GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021

LABORATORIO Versión: 4

Carrera: Bioquímica - Farmacia

Sede/Subsede: Oruro
Asignatura: Microbiología II
Código: BYF 610 Página 1 de 4
Nivel: 6to
Nº de horas prácticas: 3hrs

Unidad del Programa Analítico: INTERACCIÓN HUÉSPED-MICROORGANISMO

Práctica Nº 2
TÍTULO DE LA PRÁCTICA: Preparación De Agares Especiales (Amihes, A Chocolate, Agar Soft).

- Objetivo/Competencia
- Realiza la preparación de los medios de cultivo (Amihes, A Chocolate, Agar Soft).

- Conocimientos previos.
Los MEDIOS DE CULTIVO que son necesarios para el desarrollo, aislamiento, mantenimiento, reproducción e
identificación de los microorganismos deben proporcionar SUSTANCIAS NUTRITIVAS, presentar un PH
ADECUADO y deben ser ESTÉRILES
¿Cómo podemos garantizar estas cualidades?
A través del Control de calidad, evaluando y documentando el desempeño de todos los aspectos de sus
procedimientos, que demuestren la eficiencia de los medios de cultivo, el funcionamiento de equipos e
instrumentos, la competencia del talento humano y la adecuada funcionalidad de los ambientes.
el laboratorio debe asegurarse que la calidad de los medios de cultivo y reactivos sea apropiada para los
ensayos realizados, por lo tanto, los puntos críticos son:
- La PREPARACIÓN,
- La ESTERILIZACIÓN
- La EVALUACIÓN DE LA CALIDAD
Medio de cultivo es la: Formulación de sustancias en forma líquida, semisólida o sólida que contienen
constituyentes naturales o sintéticos destinados a facilitar la multiplicación o a mantener la viabilidad de los
microorganismos
Medios de cultivo clasificados según su composición

- Medio de cultivo de composición química definida de forma incompleta (agar Soft),

utilizado para evaluar la transformación celular in vitro.
-
Medios de cultivo clasificados por el objeto al que se destinan
Medio de TRANSPORTE
 Conservan y mantienen la viabilidad del microrganismo desde el muestreo hasta el
análisis. (Amihes) Permite la conservación, la permeabilidad de la célula bacteriana.
supervivencia de muchos microorganismos, como:
 Neisseria sp.
 Haemophilus sp.
 Corynebacterium sp.
 Trichomonas vaginalis
 Streptococcus pyogenes
 Streptococcus pneumoniae
 Shigella flexneri
 GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021
LABORATORIO Versión: 4

Carrera: Bioquímica - Farmacia

Sede/Subsede: Oruro
Asignatura: Microbiología II
Código: BYF 610 Página 2 de 4
Nivel: 6to
Nº de horas prácticas: 3hrs

 Salmonella typhi
 Brucella abortus
 Enterobacterias, etc.
 MEDIO DE TRANSPORTE AMIES SIN CARBÓN
Está formulado para mantener la viabilidad de los microorganismos sin un aumento
significativo del crecimiento, siendo no nutritivo, tamponado con fosfato y semisólido.
El Medio de Transporte Amies sin Carbón se recomienda para muestras de garganta,
vagina y heridas.
 MEDIO DE TRANSPORTE AMIES CON CARBÓN se utiliza para recoger, transportar
y conservar especímenes microbiológicos. Está formulado para mantener la
viabilidad de los microorganismos sin un aumento significativo del crecimiento, siendo
no nutritivo, tamponado con fosfato y semisólido utilizado para muestras de garganta,
vagina y heridas.
Medio de ENRIQUECIMIENTO

Medio de enriquecimiento selectivo

Es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo, es una variante del agar sangre.
(Agar Chocolate, que resulta de someter el agar sangre a 80ºC transformándose la
hemoglobina en metahemoglobina adquiriendo el aspecto de chocolate).

3. Material, equipo e insumos.

4. Técnica o Procedimiento.
1. ASPECTOS QUE SE DEBE TENER EN CUENTA EN LA PREPARACIÓN DE
MEDIOS
o Características de la cristalería y otros materiales
o Características del agua.PH 5.5- 7
o Características del medio deshidratado. (que no tenga otro color o grumos)
o Características de los equipos.
 GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021
LABORATORIO Versión: 4

Carrera: Bioquímica - Farmacia

Sede/Subsede: Oruro
Asignatura: Microbiología II
Código: BYF 610 Página 3 de 4
Nivel: 6to
Nº de horas prácticas: 3hrs

o Características del ambiente.

2. Material, equipo e insumos.

- Medios de cultivo
- Cajas Petri
- Tubos
- Autoclve

3. Técnica o Procedimiento.

a) Pesaje:
Seleccionar el medio deshidratado a pesar, realizar los cálculos en la hoja de
protocolo de la preparación.
Seleccionar el material de vidrio matraz que generalmente debe ser el doble del
volumen que se preparara
Marcar con nombre del medio a preparar, volumen total y pH.
Verter el 50% del volumen total de agua destilada, en el matraz
Pesar la cantidad requerida sobre papel estañado haciendo uso de espátulas secas.
Pesar cuidadosamente sin inhalar polvo
La balanza debe estar sobre una mesa adecuada fija
Debe comprobarse la nivelación de la balanza antes de efectuar una pesada
b) Hidratación
El agar pesado en papel estañado, vaciar en el matraz que contiene el 50% de agua
destilada, vaciar el total del agar con la ayuda del agua que falta.
Los medios que contienen gelatina o Agar se deben dejar en reposo por un periodo
de 10 a 15 minutos, con la cantidad suficiente de agua.
Agitar bien hasta cerciorarse que todos los componentes se encuentren formando una
suspensión homogénea. (agitador magnético)
c) Calentamiento
Con la ayuda de una hornilla se procede a disolver el agar calentar hasta ebullición
(dos hervores) la solución adquiere un color transparente. Evitar que se derrame
durante la ebullición o la espuma que se origina.
Colocar el tapón como se aprendió en la practica 4, o dispensar en tubos con la tapa
cerrada a media rosca para el intercambio de gases durante la esterilización.

d) Esterilización
La esterilización de los medios de cultivo debe realizarse empleando calor húmedo en autoclave durante 15
minutos a 121 ºC , el tiempo de esterilización se debe comenzar a contar una vez que se han alcanzado los
121º C. garantizando la libre circulación del vapor de agua.
Un exceso del tiempo de autoclave puede alterar los componentes del medio de cultivo.
 GUÍA DE PRÁCTICA EN SEG-REG-021
LABORATORIO Versión: 4

Carrera: Bioquímica - Farmacia

Sede/Subsede: Oruro
Asignatura: Microbiología II
Código: BYF 610 Página 4 de 4
Nivel: 6to
Nº de horas prácticas: 3hrs

Mantener las tapas de los recipientes desenroscados a media vuelta durante la esterilización para garantizar
el flujo de aire y apretarlos firmemente una vez concluido el proceso.
Evitar el uso de materiales tapados
e) Adición de suplementos
Los suplementos termolábiles se deben adicionar al medio ya enfriado cuando este tiene una temperatura
no mayor de 50º C.
La sangre de carnero utilizada como suplemento debe ser estéril, lo más fresca posible sin adición de
conservativos. Debe ser mezclada con la base a una temperatura que no deberá exceder los 40-45º C.,
luego calentar para obtener agar chocolate.
f) Distribución de los medios de cultivo
En los recipientes de vidrio esterilizado. Distribuir agitando constantemente, de acuerdo a requerimientos.
Caja Petri, tubos e inclinación
Identificar los envases con nombre del medio (abreviado), fecha de elaboración y expiración.
Separar el 5% del total del lote para efectuar el control de esterilidad y PH
g) Conservación de los medios de cultivo
Empaquetar en papel madera y colocar en bolsas de plástico cerrado, identificar los paquetes con el nombre
del medio de cultivo y la fecha de elaboración. Si están en tubos cerrar totalmente identificar
Guardar lo preparado en refrigerador a temperatura de 2-8 ºC

5. Actividades (opcional)

Presentación de informe o cuestionario

6. Referencias Bibliográficas.

- Castro, A. (2014). Bacteriología Médica basada en problemas . (2ª). México D.F,

México Ed. El Manual Moderno.
- Carroll, K., Hobden, J., Miller, S., y et al. (2016). Microbiología Médica, Jawetz,
Melnick y Adelberg. (27 ed). México D.F, Ed. McGrawHill.
- Thigoso C. (1994) Bacteriología Básica. (1ra) La Paz, Bolivia, Ed. Huellas pdf
- INLASA (2003) Manual de procedimientos bacteriológicos en sensibilidad y
resistencia. Antimicrobiana. (1ra) La Paz, Bolivia, Ed. Edobol. Pdf
- Henry, J. (2010). Laboratorio en el Diagnóstico Clínico . España, España. Ed. Marbán.
- Prieto J. (2010). La Clínica y el laboratorio. Interpretación de análisis y pruebas
funcionales, exploración de los síndromes, cuadro biológico de las enfermedades .
(21ed). España, España. Ed. Elsevier Masson.