ASIGNATURA

BIOLOGIA
AISLAMIENTO MOLECULAR

DE ARN DOCENTE
HÉCTOR EPIFANIO
HERRERA REYNOSO

ALUMNA
PAIRA SANCHU
ELIZABETH CAMILA
 A tener en cuenta
❑ La extracción de ARN es una
purificación del ARN a partir de
muestras biológicas.
❑ la presencia ubicua de ribonucleasas en
las células, los tejidos y el entorno puede
degradar rápidamente el ARN,
complicando así el proceso de extracción
del mismo.
❑ Para evitarlo, cualquier equipo utilizado
para la extracción de ARN tiene que
limpiarse a fondo con productos
químicos para destruir las ribonucleasas.
❑ asegurarse de que las RNasas de su
propia piel no contaminen sus propias
muestras.
❑ el Método más utilizado es el de la
extracción con tiocianato de guanadenio,
fenol y cloroformo o, más comúnmente,
la extracción con trisol.
❑ Esta técnica funciona porque se basa en
la separación frontal por centrifugación
de una muestra acuosa mezclada con una
solución de fenol y cloroformo.
❑ El tisiaato de glanademio es un agente
caótico que es uno de los componentes
del TRIzol y es importante para
desnaturalizar las proteínas que pueden
unirse a los ácidos nucleicos o degradar
el ARN.
 PROCEDIMIENTO
El pellet se resuspende en trizol.
Asegúrese de que su área de
trabajo esté limpia con RNA
zap.

pipeteando enérgicamente
El primer paso es la unas cuantas veces la
homogeneización de todas muestra de centrifugado a
las células bacterianas que durante diez minutos a
crecen durante la noche cuatro grados Celsius.
por centrifugación a
12.000 GS durante dos
minutos después de la
centrifugación, el señuelo
trajo sobrenadante se
decanta.
 Todos los A continuación se realiza el paso de separación de
ácidos caras. Se añade cloroformo a la muestra. La muestra
nucleicos y las se agita enérgicamente y se incuba durante 3 min a
proteínas del temperatura ambiente.
sobrenadante
se transfieren
a un nuevo
tubo.

Después se centrifuga la
muestra a 12.000 g
durante 15 minutos.
El siguiente paso es la precipitación del ARN al
Al final de la
100%. Se añade 500 microlitros de alcohol
centrifugación se debería
isopropílico, invertimos 2 veces y se incuba durante
ver una fase acuosa
diez minutos.
superior incolora, una
interfase y una fase
orgánica inferior roja. El
ARN de la capa acuosa se
retira cuidadosamente y
se transfiere a un nuevo
tubo.
 A continuación, se realiza otro paso
de centrifugado durante diez minutos
a cuatro grados centígrados.
El último paso es el lavado del ARN.
Se elimina el sobrenadante y se lava
el pellet con 1ml de etanol al 75%.
Colocar la muestra en la
centrifuga a 7500 rpm durante
5minutos a cuatro grados
Celsius.
El sobrenadante de etanol se
decanta y el etanol residual
puede eliminarse con una
micropipeta
Dejar que el ARN se seque al aire
durante 5 minutos.
luego suspender el sedimento en el
tampon agregando 50microlitros
de tampon libre de ARNasa se
resuspende en agua de mar
profunda.