MICROBIOLOGA AMBIENTAL 358010

PROTOCOLO DE PRCTICA

Nombre de curso
Cdigo de curso
Crditos del curso
Valor de esta actividad
prctica
Nombre del director de
curso
Correo institucional del
director del curso
Contacto del director de
curso
CEAD al que pertenece
Espacio donde se debe
desarrollar la prctica

Microbiologa Ambiental
358010
3
150 Puntos ( 60 puntos calificados por virtual, 90
puntos calificados por tutor de Laboratorio)
Jorge Alejandro Rodrguez Palacios
Jorge.rodriguezp@unad.edu.co
Telfono fijo y telfono celular
ZCBOY- CEAD Tunja
Laboratorios CEAD o convenios
-

Normas de Bioseguridad en el Laboratorio

Entender las normas de bioseguridad necesarias
para el trabajo en laboratorio.
Identificar los implementos de proteccin
personal.

Tcnicas de aislamiento de microorganismos

Manipulacin de microorganismos en medios de
cultivo.
Recuento de Microorganismos por medio de
diluciones.

Objetivos de la prctica

-Tcnicas de tincin
Coloracin de Gram ( Bacterias)
Tincin de Azul de lactofenol (Hongos)
-

Tcnicas de inters en Ingeniera Ambiental

Filtracin por membrana para coliformes fecales
y E.coli

El estudiante pondr en prctica los conocimientos

adquiridos en el curso, reforzando los temas vistos en
Justificacin de la
el aula virtual, destrezas y habilidades para la
prctica
manipulacin de materiales, equipos, reactivos y
microorganismos.
El estudiante desarrolla destrezas y habilidades para la
Competencias a
manipulacin de materiales, equipos, reactivos y
desarrollar
microorganismos en el laboratorio.
Duracin de la prctica. 8 horas
Mecanismo mediante el A travs de la rbrica de evaluacin la cual va
cual se evaluar la
adjunta al final del presente protocolo, debe ser la
prctica:
misma del aula virtual

METODOLOGA
El componente prctico del curso de Microbiologa Ambiental est dividido en dos
fases, la primera denominada Actividad 3 Experimentacin I, que hace referencia a
la fase que desarrollar cada estudiante de manera individual en el campus virtual
y ser calificado por el tutor virtual.
La segunda fase de la prctica hace referencia a la actividad 4 experimentacin II,
que ser guiada por el tutor de prctica en los distintos laboratorios de la red
nacional de laboratorios.
A continuacin se relaciona la gua de la fase II actividad 4 experimentacin II, para
el tutor de prctica y los estudiantes.

PRACTICA FASE II ACTIVIDAD 4 EXPERIMENTACIN II (Laboratorio)

Los estudiantes deben consultar por su cuenta propia y basada en las referencias
bibliogrficas entregadas en el curso la informacin necesaria para las siguientes
prcticas. El tutor prctico guiar y despejar las dudas a los estudiantes en el
laboratorio
PRACTICA 1- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Los laboratorios de microbiologa estn regidos por normas de seguridad e higiene
que deben cumplirse a cabalidad para garantizar la proteccin contra infecciones
de los estudiantes u otro personal que labora en estas instalaciones, as como
garantizar la calidad de las tcnicas y la confiabilidad de los resultados.

Los estudiantes debern identificar las normas de bioseguridad en el laboratorio una

vez ingresen al mismo.
El tutor prctico dar una breve explicacin sobre las normas con las que cuentan
en el laboratorio donde se est desarrollando la prctica.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
BENSON, HAROLD J. Microbiological applications: Laboratory Manual in General
Microbiology. McGraw Hill. U.S.A. 1998.
COLLINS, C. H. and M LYNE, PATRICIA. Traduccin del ingls por Jos Mara
Tarazona
Vilas. Mtodos microbiolgicos. Editorial ACRIBIA, S. A. ZARAGOZA (Espaa).
1989.
OMS Organizacin Mundial de la Salud. Manual de bioseguridad en el laboratorio.
Ginebra. 2005.
IMPORTANTE: LOS ESTUDIANTES DEBEN LEER Y CUMPLIR LAS NORMAS
DE LABORATORIO, EL INCUMPLIMIENTO DE LAS MISMAS ACARREAR LA
SANCIN DE LA NOTA PRCTICA.
PRCTICA No. 2
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE
MICROBIOLOGIA
Realizar una descripcin de los materiales que utilizarn en la prctica, esto incluye
equipos y materiales de vidrio. Realizar un boceto de cada uno y una breve
descripcin.

PACTICA No 3
MTODOS DE SIEMBRA PARTE A
La inoculacin de medios de cultivo para la recuperacin, mantenimiento y/o
aislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental e importante.
Debe tenerse cuidado con las tcnicas de siembra microbiana para evitar en lo
posible la contaminacin por otros microorganismos diferentes al deseado.
MATERIALES
1. Microorganismos previamente aislados ( Bacterias y hongos)
2. Agar nutritivo en caja de Petri
3. Agar PDA
4. Asa redonda
5. Gradilla
6. Mechero

7. Incubadora
8. Vinipel
9. Marcador de vidrio
PROCEDIMIENTO
1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de
trabajo.
2. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento para el caso de
bacterias.

3. Para el caso de Hongos tomar con el asa recta el microorganismo y por puncin
sembrar en la caja de Petri con medio PDA.
4. Incubar a 37 por 24 horas para bacterias y a 25 por 8 das para hongos.
5. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y
envolverla en papel vinipel.
.
6. Desinfectar el rea de trabajo, apagar el mechero y entregar el material
MTODOS DE SIEMBRA PARTE B
En esta etapa los estudiantes utilizarn una de las tcnicas de siembra ms usadas
en laboratorio, que permite el recuento de microorganismos en una muestra como
aguas, suelos etc. La tcnica a realizar en este punto hace referencia a los
recuentos de microorganismos utilizando diluciones seriadas en base 10, donde se
dispersa la poblacin de microorganismos permitiendo conocer el nmero
aproximado en una muestra.
MATERIALES
1. Muestra de suelo o agua residual.
2. Frascos con solucin salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
3. Tubos tapa rosca con 9 ml de solucin salina o agua peptonada al 0.1% (6
tubos)

4. Cajas de Petri con agar Nutritivo, Chromocult o King B.( 6 cajas)

5. Pipetas de vidrio o pipeta automtica. ( 100 microlitros y 1000 microlitros)
6. Rastrillos.
PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solucin salina o
agua peptonada.
2. Realizar diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-6
3. Tomar las 6 cajas de Petri con agar y marcar 2 con dilucin 10 2, 2 cajas con
dilucin 104, 2 cajas con dilucin 106
4. Sembrar por duplicado las diluciones 10-2 10-4 10-6 tomando 0,1 ml de cada
dilucin por superficie, con ayuda del rastrillo homogenizar la microgota sobre
la superficie del agar sin romperlo.
5. Incubar por 24 horas a 37C y realizar el recuento.
6. Realizar los clculos donde se toman las diluciones donde se encuentren
entre 30 y 300 colonias para realizar el recuento, sacar promedio y aplicar la
frmula: Nmero de colonias x Factor de dilucin x 10 (factor de correccin)
El resultado es informado en UFC ( unidades formadoras de colonia)/ g o ml
de la muestra.

PRACTICA 4. TECNICAS DE TINCIN

Parte A Tincin de Gram para bacterias.
Para poder observar al microscopio los distintos tipos de microorganismos existen
distintos tipos de coloraciones o tinciones que tienen afinidad con ciertas partes de
la clula y permite diferenciarlas y observar algunos rganos de las clulas. Para el
caso de bacterias la tcnica ms usada es la tincin de Gram, donde se permite
clasificar las bacterias en Grampositivas (violetas) y Gramnegativas (Fucsias).
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)
2. Colorantes para tincin de Gram (Cristal violeta, lugol. Alcohol acetona,
Fucsina de Gram)
3. Aceite de inmersin
4. Microscpio.
5. Asas redondas
PROCEDIMIENTO

1. Tomar las colonias de bacterias que los estudiantes sembraron

anteriormente ( tcnicas de aislamiento) y realizar un frotis en una lmina
portaobjetos, colocando una gota de agua y con ayuda del asa redonda
homogenizar para expandir el frotis en la lmina.
2. Dejar secar al aire libre la muestra, una vez se encuentre seca, fijar al calor
la muestra en el mechero ( se coloca 3 veces rpidamente sobre el fuego la
lmina)
3. Una vez se encuentra la muestra fijada se procede a colocarle varias gotas
de cristal violeta, dejando por un minuto y luego lavar en el grifo (solo para
quitar el exceso de colorante.
4. Colocar unas gotas de lugol, dejar por un minuto y lavar.
5. Colocar una gota de alcohol acetona, dejar por 15 minutos, lavar.
6. Colocar unas gotas de Fucsina de Gram, dejar por un minuto, lavar y dejar
secar la muestra.
7. Una vez se encuentra seca la muestra agregar una gota de aceite de
inmersin y observar en el microscpio en el objetivo de 100x.
8. Observar las morfologas ( bacilos, cocos, Grampositivos, Gramnegativos)

Parte B Tincin de Azul de Lactofenol para hongos.

Para ver la morfologa de los hongos filamentosos se utiliza la tincin de azul de
lactofenol, la cual permite contrastar y ver las diferentes partes de un hongo ( hifa,
conidios, septos, etc)
MATERIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)

Azul de lactofenol.
Microscpio
Cinta transparente.
Asas rectas o agujas de diseccin.
Lminas y laminillas.

PROCEDIMIENTO
1. Tome con una cinta o con las agujas de diseccin un trozo del hongo ( tomar
micelio, parte algodonosa)
2. En una lmina portaobjetos colocar una gota de azul de lactofenol.

3. Si tom la muestra con aguja de diseccin, ponerla en contacto sobre la gota

e ir desglosando las hifas, colocarle una lmina portaobjetos, si utiliz la cinta
transparente slo debe colocarla sobre la gota sin necesidad de laminilla
cubreobjetos.
4. Llevar al microscpio y observar en el objetivo de 40x.
5. Observar las estructuras y anotarlas para el informe.

PRACTICA 5 ALGUNAS TECNICAS APLICADAS EN MICROBIOLOGA

AMBIENTAL.
La microbiologa enfocada en la parte ambiental ha permitido diagnosticar e
implementar nuevas alternativas para el desarrollo agrcola, en el mbito de la
ingeniera ambiental y la industria.
Con los conocimientos adquiridos en el curso y teniendo un conocimiento bsico de
la microbiologa, los estudiantes realizaran las siguientes pruebas que actualmente
se utilizan a nivel mundial y especficamente en el pas.

INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES

Los indicadores de contaminacin son utilizados para medir el grado de
contaminacin o afectacin de cuerpos de agua, agua de consumo etc, en Colombia
para el caso de aguas potables la normatividad exige un valor de 0 unidades
formadoras de colonia en 100 ml de agua muestreada para el caso de coliformes
totales como indicador.
Para esta prueba si el laboratorio de su CEAD, UDR, CERES no tiene los elementos
necesarios para realizarla, debern consultar cual es la normativa vigente y qu
otros indicadores (microorganismos) se utilizan en el mbito de contaminacin de
aguas.
Materiales
1.
2.
3.
4.

Equipo de filtracin por membrana (equipo millipore de plstico)

Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para filtracin.
Jeringa (para hacer vaco)
Cajas de Petri con agar Chromocult para coliformes.

Procedimiento
1. Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inocular con una asada
de cultivo de E. coli, agitar muy bien.

2. Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtracin y

con la ayuda de la jeringa realizar el vaco para permitir el paso del
agua de un lado al otro.
3. Con unas pinzas estriles retirar la membrana y colocarla sobre el
agar Chromocult, la parte de la cuadrcula debe ir mirando hacia
arriba.
4. Incubar por 24 horas a 37 c y observar el nmero de colonias con las
caractersticas tpicas de E. coli y coliformes totales (consultar la
coloracin en este medio, se encuentra por internet)
NOTA: SI NO CUENTAN CON LOS MATERIALES DEBEN CONSULTAR LA
NORMATIVIDAD Y CMO SE INFORMAN LOS RESULTADOS, DEBEN
REALIZAR LOS DIBUJOS CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD.

PRODUCTOS A ENTREGAR
Los estudiantes deben entregar un informe de la prctica realizada con las
siguientes condiciones:
El documento debe tener la estructura bsica de un informe de laboratorio, una
breve introduccin sobre la prctica, el procedimiento realizado, las fotografas o
bocetos de lo observado, conclusiones y referencias bibliogrficas con normas APA.
No debe exceder el nmero de 8 pginas, la forma de entrega deben coordinarla
con el tutor de prctica.

EVALUACION
#

tem
evaluado

Desarrollo del
Quiz

Valoracin
baja

Valoracin
Media
El estudiante
present
el
El estudiante desarrollo de
no present las preguntas,
el desarrollo pero
estas
delas
carecen
de
preguntas
argumentos o
profundizacin.

Valoracin
Alta
El
estudiante
present
el
desarrollo
de
todas
las
preguntas
de
manera
argumentada.

Mximo
Puntaje

10

Puntos =0

Puntos= 5

Puntos=10

El grupo no
tuvo en
cuenta las
normas
bsicas para
construccin
de informes

Aunque el
documento
presenta una
estructura
base, la misma
carece de
algunos
elementos del
cuerpo
solicitados

El documento
presenta una
excelente
estructura

Puntos=0

Puntos= 5

Puntos= 10

Estructura del
Informe

Redaccin y
ortografa

El
documento
presenta
deficiencias
en redaccin
y errores
ortogrficos
Puntos= 0

Referencias

El
documento
no presenta
referencias
bibliogrficas
Puntos= 0

5
Asistencia y
participacin al
laboratorio

El estudiante
no asisiti al
laboratorio
en su
totalidad

No hay errores
de ortografa y
el documento
presenta una
mediana
articulacin de
las ideas y la
estructura de
los prrafos
Puntos= 5

N.A

N.A
El estudiante
asisti al
laboratorio y
las sesiones
programadas,
pero no
particip

10

La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas
y el cuerpo del
texto es
coherente en
su totalidad.
Puntos= 10
El documento
presenta
referencias
bibliogrficas
segn normas
APA
10
El estudiante
asisti a las
sesiones en su
totalidad y
particip
activamente

10

10

activamente en
las msmas.
Puntaje=0

Puntaje= 20

Puntos= 50

Total de puntos posibles

90

ACTIVIDADES DEL TUTOR PRCTICO

METODOLOGA
El tutor de prctica, debe entrar en contacto desde el inicio del perodo
acadmico con el director de curso, con el objetivo de conformar la red de
tutores, la cual se trabajar desde los correos institucionales.
En el laboratorio el tutor deber garantizar que se cuenten con parte o la
totalidad de los materiales descritos en la gua para desarrollar los puntos.
EL INFORME DE LABORATORIO SER ENTREGADO AL TUTOR PRCTICO,
EL TUTOR PRCTICO REALIZAR LA EVALUACIN CORRESPONDIENTE A
LA PRCTICA, L SER EL ENCARGADO DE EVALUAR Y ENTREGAR LOS
PUNTOS CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD AL DIRECTOR DEL CURSO,
TENIENDO EN CUENTA LO DESCRITO EN LA RUBRICA DE CALIFICACIN.
El tutor prctico deber realizar un Quiz para evaluar los conocimientos adquiridos
en la prctica. La metodologa y las preguntas son de libre autonoma del tutor y
debern ceirse a la rbrica de calificacin adjunta.
1. Seleccin del sitio de prctica
El tutor debe coordinar con su zona, CEAD, UDR, CCAV la disponibilidad de
laboratorios.

2. Aseguramiento logstico para el desarrollo de la prctica.

El tutor prctico debe cerciorarse con el personal de laboratorio sobre la
disponibilidad de los materiales necesarios para la realizacin del mismo.
3. Seguimiento de la prctica
El tutor debe llevar a cabo el rol de orientador y verificar el desarrollo de la
prctica acorde a la gua suministrada y a la rbrica de evaluacin.
Adicionalmente debe evaluar el proceso de aprendizaje de los estudiantes
por medio del quiz, igualmente debe coordinar con los estudiantes la
recepcin del informe prctico, su calificacin y retroalimentacin.

4. Evaluacin
El tutor realizar la evaluacin de acuerdo a la rbrica.

PRODUCTOS A ENTREGAR

El tutor de prcticas deber elaborar un informe sobre el desarrollo de las

actividades del componente prctico el cual debe ser entregado al director
de curso. Dicho informe estar compuesto por los siguientes formatos
diligenciados
Formato 1: Datos generales de la prctica
CONTROL Y SEGUIMIENTO AL DESARROLLO
DEL COMPONENTE PRCTICO
Nombre del tutor
Correo del tutor
Contacto del
Telfono fijo y telfono celular
tutor
CEAD al cual
pertenece el
tutor
Curso
Fecha de
Da:_____ Mes: _______________ Ao:_________
realizacin
Lugar donde se
desarroll la
prctica
Temas
abordados en la
prctica
Materiales y
equipos
empleados en la
prctica
Observaciones

Costo
aproximado

Transporte:
________________________________________
Materiales y equipos: ________________________________

Formato 2: registro de asistencia de los estudiantes a las actividades prcticas

No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25

REGISTRO DE ASISTENCIA DE ESTUDIANTES

A LAS ACTIVIDADES PRCTICAS
NOMBRES
APELLIDOS
CODIGO

FIRMA

Nombre: _________________________________________
Datos del tutor

Anexos

Cdula: ____________ Firma: ________________________

Correo:
___________________________________________
Telfono fijo: _____________ Celular: __________________
Evidencias del desarrollo de la prctica (Fotografas)

Formato 3: Reporte de calificaciones obtenidas por los estudiantes

REPORTE DE CALIFICACIONES
Curso:
CEAD:
________________________________ _______________________________
__________
_________
Cdigo:__________________________ Fecha:
_______________
_______________________________
Ttulo de la prctica:
_________
_______________________________
Tutor:
________________________________ _______________________________
________________
__________
Firma: __________________ Cdula:
________________
Puntaje del tem de la
Justificacin de la
rbrica de evaluacin
N
calificacin
obtenido
o
otorgada al
Nombre Apellid Cdi
To
trabajo
1 2 3 4 5
s
os
go
tal
1
2
Si ustedes tienen ms de
3
5 tems en la rbrica de
4
evaluacin, deben
5
colocar ms columnas en
6
7
esta parte
8
9
1
0
1
1
1
2
1
3
1
4
1
5
1
6
Muchos xtitos!!!!