laboratorio virtual #2 (purificación de DNA)

presenta
Fabio Aldair montaño moreno (218546)

docente
Karina López López

palmira, valle del cauca. Colombia diciembre 4 2021

 Introducción
la extracción del DNA de un tejido vegetales el primer paso de muchas aplicaciones de la
biotecnología, el método a utilizar cambia en función de la especie y el tipo de tejido
inicial, pero existen ciertos pasos generales necesarios para la extracción de DNA a partir
de un tejido vegetal donde es necesario:

 ruptura de las paredes celulares

 ruptura de las membranas celulares
 desnaturalización y separación de proteínas
 precipitación del DNA
Materiales

 pipetas
 puntas estériles
 microtubos
 mortero plástico
 micropipeta
Reactivos

 tampón de extracción (ctab)

 cloroformo isoamílico
 isopropanol
 etanol 70%
 tampón (te)
Equipos

 baño térmico
 centrifuga
 campana de extracción
Protocolo

 se toma 75 gr aproximadamente de tejido de hoja joven en un tubo de plástico y

se congela en nitrógeno líquido evitando que se formen cristales de hielo
 procedemos a triturar la muestra congelada con ayuda de un mortero plástico,
buscando obtener un polvo fino; y con ello romper las paredes celulares
 posteriormente para romper las membranas celulares adicionamos 500 ml de
tampón de extracción
 durante todo el proceso se requiere la inhibición de la acción de las nucleasas
(enzimas degradantes del DNA) mediante la adicción de algún agente quelante de
lociones magnesio
 las muestras se encuban en un baño térmico durante 10 min a 65 °c con el fin de
facilitar la lisis celular y con ello la liberación del contenido de la célula.
 posteriormente se añade a la muestra 450 μl de la mezcla de cloroformo isoamílico
en proporción 24/1; para así centrifugar la muestra entre 5 y 10 min a 13000 rpm,
y como resultado el DNA se encuentra en la fase superior (fase acuosa)
  se transfiere el DNA presente en la fase acuosa a un nuevo tubo, al cual le
añadimos isopropanol en un volumen equivalente al de la fase acuosa; buscando
la precipitación de los ácidos nucleicos por lo cual se mantiene la mezcla en hielo
durante 5 o 10 min y posteriormente se centrifuga la muestra entre 5 y 10 min.
obteniendo como resultado el DNA en el precipitado
 para lavar el precipitado se añaden 100 μl etanol al 70% y centrifugamos de nuevo
la muestra duran 2 min a 13000 rpm, para posteriormente eliminar el
sobrenadante con una micropipeta cuidando no arrastrar el DNA precipitado
 el precipitado obtenido se deja secar a temperatura ambiente durante 5 min
 por último se re suspenden 50 μl de tampón (te) con rnasas
resultados

 después de llevar a cabo todo el protocolo de extracción de DNA a partir de tejido

de hoja joven, como resultado final obtenemos el precipitado donde encontramos
el DNA de dicho tejido
conclusión
siguiendo este protocolo podremos llevar a cabo la extracción de DNA a partir de
tejido de hoja joven, donde es recomendable conservar la muestra a 4 °c grados para
que el DNA se resuspenda por completo
si dicha muestra se quiere conservar a corto plazo se recomienda conservar a 4 °c; y
si se piensa conservar a largo plazo se recomienda mantener una temperatura de
entre -20 °c y -80°c
preguntas adicionales
1. Describe tres equipos que se utilizan en la extracción de DNA.
 baño térmico: equipo termostático utilizado en los laboratorios de investigación
química para transferir calor indirectamente, por convección térmica, a una
muestra que requiere análisis
 centrifuga: Una centrifugadora es un equipo que sirve para la separación de
muestras que se quieran analizar en el laboratorio por medio de la fuerza
centrífuga para acelerar la decantación de sus componentes o fases (en la
mayoría de los casos una sólida y una líquida)

2. Menciona dos métodos de molienda de las células para purificar el DNA

R// * congelación de la muestra en nitrógeno liquido para después moler con ayuda de
mortero plástico
3. ¿Cuál es la función del fenol durante la extracción del DNA?
R// permite la purificación de ADN mediante la adición de fenol y cloroformo lo que da
lugar a la aparición de 2 fases: una fase acuosa superior que contiene los ácidos
nucleicos y una fase orgánica que contiene las proteínas disueltas en el fenol y los
lípidos disueltos en el cloroformo
4. Investiga como precipita el alcohol (etanol e isopropanol) los DNAs durante el
proceso de purificación.
R// El isopropanol precipita el DNA porque compite con este por el agua,
deshidratándolo y llevándolo al fondo del tubo.
BIBLIOGRAFIA

 https://www.elportaldelasalud.com/metodos-para-la-extraccion-de-adn-en-
laboratorio/
 https://artilab.com.co/noticias/centrifuga-para-laboratorio/
 http://www.virtual.unal.edu.co/innovaciones/extraccionadn


SOLUCION CUESTIONARIO