). Inyector automático de alto rendimiento Agilent 1260 Infinity. Obtenido de
Inyector automático de alto rendimiento Agilent 1260 Infinity:
https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G1367-95013_HiP_ALS_USR_ES.pdf

Ejercicio 3: Aplicaciones de la Cromatografía de Gases y Cromatografía Líquida de

Alta Eficiencia (HPLC).

Tema general de Revisión: Aplicación de la cromatografía de gases

Palabras clave en la GC-MS, Organoclorados, Pesticidas.
revisión:
Titulo Artículo 1 (CG): EVALUACIÓN DEL GRADO DE CONTAMINACIÓN POR
PESTICIDAS ORGANOCLORADOS DEL RÍO OTÚN, MEDIANTE
GC-MS.
Autores Usma Ríos, Jessica Maritza; Villegas Zuluaga, Carlos Mauricio;
Arrubla Vélez, Juan Pablo
Año 2008
DOI / enlace al artículo https://www.redalyc.org/pdf/849/84920454043.pdf
Técnicas cromatográficas Extracción L-L continuo
abordas en el artículo Extracción L-L por etapas
Breve descripción de La extracción líquido-líquido es una operación básica, de
aplicación de las técnicas naturaleza física, cuyo fin es la separación de dos o más
cromatográficas. componentes de una mezcla líquida mediante la adición de un
disolvente en el cual uno o más componentes son
preferentemente solubles.
La operación de extracción se puede llevar a cabo de varias
formas
- Operación discontinua en una sola etapa: mezclador-
sedimentador; o en varias etapas, mediante contacto
repetido con el mismo disolvente: varias unidades mezclador
sedimentador.
- Operación continua con contacto intermitente:
columna de platos.
Operación continua con contacto continuo: columna de
relleno.
Resultados relevantes En el análisis de plaguicidas organoclorados en aguas no se
planteados en el artículo. detectó la presencia de ninguno de los 18 pesticidas

Conclusiones generales del
articulo acorde a lo
revisado en la Unidad 1 de
cromatografía de la UNAD
Relevancia de las técnicas
cromatográficas en el
alcance resultados
planteados en el artículo.
Titulo Artículo 2 (CG):
Autores
Año
DOI / enlace al artículo
Técnicas cromatográficas
abordas en el artículo
Breve descripción de
aplicación de las técnicas
cromatográficas.
Resultados relevantes
planteados en el artículo.
Conclusiones generales del
articulo acorde a lo
revisado en la Unidad 1 de
cromatografía de la UNAD
Relevancia de las técnicas
cromatográficas en el
alcance resultados
planteados en el artículo.
Titulo Artículo 3 (HPLC):
Autores
Año
DOI / enlace al artículo
Técnicas cromatográficas
abordas en el artículo
organoclorados en ninguna de las 35 muestras analizadas en
los siete de puntos de muestreo.
Tras la separación de los plaguicidas se procede a realizar su
determinación, para lo cual el acoplamiento de las técnicas
cromatográficas con la espectrometría de masas proporciona
indiscutiblemente una mayor cantidad de información
analítica en muestras cada vez más complejas a nivel de
trazas.
La precisión del método empleado en la determinación de la
presencia de estos plaguicidas.
Cada una de las técnicas empleadas fueron de cuerdo a
técnicas establecidas.
Validación de un método de detección mediante cromatografía
líquida (HPLC-DAD) para la determinación de aloína en
productos alimenticios elaborados a partir de sábila (Aloe
vera)
Ricardo Ulate-Molina, Henry Borbón-Alpízar, José Pablo
Sibaja-Brenes.
2018
https://www.redalyc.org/journal/4759/475960592002/
Este artículo da a conocer el método y las formas como se
puede abordar de manera satisfactoria la separación y/o
análisis de una muestra por medio de la cromatografía líquida.
La cromatografía líquida de alto rendimiento es uno de
métodos más usados actualmente debido a que emplea
técnicas que antes no estaban disponibles, como las
cromatografías de adsorción, partición, exclusión molecular y
afinidad. La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)
es una de las técnicas de cromatografía más utilizadas debido
a su capacidad de separar analitos de distinta naturaleza
presentes en una mezcla.
La mayoría de los productos alimenticios evaluados mostró
una concentración por debajo del valor máximo permitido (10
mg/L); se encontraron valores entre los 0,2 ± 0,1 mg/L y 4,8
± 0,1 mg/L de aloína.
En este artículo emplean una de las técnicas más utilizadas
para separar los componentes de una mezcla, es uno de los
métodos con mayor sensibilidad lo cual permite identificar y
cuantificar la sustancia a detectar. En este caso la aloína es
un glicósido antraquinónico.
La cromatografía Hplc permite la separación de compuestos
de una mezcla mediante las interacciones específicas con la
fase estacionaria permitiendo el paso, identificación y análisis
de los compontes de las sustancias en estudio. Esta técnica se
utiliza la presión, ya que se incrementa la velocidad de la
muestra en columna y se separa los compuestos
presentándose así que el analito que sale de la columna es
detectado generando señal eléctrica y es donde este es
cuantificado.
Determinación por cromatografía Liquida (HPLC) el contenido
de ácido fólico y hierro en una bebida láctea fermentada tipo
yogurt enriquecida a partir de materias primas naturales.
Vega Romero C., Ramón Camargo J
2007
https://www.redalyc.org/pdf/903/90350204.pdf
HPLC en fase reversa, la cromatografía en fase reversa (RPC)
permite separar moléculas en base a su polaridad. El principio
de la cromatografía en fase reversa es semejante al de la
cromatografía en capa fina. Sin embargo, aquí la fase
estacionaria es de partículas de sílica químicamente
modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados o
aromáticos de diferentes tipos. Esto convierte a la fase
 estacionaria en una matriz apolar. Por lo tanto, para este tipo
de cromatografías se emplean mezclas de solventes polares,
tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y
alcoholes alifáticos.
Breve descripción de la fase móvil utilizada fue Acetonitrilo: Buffer Acetato pH 3.5
aplicación de las técnicas en una relación 10:90 hasta 24:76 en 9 minutos, con un flujo
cromatográficas. de 0.5 mL/min.; se utilizó también un detector UV con arreglo
de diodos y se cuantificó el compuesto de interés a 290 nm.
Las extracciones se llevaron a cabo por triplicado para evaluar
la precisión del método. La curva de calibración se hizo
utilizando un patrón de ácido fólico marca MERCK (98%), con
inyección por triplicado de 20 μL. El nivel mínimo de detección
del método cromatográfico fue 100ppb.
Resultados relevantes El ácido fólico presenta un tiempo de retención de 6.104
planteados en el artículo. min, analizado con las condiciones descritas.
Para verificar la reproducibilidad del sistema Cromatográfico
se inyectaron 3 réplicas de los patrones, se observó que los
coeficientes de variación estuvieron por debajo de 5% que es
el máximo permitido por las buenas prácticas de laboratorio.
Conclusiones generales del En este artículo emplean una de las técnicas más utilizadas
articulo acorde a lo para separar los componentes de una mezcla, es uno de los
revisado en la Unidad 1 de métodos con mayor sensibilidad lo cual permite identificar y
cromatografía de la UNAD cuantificar la sustancia a detectar.
Relevancia de las técnicas La cromatografía de fase reversa es, con gran diferencia, la
cromatográficas en el técnica de separación por cromatografía líquida más utilizada
alcance resultados actualmente en el laboratorio y su popularidad se refleja en la
planteados en el artículo. amplia selección de columnas, su forma más sencilla, en la
cromatografía de fase reversa se combinan una fase móvil
polar, normalmente una mezcla de agua o solución tampón
con eluyentes polares como el metanol, el acetonitrilo o el
tetrahidrofurano, y una fase estacionaria no polar como
hidrocarburos de cadena larga unidos a un soporte de sílice o
híbrido. En los últimos años, se ha destinado una gran
cantidad de trabajo en los campos de la investigación y el
desarrollo al área de las fases estacionarias con el fin de
mejorar la eficacia de las columnas y la estabilidad frente al
pH y de proporcionar selectividades alternativas.
Titulo Artículo 4 (HPLC): Análisis de fitoesteroles en la semilla del estropajo, luffa
cylindrica por cromatografía de gases capilar
Autores Andrés Mauricio Arias González, Diana Margarita Gil Cañas,
Juan Pablo Arrubla Vélez.
Año 2016
DOI / enlace al artículo https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57956611004
Técnicas cromatográficas Se evaluaron por cromatografía en capa delgada (CCD),
abordas en el artículo mediante el uso de cromatofolios de CCD de sílica gel 60 F254
como fase estacionaria de 5.2 x 2.5 cm.
Con esta técnica se realizó la caracterización preliminar
empleando como fase móvil hexano: éter etílico: ácido
acético (8: 2: 0.1), utilizando como revelador ácido
fosfomolíbdico preparado al 10% en etanol absoluto.
Breve descripción de El proceso es similar a la cromatografía de papel con la
aplicación de las técnicas ventaja de que se desarrolla más rápidamente, proporciona
cromatográficas. mejores separaciones y se puede elegir entre diferentes
adsorbentes. La CCF es una técnica estándar en el laboratorio.
Debido a su simplicidad y velocidad, la CCF se utiliza a
menudo para monitorizar las reacciones químicas y también
para el análisis cualitativo de los productos de una reacción,
puesto que permite conocer de manera rápida y sencilla
cuántos componentes hay en una mezcla.
Resultados relevantes La extracción en fase sólida (SPE) para el estigmasterol
planteados en el artículo. exhibió buenos resultados con
porcentajes de recuperación con promedio de 82,96%, al
comparar con la literatura científica, se encuentra que los
 porcentajes de recuperación de algunos fitoesteroles varían
entre 80-100%, como un ejemplo de esto se puede citar el
aceite de oliva, en el cual se han reportado porcentajes
de recuperación entre 70-110% para el estigmasterol y β-
sitoesterol respectivamente [1, 5]. Por lo anterior se adaptó
dicho método de recuperación que se acercan mucho a los
encontrados en estudios previos.
Conclusiones generales del Las semillas de luffa cylindrica contiene como fitoesterol
articulo acorde a lo mayoritario el β-sitoesterol con una concentración de 2551,1
revisado en la Unidad 1 de mg de β-sitoesterol por Kg de aceite, seguido de
cromatografía de la UNAD estigmasterol con una concentración de 211,19 mg de
estigmasterol por Kg de aceite.
Relevancia de las técnicas Es una de las técnicas que presentando una exactitud con
cromatográficas en el porcentaje de error menores al 5% y una precisión con valores
alcance resultados de coeficiente de variación inferiores al 5% indicando la
planteados en el artículo. precisión, reproducibilidad y repetibilidad de método
demostrando así la validez de la técnica para el análisis de
fitoesteroles .
Análisis (mín.250 palabras Estos métodos permiten la separación de componentes y se
– Máx. 500 palabras) distribuyen en dos fases, inmóvil o estacionaria y móvil.
Generándose así el resultado por movimientos de la mezcla
que son arrastrados a través de la fase móvil hasta la
estacionaria, donde se le conoce a esto como elución. Para
que se lleve a cabo una buena cromatografía influyen
diferentes aspectos, como el tiempo de retención que es el
tiempo en el que el analito recorre la columna; el soluto que
es el componente que se pretende separar, la muestra que es
lo que se va a analizar, el disolvente que es la sustancia que
solubilizará a otra. Una de las técnicas cromatográficas más
complejas y específicas son la cromatografía de gases (CM) y
la cromatografía de líquidos de alto rendimiento HPCL.
La cromatografía de gases constituye el mejor método
analítico ideado para la separación de gases, líquido o sólidos
que pueden pasar fácilmente al estado de vapor o
transformándolos previamente en otros estados volátiles.
Para la cromatografía de líquidos el fundamento es
básicamente como en las técnicas clásicas: se hace fluir un
líquido a través de sólido e instrumentalmente, se consideran
columnas más cortas (empaquetadas), y con el uso de altas
presiones para forzar a la fase móvil a recorrer la fase
estacionaria, por tanto, los tiempos de empleo son más cortos
y con separaciones altamente efectivas con cromatogramas
con resoluciones altas (>1.5). Las partes de un cromatógrafo
ya sea de gases o líquidos son prácticamente iguales, ya que
contienen un sistema de inyección de la muestra, sistema de
introducción de la fase móvil, tuberías de arrastre, fase
estacionaria en columna, un detector de analitos y un sistema
de recolección de datos.
Bibliografía complementaria:

García Peña, Caridad M., & Fernández Cervera, Mirna, & Sanz Pedraja, Yoanly, & Castiñeira
Díaz, Mirta, & Martínez Espinosa, Vivian, & Nogueira Mendoza, Antonio (2016).
Validación y aplicación de un método de cromatografía gaseosa para determinar
ácidos grasos en diferentes matrices de aceite de hígado de tiburón. Revista
Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, 47(3),48-59.[fecha de Consulta 20 de
Noviembre de 2021]. ISSN: 1870-0195. Disponible en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57956611004

Burriel Marti, F. (2007). Química Analítica Cuantitativa - 18 Edición. Paraninfo.