TEMA 16: INGENIERÍA GENÉTICA

ÍNDICE

16.1 Biotecnología e ingeniería genética.

16.2 Obtención del ADN.
16.3 Clonación del ADN.
16.4 PCR.
16.5 Secuenciación y genómica.
16.6 Ingeniería genética.
16.7 Proyecto genoma. Bioética.

16.1 BIOTECNOLOGÍA E INGENIERÍA GENÉTICA

Biotecnología: uso de organismo o de sus componentes para obtener productos útiles.

El primer uso se basaba en la fermentación anaeróbea.

El paso de la biotecnología a la ingeniería genética, y su desarrollo, se llevó a cabo mediante la técnica

del ADN recombinante.

Ingeniería genética: conjunto de técnicas que permiten obtener y manipular el ADN.

Los organismo que han sido modificados por ingeniería genética se denominan transgénicos.

16.2 OBTENCIÓN DEL ADN

TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

ADN recombinante: ADN formado por diferentes secuencias que estarían separadas originalmente.

Comienza cortando el ADN por sitios concretos y se une a otro ADN, formando el ADN recombinante.

Esto se lleva a cabo por enzimas de restricción que reconocen secuencias palindómicas (con su cadena
complementaria) del ADN (secuencias de restricción) y las corta.

La enzima puede hacer 2 tipos de cortes en los extremos:

- Romos -> extremos iguales.

- Extremos adhesivos -> tienen bases sin unir (libres).

La misma enzima reconoce solo una secuencia determinada, que se da también en el plásmido al que
también realiza un corte adhesivo, permitiendo que se unan sus extremos con los del ADN (son
complementarios, pues se corta el de la misma forma).
Los fragmentos con extremos adhesivos son complementarios y se unen mediante puentes de H
(débiles).

Cuando se unen actúa una ADN ligasa que forma enlaces fosfodiester y une las cadenas formado el ADN
recombinante.

RENATURALIZACIÓN E HIBRIDACIÓN

Es importante en el diagnóstico de enfermedades.

Se basa en desnaturalizar la cadena de ADN, mediante la subida de temperatura o pH y separar las 2

cadenas complementarias sin variar su composición (estructura primaria).

Luego cuando ya están separadas se añade el ácido nucleico que se quiere estudiar.

Si las el ácido nucleico es complementario a alguna de las cadenas, se unen al enfriar la mezcla
lentamente, renaturalización.

Se obtiene híbridos que indican la similitud entre el ADN distintos.

Las hibridaciones se producen entre ADN-ADN, ADN-ARN o ARN-ARN.

SÍNTESIS DE UN ADN COMPLEMENTARIO

Consiste en obtener una molécula de ADN a partir de un ARN m.

Este proceso lo realiza la retrotranscriptasa (enzima) que a partir de una cadena de ARN m forma una
cadena de ADN.

Se le añade a la mezcla donde se encuentra el ARN m una secuencia poli-T que se une a la cola de poli-A y
actúa como cebador.

Al cebador (poli-T) se une la retrotranscriptasa y comienza a formar la cadena de ADN.

Cuando llega al final de la cadena se añade sosa y se destruye el ARNm y al final de la cadena de ADN se
forma un lazo que sirve como cebador.

Al lazo se une una ADN polimerasa I que termina de formar la doble cadena de ADN.

Posteriormente se añade la nucleasa para eliminar el lazo y formar el ADNc (complementario), que solo
contiene información para formar una proteína determinada.
16.3 CLONACIÓN DEL ADN

La clonación se basa en producir múltiples copias del ADN que nos interesa en el interior de un
organismos se habla de la clonación celular.

Se necesita un ser vivo que cumple varias características:

- Crecimiento rápido.
- No patógeno.
- Fácilmente manipulable y estudiado.
- Organismo que facilite la entrada del vector.

Los principales organismos de clonación son la Escherichia coli (bacteria) y la Saccharomyce cereviseae
(levadura).

Para transferir el ADN se utilizan vectores de clonación en leños que se incorpora el gen de interés.

Los vectores deben tener un origen de replicación (oriC) y uno o varios genes marcadores.

VECTORES

Los principales vectores son:

- PLÁSMIDOS -> pequeños cromosomas circulares de doble cadena y tienen capacidad para
replicarse independientemente.

- VIRUS BACTERIÓFAGO -> virus específico de bacterias, los virus pueden introducir su ADN en
en la bacteria que lo incorpora a su ADN.

- CÓSMIDOS -> ADN sintético que pueden actuar en ocasiones como plásmido y en otras como
virus bacteriófogo.

- CROMOSOMAS ARTIFICIALES -> fragmentos de ADN de doble cadena que contiene varios
genes (como un plásmido grande).
MÉTODO DE CLONACIÓN DE UN GEN HUMANO

1. Selección de un vector con marcadores.

2. Aislamiento del gen humano y del plásmido, se utiliza la misma enzima de restricción para
generar los mismos extremos adhesivos.

3. Se mezclan los fragmentos del gen con el vector, se añade la ADN ligasa que los une por los
extremos adhesivos formando el ADN recombinante.

4. Se mezcla el plásmido con las bacterias (algunos plásmidos tienen el gen y otros no lo
incorporan).

Para detectar si la bacteria tiene un plásmido o no, se introducen plásmidos resistentes a los
antibióticos y luego otro marcador para saber si los los plásmidos que han entrado tienen el
gen de interés.

5. Siembra de bacterias y reconocimiento de las que tengan ADN recombinante.

El poder formar seres vivos con genes de una especie permite formar genotecas (colecciones de clones
que contienen fragmentos del ADN obtenidos de una especie).

Las genéticas pueden representar el genoma completo de un individuo, un solo cromosoma o el

conjunto de genes transcripcionalmente en un único tipo celular.

IDENTIFICACIÓN DE CLONES MEDIANTE SONDAS

Para reconocer si una bacteria tiene un gen o no se utiliza una cadena de ADN reactivo complementaria
al de estudio, que luego mediante la renaturalización e hibridación se deduce si lo tiene incorporado o
no.

Si la cadena se une es que tienen el gen, si por el contrario no lo hacen significa que la bacteria no ha
incorporado el gen.

Cuando se aíslan las bacterias de interés se realizan cultivos (sobre una placa Petri) donde solo se
encuentran bacterias con el gen.

Las sondas son pequeños oligonucleótidos de cadena sencilla, formados por unos 20 nucleótidos que se
hibridán.
16.4 PCR

PCR: (reacción en cadena de la polimerasa) permite amplificar fragmentos de ADN, se trata de una
clonación acelular por medio de la ADN polimerasa.

Margarita Salas mediante el bacteriófago phi29 aisló una ADN polimerasa, que sirvió como base para las
futuras investigaciones y establecimiento de la técnica de la PCR.

Actualmente se usa la tag polimerasa es una ADN polimerasa que actúa a temperaturas elevadas.

CICLO DE LA PCR

Se necesita ADN (que se quiere amplificar), cebadores (complementarios al ADN de interés),

nucleótidos, ADN polimerasa y el termociclador (máquina que cambia la temperatura de forma
controlada).

1. DESNATURALIZACIÓN -> se desnaturaliza el ADN elevando la temperatura hasta 95ºC y

haciendo que se separen las cadenas de ADN.

2. ANILLAMIENTO -> se baja un poco la temperatura (55-65ºC) para que se unan el cebador y al
ADN.

3. ELONGACIÓN -> a unos 72ºC, se une la ADN polimerasa (tag polimerasa) y forma la nueva
cadena de ADN.

Cada ciclo tiene una duración de unos 5 min y se repite continuamente hasta tener una gran cantidad
que nos permita el estudio de ese fragmento de ADN.

Esta técnica se aplica en la ampliación del ADN principalmente.

16.5 SECUENCIACIÓN Y GENÓMICA

Secuenciación: conocer el orden de los nucleótidos de una cadena de ADN o ARN.

Se realiza mediante el método de nucleótidos didesoxi (nucleótidos sin el -OH del extremo 3’),
desarrollada por Sanger.

MÉTODO DE NUCLEÓTIDOS DIDESOXI

Se añaden nucleótidos didesoxi marcados radioactivamente y se juntan con otros nucleótidos normales.

Se intenta replicar una cadena de ADN, mediante una ADN polimerasa.

Se forman cadenas de diferentes tamaños que se mete en una cromografía que va separando por
tamaños permitiendo ver la secuencia pues ven a que nucleótido pertenece cada banda, pues están
marcados radioactivamente.

Se cortan al azar las diferentes cadenas y como hay mucha cantidad de ADN da todas las posibilidades
posibles y la distancia entre las bandas debe ser igual, si no falta algún aminoácido por detectar.

Después de la cromatografía se realiza una espectografía, obteniéndose un espectrograma.

Con este método d se ha secuencia el genoma humano (conjunto de genes de un organismo).

GENÓMICA

A partir del genoma, se ha desarrollado la genómica, estudio de un organismo en su conjunto.

La genómica identifica los genes, su regulación, el ARN y los productos.

ÁREAS DE LA GENÓMICA
- ESTRUCTURAL -> estudio de la secuencia de nucleótidos.
- FUNCIONAL -> estudia se funicópn biológica, regulación y productos de cada gen.
- COMPARATIVA -> comparación de los genemonas de 2 individuos o 2 especies.

La genómica ha conseguido formar 2 tipos de ratones:

- Ratones knock-out (KO) -> a los cuales de les desactivan genes de manera controlada.
- Ratones knock-in -> a los cuales se les activan genes de manera controlada.

Se realizan en ratones porque tienen genes ortólogos (genes comunes entre varias especies) y viendo
como reaccionan estos genes se ve el efecto que tendrían variaciones en ellos sobre los seres humanos.
En la genética está desarrollando la rama de la proteómica, que estudia el proteoma (conjunto de
proteínas de una especie).

INGENIERÍA GENÉTICA

Conjunto de técnicas que permiten manipular, transferir, activar y desactivar genes.

APLICACIONES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA

- Obtención de medicamentos (insulina).
- Medicina forense: secuenciación de ADN para reconocimiento de personas.
- Clonación terapéutica: formar tejidos.
- Terapia génica: varias material genético ara prevenir enfermedades genéticas (eugenesia).
- Diagnostico de enfermedades.

INGENIERÍA GENÉTICA EN GANADERÍA

Mejorar la producción o conseguir alguna característica concreta:

- Resistencia de enfermedades (disminuye la mortalidad).

- Aumento de la productividad: crecimiento más rápido o un mayor tamaño.
- Clonación reproductiva para mantener unas características.
- Obtención de sustancias mediante el cambio de unos genes determinados.
- Clonación terapéutica: generar embriones que se usen en terapia.

INGENIERÍA GENÉTICA EN AGRICULTURA

Aumentar la producción y resistencia:

- Resistencia a plagas y herbicidas.

- Obtención de sustancias: fabricación de medicamentos de manera natural.
- Mejora del producto.

INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDIOAMBIENTE

Hay 2 ramas:

- BIORREMEDIACIÓN: generar un organismo que destruiría algún contaminante.

- BIOADSORCIÓN: microorganismos modificados capaces de absorber ciertos metales pescados

que contaminan el suelo.
16.7 PROYECTO GENOMA.BIOÉTICA

Proyecto genoma: proyecto que tenía como objetivo secuenciar el genoma humano y elaborar un mapa
físico con la posición de todos sus genes, al finalizarlo se obtuvieron diversas conclusiones:

- En humanos había entre 20.000-25.00 genes codificantes de proteínas (40% genes no tienen
función conocida).

- Los seres humanos somos idénticos en un 99,9%, las variaciones son en pares de nucleótidos
simples (SNP).

- La mayor parte del ADN es no codificante.

Cuando se terminó el proyecto genoma se desarrollaron nuevos proyectos genómicos, con el fin de
conocer el funcionamiento del genoma:

- PROYECTO 1000-GENOMA -> secuenciación del genoma de 1000 individuos de diferente origen
y compararlos para examinar la variación en los SNP.

- PROYECTO HAPMAP -> búsqueda de los SNP más frecuentes, es decir, en los que se produce un
mayor número de variaciones.

- PROYECTO ENCODE -> busca el estudio del ADN no codificante, es decir, su funcionamiento.

BIOÉTICA

Bioética: estudio sistemático de la conducta humana en el campo de ciencias biológicas y la atención de

la salud, mediante el examen de los valores y principios morales.