Programa Para Análisis Microbiológicos

LAB-PG-001
PROCEDIMIENTO RECUENTO MESOFILOS AEROBIOS
(agua recreacionales)
CODIGO: - LAB-PR-0025 VERSION: 03 FECHA: 20-04-2023 Página 1 de 4

Describir el procedimiento para la determinación del

OBJETIVO: recuento de Mesofilos aerobios, empleando la técnica
de recuento siembra en placa en el laboratorio aguas
recreacionales.
Este procedimiento aplica para el área de
ALCANCE: Microbiología del Laboratorio de Salud en Tus Manos
S.A.S.
LIDER DEL PROCESO: Director técnico.

DEFINICIONES
Mesofilos Aerobio: Los microorganismos Mesofilos, son aquellos que viven en los
límites de temperatura próximos a la de los animales de sangre caliente, es decir
su temperatura óptima se encuentra entre 30 ºC y 37ºC. Y además necesitan la
presencia de oxígeno para su desarrollo.

Las Bacterias Mesofilos aerobios (Heterotróficas) están presentes en todos los

cuerpos de agua y constituyen un grupo de bacterias ambientales de amplia
distribución, éstas son indicadoras de la eficacia de los procesos de tratamiento,
principalmente de la desinfección (descontaminación).

Microorganismo Facultativo: Microorganismo que es capaz de crecer con o sin un

factor ambiental. Ejemplo, un factor ambiental puede ser el oxígeno, es decir, un
microorganismo que puede o no vivir en presencia de este.

Microbiología: La microbiología es la ciencia encargada del estudio y análisis de

los microorganismos, seres vivos pequeños no visibles al ojo humano, también
conocidos como microbios.

Recuento en placa: Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar el

tamaño de la población bacteriana de una muestra. El recuento de
microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una colonia
visible, entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (ufc) a
los efectos de los cálculos.

Recuento en placa en superficie, consiste en la siembra de un volumen conocido

de la dilución de la muestra sobre la superficie de un medio de cultivo en placa
Petri. En este método todas las colonias crecen sobre la superficie del medio.
ASPECTOS GENERALES
La búsqueda de Mesófilos aerobios es el indicador más amplio en microbiología,
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Teléfono: Fijo 888 5730 - Cel. 312 – 418- 35-25 - 318-439-7189
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ya que incluye todos los géneros aerobios y facultativos que crecen en medios
simples a una temperatura entre 20 ºC y 45 ºC. Indica el grado de contaminación y
vida útil de los alimentos, aguas y otros productos en cualquier etapa del proceso
de producción o ambientes, superficies.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
Materiales y equipos

 Marcador de Vidrio

 Pipetas estériles de 5 ml

 Incubadora a 35 ºC +/- 2 ºC.

 Alcohol al 90%

 Toallas de papel

 Briquet o encedor de mechero

 Sporekill

 Mascarillas descartables.

 Guantes

 Placas de Compact Dry TC Mesofilos Aerobios

Muestreo y preservación

 La muestra deber ser recolectada en frasco de polipropileno autoclavable

estéril. No debe llenarse el frasco por completo, dejando una cámara de aire
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DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
para poder homogenizar la muestra antes de procesarla.
 La muestra debe de conservarse a 4 °C hasta ser analizada.
 El periodo máximo de conservación de la muestra en frio es de 6 a 8 horas.

Siembra

Metodología: Recuento ufc/100 ml

Método de ensayo: Ensayo Rto En Placa Sm 9215 (standard methods)

 Prepare área de siembra (LAB-PR-0006 Procedimiento Preparación área de

Siembra)
 Aliste el material a utilizar (encienda los mecheros)
 Verifique que los medios de cultivo a utilizar se encuentran a temperatura
adecuada; no presentan signos de contaminación y que conserva las
características originales de aspecto y color.
 Marque cada una de las cajas Compac Dry TC con la identificación de la
muestra en la sección de memorando.
 Aliste bolsas estériles con pastilla de tiosulfato de sodio
 Colocar la bolsa en un recipiente de plástico previamente desinfectado con
alcohol al 90%
 Bajo mecheros destapar el frasco de polipropileno y depositar en la bolsa
plástica estéril 300 ml de la muestra tomada
 Cerrar la bolsa estéril con tiosulfato de sodio y agitar
 Destape la muestra (bolsa estéril) y tome 1mL con pipeta estéril
 Abra la cubierta de la caja de Compac Dry y deje caer 1 ml de la muestra sobre
la parte central.
 La muestra se dispersa automática y homogéneamente sobre la lámina, y
transforma la lámina seca en un gel en pocos segundos.
 Vuelva a colocar la cubierta sobre la placa
 Invertir las cajas y llevarlas a incubar a 35 ºC ± 2 ºC durante 48 ± 3 horas.
 Realice una prueba control incubando una caja con Medio de Cultivo según el
cronograma establecido.

Lectura e Interpretación De Los Resultados

 Después de la incubación, se realiza el recuento número de colonias

coloreadas en la parte posterior de la placa. Y se registra (LAB-RG-0002
Registro de resultados de análisis Microbiológicos)
 Determine el crecimiento de los microorganismos Mesofilos aerobios, por
formación de colonias.
 Después de la incubación, cuente el número de colonias de color rojo en la
parte posterior de la placa. El papel blanco colocado debajo de la placa le
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DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
ayudará a contar las colonias
 Si las pruebas control no conservan sus características y aspecto original, se
debe descartar el análisis, determinar las causas y registrar el problema.

Reporte De Resultados

Los resultados se deben reportar en la carpeta de registro de muestras, como

unidades formadoras de colonia sobre gramo ó ml (UFC/g; UFC/ml) (LAB-RG-
0002 Registro de resultados de análisis Microbiológicos)
El número de unidades formadoras de colonia se expresa en términos de
Recuento de Mesófilos aerobios por la alícuota de la muestra analizada en
mililitros o gramos, o por el área de la superficie analizada en cm2.

CONTROL DE CAMBIOS

Versión Fecha Motivo del cambio

01 2018/octubre Implementación

02 2020/ agosto Actualización

03 2023/ abril Actualización

REVISIÓ DESCRIPCION DE FECHA DE

REVISO APROBO
N No. CAMBIOS CAMBIO
2018/ Angélica Ernesto
01 Implementación Martínez Mora
octubre
2020/ Angélica
02 Actualización Ernesto Mora
Martínez
agosto
Angélica
03 Actualización 2023/ abril Ernesto Mora Martínez

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