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Universidad de Pamplona - Ciudad Universitaria - Pamplona (Norte de Santander - Colombia)

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UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR
MARTHA GRISELDA FLOREZ RANGEL Ph.D
GUIA DE LABORATORIO

1. EXTRACCION DE ADN

Las tcnicas bsicas de biologa molecular y bioqumica permiten aislar
molculas de (DNA, RNA y protenas) a partir de clulas. El poder de la
biologa molecular procede de la utilizacin combinada de
procedimientos genticos in vivo y de los bioqumicos in vitro. La era de
oro de la biologa molecular se estableci una vez fue posible aislar
segmentos especficos de DNA que representaban genes individuales.
La extraccin de ADN de una muestra celular, permite realizar estudios de
caracterizacin y estudios de expresin de los genes de inters utilizando
diversas tcnicas de Biologa Molecular y con el uso de enzimas, sondas, o
primes adecuado. La extraccin del ADN en general consta de una fase
inicial de lisis celular (lisozima o detergentes), precipitacin y purificacin
del DNA con alcohol, solventes desnaturalizantes y RNAsa para la
remocin del RNA.

Materiales y equipos: Incubadora, centrfuga, eppendorfs de 1.5 ml,
micropipetas y puntas desechables.
Reactivos: Medio LB (Luria Bertani ), Solucin I, Solucin II, Solucin III,
etanol al 70%, etanol al 90%, TE pH 8.0.
(la preparacin de los reactivos se encuentran en anexo )

PROTOCOLO (SAMBROOK, 1989)
1.1 EXTRACCION DNA PLASMIDICO
1. Dejar las cepas bacterianas en crecimiento desde la noche anterior, a
28C de temperatura y
125 r.p.m. en medio LB lquido (16h). Dispensar 1.5 ml de cada una de
ellas en tubos eppendorf, agitando antes de servir. Centrifugar a 12000
r.p.m. 1.5 ml de la suspensin bacteriana por 1-3 minutos. (El
procedimiento puede realizarse dos veces para as obtener el pellet de 3ml
de solucin bacteriana).
2. Descartar sobrenadante y resuspender el pellet bacteriano en 100 ml de
la solucin I.


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3. Adicionar 200ml de solucin II.
4. Tapar, mezclar suavemente (10 inversiones mximo) e incubar de 0-4C
durante 10 minutos.
5. Adicionar 150ml de la solucin III. Incubar de 0-4C durante 10.
Centrifugar a 12000 r.p.m. por 5 min.
6. Transferir el sobrenadante a otro tubo eppendorf previamente marcado.
Adicionar 1 ml de
Etanol absoluto, mezclar bien, e incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
Centrifugar por 5 minutos a 12000 r.p.m. a temperatura ambiente.
7. Cuidadosamente descartar el sobrenadante e invertir el tubo abierto
sobre una toalla de papel para secar el pellet. Lavar el pellet 2 veces con 1
ml de Etanol al 70% y Centrifugar a 12000rpm por 5 minutos.
8. Disolver el pellet en 50ml de TE a pH 8.0 agua. Adicionar 1ml de
RNAsa (10 mg/ml) y mezclar e incubar a 37C por 15 min.
9. Adicionar 5ml de Acetato de sodio 3M y 137 ml de etanol absoluto.
Incubar de 5-10 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar a 12000
r.p.m. por 5 min.
10. Lavar el pellet con 1 ml Etanol al 70%. Centrifugacin a 12000rpm por
5 minutos, descartar sobrenadante y secar. Disolver el pellet en 50ml de
TE.

1.2 EXTRACCION DE DNA GENOMICO A APRTIR DE SANGRE
PERIFERICA TOTAL (TECNICA SALTING OUT).
Una protena tiene mltiples grupos acido-base, lo que hace sus
propiedades de solubilidad dependiente de la concentracin de sal,
polaridad del solvente, pH, y temperatura. Diferentes protenas tiene
diferentes propiedades de solubilidad, por lo que cuando una protena es
soluble otras precipitan.
La solubilidad de una protena es sensible a la concentracin de sal, la
concentracin de sal se expresa en trminos de fuerza inica (I= !Sc
i
Z
i
2
).
La solubilidad de una protena a baja fuerza inica generalmente aumenta
con la concentracin de sal. El salting in es el fenmeno por el cual la
concentracin de sal aumenta la solubilidad de la protena. A altas fuerzas
inicas, la solubilidad de las protenas disminuye, este fenmeno es
conocido como salting out. Este fenmeno se da bsicamente por la
competencia por las molculas de agua que forman parte de la capa de
solvatacin


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En este mtodo se utiliza un buffer que contiene proteinasa K (tris-HCl, pH
8.3, Tween 20, nonidet p40, proteinasa K), la cual destruye las membranas
nucleares, liberando a la solucin los cidos nucleicos. El paso siguiente
consiste en la precipitacin de los cidos nucleicos, ya que el ADN
presente en soluciones con alta concentracin de sales de acetato sdico
puede precipitarse mediante la adicin de alcohol etlico a dichas
soluciones.
1. Adicionar a un tubo eppendorf de 2"l, 500"l de muestra de sangre
perifrica total anticuagulada con EDTA.
2. Adicionar 1500"l de solucin de lisis de rojos
3. Balancear e invertir suavemente el tubo de sangre hasta que est
completamente mezclada.
4. Centrifugar a 14500 rpm durante tres minutos.
5. Remover y descartar tanto el sobrenadante como sea posible, sin
mover el pellet blanco visible. Se recomienda el uso de bomba de
vacio para la succin del sobrenadante por medio de una punta
estril.
6. Adicionar 500"l de solucin de lisis nuclear al tubo con clulas
resuspendidas y 333 "l de solucin de precipitado de protenas,
luego aplique vortex hasta que desaparezca el botn.
7. Centrifugar a 14500 rpm durante tres minutos. Debe verse un
pequeo pellet de protena caf oscuro.
8. Se transfiere el sobrenadante a un tubo de microcentrifuga de 2ml
con 600"l de isopropanol frio.
9. Mezclar suavemente por inversin del tubo hasta que el DNA sea
visible.
10. Centrifugar a 14500 rpm durante tres minutos. El DNA debe ser
visible en un pequeo pellet.
11. Realizar sucesivos lavados con etanol absoluto y etanol al 70%.
12. Por ltimo se decanta el etanol, se invierte el tubo sobre un pao
absorbente y se deja secar.
13. Adicionar solucin rehidratante al tubo de acuerdo a la cantidad de
DNA obtenido.



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2. ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS

2.1 EN GELES DE AGAROSA

La electroforesis es una tcnica analtica de separacin de macromolculas.
La separacin tiene lugar debido a la diferente movilidad que presentan las
macromolculas cargadas cuando son sometidas a la influencia de un
campo elctrico como consecuencia de su relacin carga/masa.
Los cidos nucleicos son macromolculas cargadas negativamente, debido
a la presencia de grupos fosfato en su estructura. La naturaleza del enlace
fosfodister de las cadenas polinucleotdicas condiciona la carga de un
cido nucleico, que es aproximadamente igual al nmero de grupos fosfato.
La electroforesis en geles de agarosa se realiza en cubetas apropiadas,
generalmente horizontales, y requiere dos elementos indispensables: la fase
mvil y la fase estacionaria.
La fase mvil es el medio amortiguado que permite la movilidad de las
molculas cargadas hacia los electrodos correspondientes cuando se genera
un campo elctrico.
La fase estacionaria o soporte, es un polmero de naturaleza gelatinosa con
un tamao de poro homogneo que se haya sumergido y embebido en la
fase mvil. El polmero utilizado para el anlisis electrofortico de cidos
nucleicos de gran tamao (100pb-10kb) es la agarosa.
La migracin de los fragmentos de cidos nucleicos (ADN o ARN) en un
gel de agarosa sometido a un campo elctrico depende tanto del voltaje del
campo, como del tamao de poro del gel de agarosa.
La separacin efectiva de los fragmentos de ADN o ARN (resolucin)
depende tanto de la masa como de la carga de los distintos fragmentos, en
realidad de la relacin carga/masa.

Transcurrida la electroforesis, la localizacin relativa de los fragmentos se
determina mediante distintos mtodos de deteccin. La tincin con
bromuro de etidio, una sonda fluorescente tras iluminacin con luz UV, es
un mtodo generalizado de deteccin de fragmentos de ADN, ya que la
sonda se intercala entre la doble hlice de ADN y emite luz.







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METODOLOGIA
Materiales y Equipos: Cmara de Electroforesis HORIZONTAL, peines,
fuente de poder, micropipetas, puntas, eppendorf
Reactivos: Agarosa, buffer 5X TBE, bromuro de Etidio

PROTOCOLO:
Preparar un gel de agarosa de 1.0%. Para ello, pesar 0.5 g de agarosa en un
papel de pesada, aadir 50 ml de buffer TBE y llevar a ebullicin.
Dejar enfriar la disolucin hasta aproximadamente 50 C en un bao de
agua a esa temperatura. Verter la disolucin de agarosa en el molde
apropiado, sellado por los extremos y con el peine puesto. Dejar
polimerizar (20 min. Aproximadamente).
Mientras se polimeriza, preparar 1 litro de tampn TBE 1X. Una vez
polimerizado el gel, llenar la cubeta de electroforesis con tampn 1X y
quitar el peine con cuidado de no romper los pocillos.

Llenar tambin un pocillo con 5 "l de estndares de peso molecular, y las
muestras a analizar con su buffer de carga. Aplicar la fuente de corriente, y
correr la electroforesis a 120 V durante una hora.
Finalizada la electroforesis, sumergir el gel en una disolucin de bromuro
de etidio0.5 "g/ml por 15 30 minutos y se destie por 15 30 minutos en
agua. Visualizar el resultado con un transiluminador en una cmara oscura,
tomando las precauciones adecuadas (guantes de ltex, gafas o pantalla
protectora), ya que se trata de un compuesto txico por inhalacin y por
contacto, debido a su fuerte carcter mutagnico y teratognico
2.2 METODO SDS POLYACRILAMIDA
La poliacrilamida es un soporte empleado frecuentemente en electroforesis
en gel, es qumicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser
preparado de forma rpida y reproducible. Forma, adems, geles
transparentes con estabilidad mecnica, insolubles en agua, relativamente
no inicos y que permiten buena visualizacin de las bandas durante
tiempo prolongado. Adems tiene la ventaja de que variando la
concentracin de polmeros, se puede modificar de manera controlada el
tamao del poro.
Se utiliza para evaluar DNAs de pequeo tamao y para estudio de
protenas.





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BIBLIOGRAFIA:

Brown T. A. 2002. Genomes. 2
nd
edition. Bios Scientific, Oxford, United
Kingdom.
Griffitbs A.J.F., Gelbart W.M., Lewontin R.C., y Miller J. H. 2002.
Modern genetic analysis. 2
nd
edition. W.H. Freeman, New York.
Sambrook J. y Russel D. W. 2001. Molecular cloning: A laboratoly
manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New
York.
Watson J. D., Baker T. A., Bell S. P., Gann A., Levine M., Losick R. 2006.
Biologia Molecular del Gen. 5a edicin. Editorial medica Panamericana.
Espaa.

www.pubmed.com
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/ggongora/parte1a.htm
http://www.um.es/bbmbi/AyudasDocentes/Odontologia/Odo-
Practica05.htm
www.ucm.es/info/genetica/AVG/problemas/Rflp174.htm
www.odnavaiaescola.com/spanish/enzimasspn.html



REACTIVOS Y SOLUCIONES PARA BIOLOGIA MOLECULAR


Medio de cultivo Luria-Bertani (LB): Hidrolizado enzimtico de caseina 1,
Cloruro de sodio 0.5, Extracto de levadura 0.5. Ajustado el pH a 7.2 7.4 y
autoclavado a 121C por 25 minutos y en caso de ser necesario solidificado
con Bactoagar Oxoid 1.2 %. Adems, de los antibiticos necesarios para
la seleccin de la bacteria.
SOLUCIONES
SOLUCIN DE LSIS (I): TRIS-HCl pH 8.0 25mM, EDTA pH 8.0 10
mM, Glucosa 50mM. Volumen: 100 ml
SOLUCIN ALCALINA (II): SDS 1%, NaOH 0.2N
SOLUCIN SALINA (III): Acetato de potasio pH 5.0 5M





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TRIS-HCl 1M pH 7,65: Volumen 1 litro. Tris base 121,11 g. Ajustar pH a
7,65 con HCl (~4 ml) Agua delionizada c.s.p. 1000 ml. Autoclavar
TRIS-HCl 1M pH 8,0: Volumen 1 litro. Tris base 121,11 g. Ajustar pH a
8,0 con HCl (~42 ml). Agua desionizada c.s.p. 1000 ml. Autoclavar
TRIS-HCl 1M pH 7,5. Volumen 100 ml. Tris base 12,11 g. Ajustar pH a
7,5 con HCl (~5,0 ml). Agua desionizada c.s.p. 100 ml. Autoclavar
EDTA 0,5 M pH 8,0: Volumen 50 ml. EDTA 9,305 g (PM = 372,22).
Ajustar pH 8,0 (con NaOH concentrado hasta disolver, despus de la
disolucin, ajustar pH 8,0). Agua desionizada c.s.p. 50 ml. Autoclavar y
alicuotar
NaCl 5,0 M: Volumen 100 ml. NaCl 29,22 g. Agua desionizada c.s.p. 100
ml. Autoclavar
MgCl2 5,0 M: MgCl2.6H20 20,33 g, Agua desionizada c.s.p. 100 ml.
Autoclavar
SDS 10% (Sodio dodecil sulfato-libre de nucleasas) Volumen 10 ml. SDS
1 g. Calentar a 68 C para disolver y ajustar a pH 7,2 con HCl diludo.
Agua desionizada c.s.p. 5 ml. OBSERVACIONES: Usar mscara para
pesar el SDS (Irritante para las mucosas)
BROMURO DE ETIDIO (Mutagnico) 10 mg/ml. (Usar mscaras y
guantes, y pesar en cabina con extractor de gases). Volumen 10 ml.
Bromuro de etidio 100 mg. c.s.p. 10 ml con agua desionizada estril. Agitar
hasta disolucin. Almacenar en la oscuridad a 4o C
NaOH 1 M* Volumen 100 ml. NaOH 4g c.s.p. 100 ml con agua
desionizada estril
* Almacenar en frasco plstico
Acetato de Sodio 3 M pH 5,2: Volumen 100 ml. Acetato de sodio.3 H2O
40,81g. Ajustar pH 5,2 con cido actico glacial. c.s.p. 100 ml con agua
desionizada. Autoclavar
TE (Low) pH 8,0 ( Tris HCl pH 8,0 10 mM / EDTA pH 8,0 1 mM ):
Volumen 50 ml. Tris HCl 1 M pH 8,0 0,5 ml. EDTA 0,5 M pH 8,0 0,1 ml.
c.s.p. con agua desionizada a 50 ml (49,4 ml)
Etanol Absoluto ( 95 % ): Etanol destilado y almacenado a -20 oC.
Alicuotar
Etanol 75%, 80% 70%: Etanol destilado 75, 80 70 ml. Agua
desionizada 25, 20 30 ml. Alicuotar y almacenar a -20 oC






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Isopropanol Absoluto: Isopropanol destilado. Almacenar a 4 C
TBE 5 X ( Tampn de corrido ): Volumen 2 litros. Tris base 108 g. Acido
brico 55 g. EDTA 0,5 M pH 8,0 40 ml (pesar 7,444 g). c.s.p. con agua
desionizada 2000 ml. Disolver, filtrar y autoclavar
TBE 5X / Azul de bromofenol 0,25% / Xilenocianol 0,25%/ Ficoll 400
25% ): Volumen 50 ml. Azul de bromofenol 0.05 g. Xilenocianol 0,05 g.
Ficoll 400 5,00 g. TBE 5X c.s.p. 50 ml
MEDIO LB (Luria-Bertani): Bacto-triptona 10 g. Bacto-extracto de
levadura 5 g. NaCl 10 g. Ajustar pH 7,4 con NaOH c.s.p. con agua
desionizada 1000 ml. Autoclavar y abrir en ambiente estril.






















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FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA QUIMICA
LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR: SOLUCIONES

Una solucin es una mezcla de dos o ms componentes, cada componente
se mezcla ntimamente con el otro, de modo tal que pierden sus
caractersticas individuales. Esto ltimo significa que los constituyentes
son indistinguibles y el conjunto se presenta en una sola fase (slida,
lquida o gas) bien definida.
Una solucin que contiene agua como solvente se llama solucin acuosa.
Las soluciones son distintas de los coloides y de las suspensiones en que
las partculas del soluto son de tamao molecular y estn dispersas
uniformemente entre las molculas del solvente.
Las sales, los cidos, y las bases se ionizan cuando se disuelven en el agua
Los componentes de una solucin son soluto y solvente.
soluto es aquel componente que se encuentra en menor cantidad y es el
que se disuelve.
solvente es aquel componente que se encuentra en mayor cantidad y es
el medio que disuelve al soluto.
Estas mezclas de dos o ms sustancias se pueden mezclar agregando
distintas cantidades: Para saber exactamente la cantidad de soluto y de
solvente de una disolucin se utiliza una magnitud denominada
concentracin.
Dependiendo de su concentracin, las disoluciones se clasifican en
diluidas, concentradas, saturadas, sobresaturadas.
Diluidas: si la cantidad de soluto respecto del solvente es pequea.
Ejemplo: una solucin de 1 gramo de sal de mesa en 100 gramos de agua.
Concentradas: si la proporcin de soluto con respecto del solvente es
grande. Ejemplo: una disolucin de 25 gramos de sal de mesa en 100
gramos de agua.


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Saturadas: se dice que una disolucin est saturada a una determinada
temperatura cuando no admite ms cantidad de soluto disuelto. Ejemplo:
36 gramos de sal de mesa en 100 gramos de agua a 20 C.
Si intentamos disolver 38 gramos de sal en 100 gramos de agua, slo se
disolvera 36 gramos y los 2 gramos restantes permanecern en el fondo
del vaso sin disolverse.
Sobresaturadas: disolucin que contiene mayor cantidad de soluto que la
permitida a una temperatura determinada. La sobresaturacin se produce
por enfriamientos rpidos o por descompresiones bruscas. Ejemplo: al
sacar el corcho a una botella de refresco gaseoso.
Modo de expresar las concentraciones
Ya sabemos que la concentracin de las soluciones es la cantidad de soluto
contenido en una cantidad determinada de solvente o solucin. Tambin
debemos aclarar que los trminos diluida o concentrada expresan
concentraciones relativas.
Las unidades de concentracin en que se expresa una solucin o disolucin
pueden clasificarse en unidades fsicas y en unidades qumicas.

Unidades fsicas de concentracin

Las unidades fsicas de concentracin estn expresadas en funcin del peso
y del volumen, en forma porcentual, y son las siguientes:
a) Tanto por ciento peso/peso %P/P = (cantidad de gramos de soluto) /
(100 gramos de solucin)
b) Tanto por ciento volumen/volumen %V/V = (cantidad de cc de soluto) /
(100 cc de solucin)
c) Tanto por ciento peso/volumen % P/V =(cantidad de gr de soluto)/ (100
cc de solucin)





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a) Porcentaje peso a peso (% P/P): indica el peso de soluto por cada 100
unidades de peso de la solucin.

b) Porcentaje volumen a volumen (% V/V): se refiere al volumen de soluto
por cada 100 unidades de volumen de la solucin.

c) Porcentaje peso a volumen (% P/V): indica el nmero de gramos de
soluto que hay en cada 100 ml de solucin.

Ejercicio:
Se tiene un litro de solucin al 37%. Cuntos litros de agua se tienen que
agregar para que quede al 4%?
Resolvamos:
El problema no indica las unidades fsicas de concentracin. Se supondr
que estn expresadas en % P/V.
Datos que conocemos: V = volumen, C= concentracin
V
1
= 1 litro
C
1
= 37%
37% P/V = significa que hay 37 gramos de soluto en 100 ml de solucin
(solucin = soluto + solvente).
C
2
= 4%
V
2
= ?





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Regla para calcular disoluciones o concentraciones
V
1
C
1
= V
2
C
2


Puede expresarse en: % P/V
Reemplazando los datos que se tienen del problema, se obtiene:

Entonces, si tenemos un litro de solucin al 37%; para obtener una
solucin al 4% es necesario tener un volumen de 9,25 litros; por lo tanto,
para saber cuantos litros de agua hay que agregar al litro inicial, hacemos:
V
2
V
1
= Volumen de agua agregado
9,25 1 = 8,25 litros
Respuesta: Se deben agregar 8,25 litros de agua
Unidades qumicas de concentracin
Para expresar la concentracin de las soluciones se usan tambin sistemas
con unidades qumicas, como son:

a) Fraccin molar (Xi): se define como la relacin entre los moles de un
componente (ya sea solvente o soluto) de la solucin y los moles totales
presentes en la solucin.



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Ejercicio:
Se agregan 3 gramos de sal en una cacerola con 4 litros de agua cul es la
concentracin de sal?, o dicho de otra forma cul es la concentracin de la
solucin?
Calcular la fraccin molar de solvente y de soluto: Recordemos que la
fraccin molar expresa la concentracin de una solucin en Moles de
Soluto o de Solvente por Moles Totales de la Solucin.
Solvente: agua (H
2
O)
Soluto: sal (NaCl)
Datos que conocemos: 3 gramos de soluto y 4.000 cm
3
(4 litros) de
solvente.
Con estos datos debemos resolver el problema, calculando 4 valores
significativos: moles de solvente, moles de soluto, fraccin molar de
solvente y fraccin molar de soluto.

Para el agua, se conoce su masa molar = M(H
2
O) = 18 g/mol (1 mol de
H
2
O contiene 18 g, formados por 2 g de H y 16 g de O).
Averiguar cuntos moles de solvente H
2
O) tenemos:





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Para la sal (NaCl) su masa molar = M(NaCl) = 58,5 g/mol (1 mol de sal
equivale a 58,5 g, formados por 23 g de Na y 35,5 g de Cl)
Averiguar cuntos moles de soluto tenemos:



Ahora que conocemos la cantidad de moles de solvente y la cantidad de
moles de soluto, podemos calcular las fracciones molares de solvente y de
soluto:
Fraccin molar del solvente = X
solvente



Fraccin molar del solvente (agua) = 0,99977
Fraccin molar del soluto= X
soluto




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Fraccin molar del soluto= 0,00023

Pero sabemos que:

Entonces: 0,99977 + 0,00023 = 1

b) Molaridad (M): Es el nmero de moles de soluto contenido en un litro
de solucin. Una solucin 4 molar (4 M) es aquella que contiene cuatro
moles de soluto por litro de solucin.

Ejercicio:
Cul ser la molaridad de una solucin que contiene 64 g de Metanol
(masa molar del metanol 32 gr/mol) en 500 ml de solucin?
Datos conocidos: metanol 64 g
Masa molar del metanol: 32 g/mol
Masa de la solucin: 500 ml (0,5 litro)
Primero calculamos la cantidad de moles que hay en 64 g de metanol.
Si un mol de metanol equivale a 32 g, 64 g equivalen a 2 moles (64/32=2)




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Aplicamos la frmula:

Respuesta: 4 molar

c) Molalidad
En la molalidad relacionamos la molaridad del soluto con el que estamos
trabajando con la masa del disolvente (en kg) que utilizamos.
La definicin de molalidad es la siguiente:
Relacin entre el nmero de moles de soluto por kilogramos de disolvente
(m)

Ejercicio:
Calcule la concentracin molal de una solucin que contiene 32g de
cloruro de sodio en 10. kilogramos de solvente.
En el ejemplo anterior se calculo que 32g de NaCl equivale a 0.55 moles de
soluto. Sustituimos la ecuacin para molalidad, as:
m = 0.55 mol NaCl / 10. kg solvente = 0.055 m

La concentracin de la solucin de NaCl es de 0.055 m.





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d) Normalidad:
La normalidad (N) es el nmero de equivalentes (eq-g) de soluto (sto) por
litro de disolucin (Vsc).

El nmero de equivalentes se calcula dividiendo la masa total por la masa
de un equivalente: , o bien como el producto de la masa
total y la cantidad de equivalentes por mol, dividido por la masa molar:
.
Normalidad cido-base
Es la normalidad de una disolucin cuando se utiliza para una reaccin
como cido o como base. Por esto suelen titularse utilizando indicadores de
pH.
En este caso, los equivalentes pueden expresarse de la siguiente forma:
para un cido, o
para una base.
Donde:
n es la cantidad de equivalentes.
moles es la cantidad de moles.
H
+
es la cantidad de protones cedidos por una molcula del cido.
OH

es la cantidad de hidroxilos cedidos por una molcula de la base.


Por esto, podemos decir lo siguiente:
para un cido, o para una
base.





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Donde:
N es la normalidad de la disolucin.
M es la molaridad de la disolucin.
H
+
es la cantidad de protones cedidos por una molcula del cido.
OH

es la cantidad de hidroxilos cedidos por una molcula de la base.


Ejemplos:
Una disolucin 1 M de HCl cede 1 H
+
, por lo tanto, es una disolucin 1
N.
Una disolucin 1 M de Ca (OH)
2
cede 2 OH

, por lo tanto, es una


disolucin 2 N.

BIBLIOGRAFIA:

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nd
edition. Bios Scientific, Oxford, United
Kingdom.
Griffitbs A.J.F., Gelbart W.M., Lewontin R.C., y Miller J. H. 2002.
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nd
edition. W.H. Freeman, New York.
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manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New
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Practica05.htm
www.ucm.es/info/genetica/AVG/problemas/Rflp174.htm
www.odnavaiaescola.com/spanish/enzimasspn.html