Biología

Grado de Físicas

TEMA 9. Ingeniería génica y biotecnología

Endonucleasas de restricción. Reacción en cadena de la polimerasa.Secuenciación del DNA. Terapia génica.
Genómica. Proteómica

GUIÓN - ESQUEMA DEL TEMA

- Endonucleasas de restricción.
- DNA ligasa.
- Transcriptasa inversa.
- La reacción en cadena de la polimerasa.
- Secuenciación de DNA por el método didesoxi.
- Localización de genes por su posición.
- Terapia génica.
- Secuenciación de genomas completos.
- Genómica y proteómica.

INTRODUCCIÓN AL TEMA

La Ingeniería genética nos permite manipular directamente el DNA utilizando un conjunto de

herramientas, métodos, técnicas y procedimientos destinados al aislamiento, caracterización,
modificación, clonaje y expresión de ácidos nucleicos. Estas técnicas permiten manipular genes para
obtener proteínas en cantidades mayores de las que se obtienen normalmente e incluso producirlas en
organismos que no poseen los genes necesarios. Esto se ha logrado gracias al descubrimiento de las
endonucleasas de restricción que permiten cortar el DNA por sitios específicos e insertarlo en
plásmidos u otros vectores por medio de la DNA ligasa para, posteriormente, introducirlo en células que
se encargarán de multiplicarlo y/o expresarlo, dando lugar a la proteína deseada. En este tema vamos a
estudiar diferentes técnicas utilizadas rutinariamente en la tecnología del DNA recombinante y su
utilidad en el mundo actual.

El objetivo principal de las herramientas y las técnicas de ingeniería genética es obtener múltiples
copias idénticas de algún gen en poco tiempo. Esto se puede hacer insertando el gen en una bacteria
que lo copie, o bien mediante la reacción en cadena de la polimerasa.

Para obtener fragmentos de DNA que contengan la secuencia de la proteína que queremos producir e
introducirla en las células que lo van a multiplicar hay que seguir una serie de pasos básicos:

1. Aislamiento del fragmento de DNA con el gen o genes de interés. Para ello se corta el DNA
con endonucleasas de restricción, enzimas que reconocen sitios de restricción en el DNA.

Mónica Morales, Raquel Martín Folgar. UNED 2019-2020. Tema 9. 1

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Estos sitios son secuencias de nucleótidos que suelen ser palíndromos, es decir, la secuencia
de nucleótidos se lee igual en ambas cadenas del DNA en dirección 5’ a 3’.
2. Manipulación in vitro del DNA. Tras localizar el gen deseado, cortarlo con la endonucleasa de
restricción adecuada y aislarlo, se debe utilizar la misma endonucleasa de restricción para
cortar el DNA donde se va a introducir nuestro gen, en este caso un plásmido o vector de
clonación. Los vectores de clonación son moléculas de DNA que deben ser capaces de
replicarse. Esto lo consiguen porque en su secuencia incluyen un origen de replicación
adecuado para la célula en la que se van a introducir. Además, un vector tiene que tener una
diana adecuada para la enzima de restricción que se utilice en el aislamiento del gen y, al
menos, un marcador genético que permita asegurarse de que ha entrado en la célula
hospedadora.
3. Tecnología del clonaje. Ambos DNAs (gen y plásmido) se unen por los extremos cohesivos,
que en ambos casos son iguales. Para unir los extremos y que se forme una única molécula de
DNA se emplea la enzima DNA ligasa.
4. Una vez que tenemos el gen clonado dentro del vector de clonación, el siguiente paso es
introducir el plásmido en células bacterianas mediante transformación. Este plásmido será
copiado y transmitido a las nuevas células cuando crezca y se divida. De este modo, podemos
obtener millones de copias de nuestro gen.

La reacción en cadena de la polimerasa (polimerase chain reaction, PCR) es la alternativa más

común a la clonación de genes en plásmidos. Es una técnica que ha revolucionado el trabajo de la
biología molecular. Las aplicaciones tecnológicas y científicas de esta técnica hacen de ella una
herramienta muy útil en genética y biología molecular. La reacción en cadena de la polimerasa permite
conseguir un número de copias de DNA en un número creciente exponencialmente, ya que a partir de
una copia se obtienen dos, a partir de esas dos se obtienen otras cuatro y así sucesivamente. Se trata
de un proceso cíclico que se puede repetir tantas veces como se quiera. Para ello se precisa:

• Una copia del DNA que se quiere amplificar.

• Una DNA polimerasa que resista las altas temperaturas: se utiliza la de una bacteria llamada
Thermus aquaticus (Taq) que habita en fuentes termales y resiste hasta 95ºC.
• Una pareja de cebadores u oligonucleótidos.
• Los cuatro desoxirribonucleótidos.
• Ciclos controlados de aumentos y bajadas de temperaturas.

La reacción de amplificación consiste en la repetición de un ciclo formado por tres etapas:

1. Desnaturalización del DNA molde mediante la elevación de la temperatura. Se separan así las
dos hebras de DNA.
2. Hibridación de los cebadores. Reduciendo la temperatura se induce la unión de los
cebadores a las zonas complementarias del DNA desnaturalizado, lo que permite iniciar la
síntesis de nuevas cadenas de DNA complementarias al molde.
3. Elongación. La DNA polimerasa, resistente al calor, realiza la síntesis de las nuevas hebras
complementarias a las originales del molde a partir de los cebadores.

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Después el ciclo comienza de nuevo, pero ahora hay el doble de copias de DNA que en el ciclo
anterior. El ciclo se puede repetir tantas veces como se desee mientras existan nucleótidos para formar
nuevas hebras, pues la polimerasa no se altera con cada ciclo.

Una vez obtenidas las múltiples copias de DNA por inserción del gen en una bacteria o por PCR, se
puede conocer la secuencia de bases mediante la secuenciación de DNA por el método didesoxi.
Es una reacción de síntesis in vitro que utiliza didesoxirribonucleótidos para interrumpir la replicación
del DNA en cada base de la secuencia. Los fragmentos obtenidos de esta reacción se someten a
electroforesis en gel y después se puede determinar la secuencia de nucleótidos del gen. El
conocimiento de la secuencia completa de un fragmento de DNA clonado es un dato de gran
importancia en sí mismo (por ejemplo, para la comprensión de ciertos defectos genéticos), pero
también resulta fundamental para continuar con el trabajo experimental (por ejemplo, mapas de
restricción para poder clonar o manipular el gen).

Una solución a las enfermedades genéticas es la terapia génica, que intenta aplicar la tecnología de la
ingeniería genética para sustituir el gen alterado causante de una enfermedad por el gen normal y así
lograr que se exprese en el momento adecuado para paliar la enfermedad. Para esto es necesario
primero conocer el gen defectuoso. Para encontrar el/los gen/genes asociado/s a una enfermedad los
investigadores comienzan con un mapa genético. De esta forma, si existen marcadores del mapa que
solo se encuentran en individuos con un fenotipo distinto, es probable que el gen responsable de la
enfermedad esté cerca del marcador. En segundo lugar, es necesario disponer de una técnica que
permita introducir el gen normal en las células o tejidos del individuo y que el gen se exprese de forma
normal. La administración de genes puede hacerse de distintas formas, dependiendo de las especies
implicadas. En humanos, el DNA puede ser introducido utilizando los métodos virales, que utilizan las
estrategias utilizadas por los virus para introducirse en las células. El introducir genes ajenos en
personas es complicado y conlleva grandes problemas de seguridad. En cambio, la ingeniería genética
de plantas de cosecha es mucho más sencilla, algunas bacterias que infectan a las plantas tienen
plásmidos que integran sus genes en el genoma de la planta huésped. En estos plásmidos se
introducen genes que mejoran la calidad nutricional de las cosechas, pudiendo hacerlas resistentes a
los herbicidas o capaces de producir insecticidas.

Aunque la terapia génica no ha conseguido los objetivos esperados, la ampliación de los conocimientos
hace pensar que incrementará su importancia en un futuro próximo.

La secuenciación, interpretación y comparación entre genomas completos se denomina genómica. La

genómica proporciona una serie de genes presentes en el organismo. La genómica funcional es la
que se pregunta cuándo se expresan esos genes y cómo interaccionan sus productos. Esto ha
permitido la secuenciación del genoma de diferentes especies, entre ellas el del hombre. Los datos
obtenidos en los proyectos de secuenciación de genomas se están usando actualmente para el
desarrollo de nuevas vacunas, nuevas dianas farmacológicas y nuevos marcadores genéticos que
ayuden en la búsqueda de alelos asociados a enfermedades humanas. A partir de la genómica han
surgido campos relacionados, como la proteómica, la transcriptómica y la metabolómica que implican el
estudio de las proteínas, los transcritos de RNA o los metabolitos que se encuentran en una célula o un
organismo en un momento determinado.

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LOS OBJETIVOS ESPECÍFICOS DE ESTE TEMA SON:

• Herramientas de la ingeniería genética:

o Endonucleasa de restricción
o DNA ligasa
o Transcriptasa inversa
• Tecnología del DNA recombinante.
• Reacción en cadena de la polimerasa: fundamentos, etapas y variables a tener en cuenta.
• Secuenciación del DNA.
• Localizar y manipular genes asociados a enfermedades. Terapia génica.
• Genómica
• Proteómica

MATERIAL ADICIONAL EVALUABLE:

-Presentación de Power Point: Tema 9. Ingeniería génica y biotecnología, disponible en el curso virtual
de la asignatura.

BIBLIOGRAFÍA BÁSICA:

Libro adaptado para la UNED (3era edición):

ISBN: 9788478291212
Título: FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA (3era edición)
Autor/es: Freeman, Scott;
Editorial: PEARSON-UNED

- Capítulo 19. Análisis e ingeniería genética.

- Capítulo 20. Genómica

Libro adaptado para la UNED (5a edición):

ISBN: 978-84-9035-477-3
ISBN UNED: 978-84-3626-438-8
Título: FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA (5ª edición)
Autor/es: Freeman, Scott;
Editorial: PEARSON-UNED

- Capítulo 20. Análisis e ingeniería genética.

- Capítulo 21. Genómica y más allá

Libro adaptado para la UNED (6a edición):

ISBN: 978-84-9035-576-3
Título: FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA (6ª edición)

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Autor/es: Freeman, Scott;

Editorial: PEARSON-UNED

- Capítulo 20. La revolución molecular: biotecnología y más allá

- Biohabilidad 10. Herramientas y técnicas de biología molecular

BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA:

ISBN: 9788478290987
Título: BIOLOGÍA (3ª)
Autor/es: Freeman, Scott;
Editorial: PEARSON ADDISON-WESLEY

ISBN: 9788479035235
Título: INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA CELULAR (2008)
Autor/es: Alberts, Bruce; Bray, Dennis; Hopkin, Karen;
Editorial: EDITORIAL MÉDICA PANAMERICANA

ISBN: 9788479039981
Título: BIOLOGÍA (7ª)
Autor/es: Reece, Jane; Campbell, Neil;
Editorial: EDITORIAL MÉDICA PANAMERICANA

ISBN: 9789500604239
Título: BIOLOGÍA (6ª)
Autor/es: Curtis, Helena; Barnes, Sue N;
Editorial: EDITORIAL MÉDICA PANAMERICANA

ISBN: 9789701063767
Título: BIOLOGÍA (8ª)
Autor/es: Solomon, Eldra Pearl;
Editorial: MCGRAW-HILL - INTERAMERICANA

DIRECCIONES EN INTERNET:

Para aquellos estudiantes que no hayan cursado asignaturas de biología en el bachillerato o quieran
actualizar sus conocimientos, se recomienda el CURSO CERO de BIOLOGÍA, cuyos contenidos son
accesibles a través de la siguiente página web:
http://ocw.innova.uned.es/biologia/

Problemas sobre tecnología del DNA recombinante.

http://www.biologia.arizona.edu/molecular_bio/problem_sets/Recombinant_DNA_Technology/recombinant_
dna.html

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Actividad con el DNA de la Familia Blackett.

http://www.biologia.arizona.edu/human/activities/blackett/introduction.html

Fundamento de PCR y RT-PCR.

http://www.biorom.uma.es/contenido/UIB/pcresp/index.html

Animaciones de diferentes técnicas de biología molecular (PCR, secuenciación, etc.).

http://www.medmol.es/tecnicas.cfm

Extracción de DNA.
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/

Electroforesis en gel de agarosa.

http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/

Técnicas de biología molecular.

http://www.dnai.org/b/index.html

Lectura recomendada sobre terapia génica.

http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/tergen-1.htm
http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/tergen-2.htm

PREGUNTAS Y ACTIVIDADES PARA GUIAR EL ESTUDIO:

1. Explique brevemente en qué consiste la reacción en cadena de la polimerasa.

2. Defina brevemente:
• Cromosoma bacteriano artificial (BAC):
• Elementos de transposición:
• Vector de clonaje:
• PCR:

3. ¿Qué es necesario para realizar una PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)?

4. Explique de manera breve qué medios emplearía para clonar un gen y poder introducirlo en una
bacteria.

5. ¿Qué es una enzima de restricción? ¿Qué utilidades tiene?

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