Descripción de las principales

técnicas y metodologías
Biotecnología
Clonación de un gen
Según el Convenio sobre Diversidad Biológica
(Naciones Unidas, 1992): “La biotecnología se
refiere a toda aplicación tecnológica que utilice
sistemas biológicos y organismos vivos o sus
derivados para la creación o modificación de
productos o procesos para usos específicos”.
Es el proceso que consiste en introducir un gen en una
célula de manera que pueda ser copiado y mantenido.
Para ello el gen se inserta en una molécula de ADN,
llamada vector de clonación, (plásmido) capaz de
entrar y de replicarse de forma independiente en una
célula huésped.
La inserción se realiza con enzimas de restricción que
"cortan y pegan" el gen para después obtener una
molécula de ADN recombinante.

Extracción Etapas de la clonación

de ADN
Se hacen cultivos en medios líquidos
para la obtención de biomasa. Ésta pasa
por el proceso de centrifugación para
separar el ADN, éste pasa por los
procesos de lisis celular, precipitación y
purificación, todo para remover residuos
y restos de ARN contaminantes que
hayan quedado.

Bacteria
Ligación
Para insertar el gen que se quiere
clonar en el vector de clonación
(plásmido en este caso, que también
lleva un gen de fácil detección
genotípica llamado marcador) se corta
éste y el ADN a clonar con la misma
enzima de restricción y se unen
covalentemente, ambos con ayuda de
ADN ligasa, obteniéndose así el
plásmido recombinante.
PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa). El
material genético es amplificado, creando
muchas copias de un fragmente específico del
gen a clonar.
El ADN extraído pasa por una desnaturalización
(96°C), es decir se separan las cadenas,
después se agrega a la solución más
nucleótidos y los "primers" o "iniciadores" con
secuencia específica, que se van a unir a las
cadenas de ADN y posteriormente aplicando
otra vez calor se extenderán con ayuda de la
enzima polimerasa que soporte altas
temperaturas. Se hace la replicación de ambas
cadenas (obteniéndose 2 por cada ciclo). Se
repite todo esto muchas veces para obtener
más copias.

Transformación

Se introducen los plásmidos y otros

tipos de ADN en bacterias, como E. coli
que se usa en los laboratorios. Durante
la transformación, células bacterianas
preparadas especialmente se someten
a un choque (como alta temperatura)
que las anima a incorporar ADN
extraño.
Selección
Consiste en comprobar qué bacterias
han incorporado el gen. Como el
plásmido lleva un gen marcador fácil de
detectar, por ejemplo resistencia a un
antibiótico; entonces se añade al medio
de cultivo bacteriano ese antibiótico y
las bacterias que sobrevivan serán las
que han incorporado el plásmido
recombinante, y por tanto, el gen a
clonar. Posterior al cultivo también se
amplifica y verifica la presencia del gen
por medio de la PCR.
 Secuenciación
de Sanger
Una vez que se ha clonado el ADN, es
importante determinar la secuencia de
nucleótidos del gen, su orden exacto en clave
de A, G, T y C. Esto puede ser útil para
determinar la estructura exacta del mismo y
hasta para identificar mutaciones genéticas.
El método de Sanger es durante la reacción
de PCR, donde además de agregar los 4
nucleótidos del ADN a la solución, también se
agregarán versiones didesoxi, o terminadores
de la cadena, de los cuatro nucleótidos,
formando muchas cadenas de ADN de
diferentes tamaños. La talla de éstos puede
verificarse con una electroforesis.

Biocatálisis
Biocatálisis se refiere a la utilización de células o sus
enzimas aisladas para catalizar reacciones o
transformaciones que conducen a la obtención de
compuestos de interés, que satisfacen numerosas
necesidades humanas. La biocatálisis se encuentra
enmarcada en la denominada Biotecnología Blanca, subsector
de la Biotecnología con importantes perspectivas de
crecimiento, clave para el desarrollo de la denominada
bioeconomía.

Fermentación
La fermentación es un proceso catabólico de oxidación
incompleta, que no requiere oxígeno, siendo el producto final un
compuesto orgánico. Estos productos finales son los que
caracterizan los diversos tipos de fermentaciones como lo son
la alcohólica, láctica, acética y butírica.

Enzimas
Las enzimas son proteínas, polímeros formados por aminoácidos
covalentemente unidos entre sí, que catalizan en los organismos una gran
variedad de reacciones químicas. La actividad catalítica de las enzimas
depende de que mantengan su plegamiento, es decir, su estructura
tridimensional. En esta estructura tridimensional se forman cavidades, llamadas
“sitio activo”, las cuales muestran afinidad por las moléculas específicas
(sustratos) que se convertirán en productos.

Tipos de enzimas

1 Oxidorreductasas
Son enzimas que estimulan las reacciones de oxidación y reducción. En este
sentido, las oxidorreductasas son proteínas que, en una reacción química,
permiten la transferencia de electrones o de hidrógeno de un sustrato a otro.
2 Transferasas
Son enzimas que, como su propio nombre indica,
estimulan la transferencia de grupos químicos
entre moléculas. Son distintas a las
oxidorreductasas en el sentido que estas
transfieren cualquier grupo químico excepto el
hidrógeno. Un ejemplo son los grupos fosfato.

3 Hidrolasas
Son enzimas que, a grandes rasgos, tienen la función de romper enlaces entre

moléculas mediante un proceso de hidrólisis en el cual, como podemos deducir

por su nombre, está involucrada el agua.

4 Liasas
Son enzimas muy similares a las hidrolasas en el sentido que su función es la de
romper enlaces químicos entre moléculas y que, por lo tanto, son pieza
fundamental de las reacciones catabólicas, pero en este caso, las liasas no
requieren de la presencia de agua. Además de que producen la adición
o sustracción de grupos químicos a dobles enlaces.

5 Isomerasas
Son enzimas que estimulan la obtención de isómeros, es decir, nuevas
conformaciones estructurales de una molécula que, gracias a esta modificación
de su estructura tridimensional, se comportan de forma diferente.
6 Ligasas
Son enzimas que catalizan la unión covalente de dos sustratos mediante la

energía de hidrólisis de nucleósidos trifosfatados, generalmente el ATP.

Aplicaciones de la biocatálisis

Referencias

Palladino, M., Thieman, W. (2010). Introducción a la biotecnología. España:

Pearson Educación.
Ramírez, J. (01 de diciembre del 2014). "Enzimas: ¿Qué son y cómo
funcionan?". UNAM. https://www.ru.tic.unam.mx/handle/123456789/2274
Arroyo, M.; Acebal, C. y de la Mata, I. (2014). "Biocatálisis y biotecnología".
Arbor, 190 (768): a156. doi: http://dx.doi.org/10.3989/arbor.2014.768n4010
Boronat, R. López, J. (1 de Enero del 2011) ''El estudio de la fermentación en el
laboratorio de educación secundaria''. Revista Eureka sobre Enseñanza y
Divulgación de Ciencias. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/pdf/920/92017185010.pdf
Bugarín, P.. (2020). Clonación de ADN. 20 de febrero de 2022, de Khan
Academy Sitio web: https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-
expression-and-regulation/biotechnology/a/overview-dna-cloning

Equipo 8.
Regina Romo González
Francisco Javier Sainz Hernández
Elizabeth Natalí Sánchez Ramírez
Samara Jazmín Velázquez Vázquez