GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021

LABORATORIO Versión: 4

Carrera: Bioquímica - Farmacia

Sede/Subsede: Oruro
Asignatura: Microbiología II
Código: BYF 610 Página 1 de 6
Nivel: 6to
Nº de horas prácticas: 3hrs

Unidad del Programa Analítico: INTERACCIÓN HUÉSPED-MICROORGANISMO

Práctica Nº 1
TÍTULO DE LA PRÁCTICA: TINCION DE GRAM

1. Objetivo/Competencia.
- Prepara extendidos
- Realizar coloraciones: simples, diferenciales
- Realiza de tinciones de Gram
- Agrupa las bacterias por su tamaño y forma y coloración
- Diferenciar que tipos de muestras se utilizan para cada coloración.
- lnterpretar y evaluar correctamente los resultados obtenidos en la coloración y discernir si la
coloración fue bien realizada.

2. Conocimientos previos.

La diferencia bioquímica tanto cualitativa como cuantitativa, en las paredes de las bacterias Gram (+) y Gram (-)
determinan el fundamento de la Tinción de Gram.
Las bacterias se clasifican en Gram positivas y en Gram negativas de acuerdo a los componentes químicos de su
pared celular. Las Gram positivas poseen una pared celular poco permeable y resisten la decoloración. Las Gram
negativas poseen una pared celular más permeable, se decoloran y luego adquieren la coloración de la safranina.
La coloración Gram consiste en una técnica de tinción que utiliza 4 componentes: un colorante básico (cristal
violeta), un mordiente (lugol), un decolorante (alcohol cetona) y un colorante de contraste (fucsina básica o
safranina).

3. Material, equipo e insumos.

- E.P.P.
- Microscopio de laboratorio.
- Alcohol 96%
- Aceite de Inmersión
- Portaobjetos
- Mechero Bunsen
- Asa metálica de siembra con loop
- Solución Fisiológica en Gotero
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4. Técnica o Procedimiento.
a. Preparación y fijación de Frotis Bacterianos

Los frotis de cultivos líquidos se deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio, que al quemarse darán
interferencias en las observaciones y los de colonias de medios sólidos, se fijan generalmente con calor.
Realización de la extenslón
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Realización del Extendido:

- Producto líquido: Depositar en el centro de un portaobjetos una pequeña cantidad del producto a
examinar y extenderlo con la ayuda de un asa de platino o una pipeta de modo que la extensión sea lo
más fina y homogénea posible. Un producto denso puede ser diluido antes ligeramente.

- Cultivo en medio sólido: depositar en un portaobjetos una gotita de agua ó solución salina estéril y
disociar en ella una pequeña cantidad de cultivo. Extender para obtener un frotis fino y homogéneo.

- Secado
Dejar secar por sí solo el frotis. Se puede acelerar la desecación calentando ligeramente con un mechero
Bunsen, pero sin calentar jamás brutalmente.

-Fijación
Cuando la extensión esté bien seca, proceder a la fijación. Sólo algunas coloraciones especiales no deben
ir precedidas de una fijación. Él motivo de la misma es hacer adherir el frotis al portaobjetos y fijar la
morfología de las bacterias, células, por coagulación rápida de las proteínas.

Por el calor: Pasar por la llama de un mechero Bunsen 2 a 3 veces contra la parte inferior de la
preparación, que sujetaremos con unas pinzas. Este método debe rechazarse para los productos
patológicos puesto que altera la morfología de los elementos celulares.

Examen de las preparaciones teñidas

Las preparaciones coloreadas se examinan con el objetivo de inmersión (100x) sin usar cubreobjetos.

Depositar sobre el frotis una gota de un aceite especial (aceite de inmersión).

Descender primero el objetivo de 10 x, una vez enfocado pasar al lente de 100 x sumergiéndolo en la
gota, comprobar el enfoque microscópico con el tornillo micrométnco
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5.-Actividades (opcional)

Presentación de Informe o Cuestionario

6.-Referencias Bibliográficas.

-Castro, A. (2014). Bacteriología Médica basada en problemas. (2ª). México D.F, México Ed. El Manual Moderno.
-Carroll, K., Hobden, J., Miller, S., y et al. (2016). Microbiología Médica, Jawetz, Melnick y Adelberg. (27 ed). México
D.F, Ed. McGrawHill.
-Thigoso C. (1994) Bacteriología Básica. (1ra) La Paz, Bolivia, Ed. Huellas pdf
-INLASA (2003) Manual de procedimientos bacteriológicos en sensibilidad y resistencia. Antimicrobiana. (1ra) La
Paz, Bolivia, Ed. Edobol. Pdf
-Henry, J. (2010). Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. España, España. Ed. Marbán.
-Prieto J. (2010). La Clínica y el laboratorio. Interpretación de análisis y pruebas funcionales, exploración de los
síndromes, cuadro biológico de las enfermedades. (21ed). España, España. Ed. Elsevier Masson.
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