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http://www.biologia.arizona.edu/human/problem_sets/dna_forensics_2/06t.html
http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
MATERIAL Y REACTIVOS
Batidora
Muestra vegetal Nevera
Agua (destilada o Colador o
mineral) centrífuga
Sal de mesa Vaso
Bicarbonato Tubo de
sódico ensayo
Detergente Varilla fina
líquido o champú
Alcohol
isoamílico a 0ºC
FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el
hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas
negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior
extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células
mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en
una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese
momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos
moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en
menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran
longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y
separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto,
extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo
cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el único reactivo
de esta práctica que no suele haber en una cocina.
REALIZACIÓN
RESULTADOS
Protocolo QIAGEN
http://html.rincondelvago.com/extraccion-de-adn-humano.html
OBJETIVOS:
FUNDAMENTOS TEÓRICOS:
Para seleccionar un tejido como fuente de ADN debe reunir dos condiciones:
contener gran cantidad de material genético y poseer baja actividad de DNAasa.
Factores como los iones Ca2+ y Mg2 son importantes para la actividad del las
DNAasas .El citrato de sodio presente en las soluciones empleadas para la
extracción y purificación del ADN, atrapa estos iones e impide, de esta forma, la
acción de las enzimas que digieren estas moléculas. Con el fin de eliminar en
forma definitiva la actividad de las nucleasas, las etapas de remoción de las
proteínas deben ser llevadas a cabo tan rápido como sea posible y en frío.
Las nucleoproteínas, son proteínas que aparecen asociadas con los ácidos
nucleicos de las células eucariotas; son insolubles en agua y en soluciones de
baja fuerza iónica pero solubles en soluciones de alta fuerza iónica; propiedad que
debe ser tenida en cuenta durante los procesos de extracción inicial.
MATERIALES Y REACTIVOS :
Pipetas Pasteur. 3
Baño María -
Centrífuga -
Tubo de ensayo tapa rosca 1
Gradilla 1
Pipetas de 1 y 5ml. 1
Toallas de papel. 2
PROCEDIMIENTO:
3. Pasarlas a otro tubo de ensayo y agregar 10ml de agua destilada, tapar el tubo
e invertirlo tres veces.
8. Agregar 5ml de NaCl 0,1M agitar y dejar reposar por unos minutos.
10. Colectar el ADN con una punta para micropipeta de 10µl a 100µl (punta
amarilla) y llevarlo a un tubo que contenga 4ml de amortiguador salino.