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INDICE
INTRODUCCIÓN.......................................................................................................................3
OBJETIVO..................................................................................................................................3
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA.............................................................................................3
EXPERIMENTO 1: REACCIÓN XANTOPROTEICA............................................................4
FUNDAMENTO......................................................................................................................4
MATERIALES Y REACTIVOS.............................................................................................4
PROCEDIMIENTO................................................................................................................4
RESULTADOS.......................................................................................................................4
EXPERIMENTO 2: REACCIÓN DEL ÁCIDO GLIOXÍLICO PARA TRIPTÓFANO...........5
FUNDAMENTO......................................................................................................................5
MATERIALES Y REACTIVOS.............................................................................................5
PROCEDIMIENTO................................................................................................................5
RESULTADOS.......................................................................................................................6
EXPERIMENTO 3: REACCIÓN DE BIURET PARA ENLACES PEPTÍDICOS................6
FUNDAMENTOS...................................................................................................................6
MATERIALES Y REACTIVOS.............................................................................................6
PROCEDIMIENTO................................................................................................................7
RESULTADOS.......................................................................................................................7
CUESTIONARIO.......................................................................................................................7
CONCLUSIONES....................................................................................................................10
RECOMENDACIONES...........................................................................................................10
BIBLIOGRAFÍA........................................................................................................................10

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INTRODUCCIÓN

En disolución acuosa, los aminoácidos muestran un comportamiento anfótero,

es decir pueden ionizarse, dependiendo del pH, como un ácido liberando
protones quedando como (-NH3)+, o pueden aparecer como un ácido o base a
la vez. En este caso los aminoácidos se ionizan doblemente, apareciendo una
forma bipolar iónica llamada Zwitterion. Este fenómeno es de suma importancia
tenerlo en cuenta para explicar el comportamiento de las proteínas cuando se
encuentran en un campo eléctrico (electroforesis).

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoléculas, ampliamente

distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de
transporte ya aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos,
factores de coagulación, etc. Esta multiplicación de funciones hace que las
proteínas resulten esenciales para la vida.

En el curso de los experimentos se verán las principales reacciones de

caracterización de los aminoácidos y proteínas.

OBJETIVO
o Caracterizar aminoácidos mediante el uso de reactivos específicos.
o Reconocer mediante la reacción del ácido glioxílico la presencia de triptófano.
o Reconocer mediante reacciones sencillas de coloración compuestos
proteínicos.

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REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

Reacción con la ninhidrina: los grupos amino libres de los aminoácidos, de

los péptidos y las proteínas reaccionan con la ninhidrina a un pH entre 4 y 8,
para dar un compuesto de intenso color azul púrpura. La prueba también es
positiva con aminas primarias y amoniaco pero sin desprendimiento de CO2.
Los aminoácidos prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del
color púrpura con la ninhidrina.

La reacción es muy sensible y es ideal para la detección de aminoácidos en

cromatografía y para su cuantificación mediante técnicas espectofométricas de
las fracciones que se obtienen de columnas cromatográficas.

Reacción xantoproteica: Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático

forman nitro derivadas de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico
concentrado. La fenilanilina, la tirosina y en cierto grado el triptófano, así como
todas las proteínas que los contienen, dan positiva la prueba.

Reacción del ácido glioxílico para triptófano: El grupo indólico del triptófano
reacciona con ácido glioxílico en presencia de ácido sulfúrico concentrado
dando un complejo de color púrpura.  El ácido acético glacial que ha sido
expuesto a la luz contiene ácido glioxílico.

Reacción para el triptófano: Este aminoácido se condensa fácilmente con

varios aldehídos en presencia de ácidos fuertes para dar compuestos
coloreados.  En la reacción se utiliza el reactivo de Ehrlich (p-
dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL conc.) que reacciona con un buen
número de compuestos orgánicos tales como índoles, aminas aromáticas y
compuestos ureicos para dar complejos coloreados.

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Reacciones para cisteína y cistina: Cuando los aminoácidos y las proteínas
que contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el
azufre presente reacciona para formar sulfuros.  Este sulfuro puede detectarse
por la formación de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de
acetato de plomo.

Los grupos tioles también reaccionan con el nitro prusiato de sodio en

presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo.

Prueba para Arginina: El aa. Arginina contiene un grupo guanidino en la

cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi
(a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color
rojo.

EXPERIMENTO 1: REACCIÓN XANTOPROTEICA

FUNDAMENTO
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la
presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado.
La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. La reacción
xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los
residuos de tirosina de las proteínas por el acido nítrico dando un compuesto
coloreado amarillo a pH ácido.

MATERIALES Y REACTIVOS
 Tubos de prueba.
 Gradilla para tubos.
 Baño maría.
 Pipetas de 10 mL.
 Piceta.
 Varilla de vidrio.
 Vasos de precipitación de a00 mL.
 Ácido nítrico concentrado.
 Agua destilada.
 Glicina 0.1M
 Tirosina 0.1M
 Albumina 0.1%.
 Solución alcalina de NaOH 40%.

PROCEDIMIENTO
Prepara una batería de tubos como sigue:

TUBOS N° 1 2 3 4
mL Glicina - 1.0 - -

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 0.1M
mL Albumina - - 1.0 -
0.1%

Agite suavemente y lleve a baño maría durante diez minutos. Retiré al cabo de dicho
tiempo y enfrié. Seguidamente adicioné 1 mL de NaOH al 40% y enfrié.

RESULTADOS
El cambio de coloración, de amarillo en solución acida a naranja oscuro en solución
álcali, constituye un resultado positivo.

En la albúmina la reacción fue positiva, dándose la coloración amarilla, esta indica la

presencia de anillos aromáticos en su estructura y su intensidad se intensifica, cuando
la reacción ocurre en una solución básica. 

EXPERIMENTO 2: REACCIÓN DEL ÁCIDO GLIOXÍLICO PARA

TRIPTÓFANO

FUNDAMENTO
Esta reacción tiene como fundamento la capacidad de reaccionar del triptófano con
grupos aldehídos en presencia de ácido sulfúrico, la formación de un anillo violeta en
la interfase es prueba positiva para el triptófano.
En esta reacción se emplea el ácido glioxílico como reactivo. Aun cuando no se
conoce la naturaleza del compuesto coloreado que se forma en el curso de la
reacción, parece que se encuentra involucrado el grupo aldehído con dos moléculas
de triptófano, originándose una sustancia similar al índigo.

MATERIALES Y REACTIVOS
 Tubos de prueba.
 Gradilla para tubos.
 Pipetas de 10 mL.
 Vasos de precipitación de 100 mL.
 Varilla de vidrio.
 Baño maría.
 Agua destilada.
 Glicina 0.1M.

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  Triptófano 0.1M.
 Albúmina 0.1%.
 Ácido acético glacial que ha sido expuesto a la luz (ácido glioxílico).
 Ácido sulfúrico concentrado.

PROCEDIMIENTO
Preparar una batería de tubos como sigue:

TUBOS N° 1 2 3 4
mL Glicina 1.0 - - -
0.1M
mL Albumina - - 1.0 -
0.1%

Después de haber adicionado el ácido glioxílico agite y agregue a cada tubo,

deslizando por las paredes 1mL de H2SO4 concentrado hasta que se forme dos capas.
Observe el anillo violeta en la interfase de los dos líquidos.

RESULTADOS
Cuando el grupo indólico del triptófano reacciona con el ácido glioxílico en presencia
del ácido sulfúrico concentrado se observa un anillo violeta.
La reacción es positiva ya que en ambos reactivos presentan complejos de coloración
violeta o amarillo violeta.

EXPERIMENTO 3: REACCIÓN DE BIURET PARA ENLACES

PEPTÍDICOS

FUNDAMENTOS
La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción
de Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina. La
reacción se basa en la formación de un compuesto color violeta, debido a la formación
de un complejo de coordinación entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos presentando un
máximo de absorción de 540 nm.

MATERIALES Y REACTIVOS
 Tubos de prueba.
 Gradilla para nubes.

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  Vasos de precipitación 100 mL.
 Varilla de vidrio.
 Pipetas de 10 mL.
 Goteros.
 Agua destilada.
 Piceta.
 Hidróxido de sodio al 10%.
 Sulfato de cobre al 5%.
 Proteínas (albúmina, caseína, gelatina) la caseína se disuelve en un poco de
NaOH diluido y las otras proteínas en solución salina.

PROCEDIMIENTO
Preparar una batería de tubos como sigue:

TUBOS N° 1 2 3
mL Albumina 2.0 - -

mL Caseína - 2.0 -

mL Gelatina - - 2.0

Agregar el sulfato de cobre gota a gota hasta la aparición del color violeta.

RESULTADOS
Debe aparecer una coloración que varía hasta la aparición del color violeta.
Las reacciones son positivas, debido a que la molécula contiene dos uniones
peptídicas o más, cercanas entre sí. Aunque las coloraciones obtenidas no fueron
exactamente violetas, pero al presentar el color azul y al reaccionar en la mezcla
decimos que contiene enlaces peptídicos.

CUESTIONARIO

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1. ¿Por qué todos los aminoácidos que contienen un núcleo aromático dan
positiva la reacción xantoproteica?

Es ácido nítrico reacciona con los núcleos aromáticos, sustituyendo el

nitrógeno por radicales nitro (dióxido de nitrógeno) con lo que se forma
nitroderivados aromáticos de color amarillo.

2. ¿Se podría utilizar en la prueba el fenol y la fenilalanina?

Si, ya que en esta reacción se explica por la nutrición de los grupos cíclicos de
la familia del benceno tales como fenol, fenilalanina, indol presentes en la
tirosina y el triptófano.

3. ¿Qué es punto isoeléctrico? Dar un ejemplo.

El punto isoeléctrico es aquel pH para el cual la molécula tiene carga neta cero.
Es decir, puede tener grupos cargados, pero la suma de todas las cargas
positivas iguala a la de las negativas.

Ejemplo: valina

4. ¿Qué es un zwitterión?

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 Son grupos ácidos y básicos que pueden neutralizarse mutuamente,
constituyendo una sal interna formada por un ion hibrido.
¿Cómo se forma?
Debido a la presencia de los aminoácidos de grupos con cargas opuestas,
provoca una interacción, entre estos grupos.

5. ¿Por qué el ácido acético glacial expuesto a la luz contiene ácido glioxílico?

6. ¿Porque los aminoácidos tienen carácter anfótero?

Los anfóteros son moléculas que contienen grupos ácidos y grupos básicos
existen como iones bipolares en ciertos intervalos de pH. El pH al cual todas
las moléculas están en la forma de ion dipolar se conoce como punto
isoeléctrico de la molécula. Las moléculas anfolitas son excelentes para la
elaboración de las disoluciones tampón ya que soportan ciertas adiciones de
ácidos o bases amortiguando los cambios de pH en la disolución por ionización
selectiva. En presencia de ácidos, estas moléculas aceptaran iones
hidrogenados, eliminándolos de la disolución.

7. Haga una diferencia entre aminoácidos esenciales y no esenciales. Dar

ejemplos.
AMINOACIDOS ESENCIALES:
Son aquellos que el propio que el propio organismo no puede sintetizar por sí
mismo, es decir, que no los elabora y se deben obtenerse a través de la dieta
diaria.
Ejemplos: arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilanilina,
treonina, triptófano y valina.
AMINOÁCIDOS NO ESENCIALES:
Son los que puede fabricar o sintetizar el propio cuerpo
Ejemplos: alanina, asparagina, aspartato, cisteína, glutamato, glutamina,
glicina, prolina, serina y tirosina.

8. ¿La reacción de Biuret es absolutamente específica para los enlaces

peptídicos?

9. ¿Qué limitaciones puede tener la presente metodología para la determinación

para la determinación de proteínas?

 Menos caro que el método de kjeldahl.

 Rápido (se puede completar en menos de 30 minutos).
 Es el método más simple de análisis de proteínas.
 No es frecuente encontrar derivaciones de color.

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  Pocas substancias no proteicas interfieren con la reacción de biuret.
 No detecta n2 de fuentes no proteicas o no peptídicas.

10. Esquematice la reacción del ion cúprico con los enlaces peptídicos de las
proteínas.

CONCLUSIONES
o La tirosina está en la albúmina, donde la reacción de su cadena lateral y más el
ácido nítrico forman la tirosina, este es para aminoácidos que tienen anillos
aromáticos, el color amarillo indica la presencia de aminoácidos en su
estructura.
o El ácido glioxílico más el ácido sulfúrico es la que la liga de color purpura, un
anillo violeta evidencia la presencia de grupos indólico (Triptófano).
o Debido al ion cúprico es porque se observa el color violeta, quien es el
indicador de la presencia de proteínas en las muestras.

RECOMENDACIONES

BIBLIOGRAFÍA
Mathews Van Holde. 2004 bioquímica. 3 Ed Pearson. España

Aminoácidos (II)  2014 por Christian Neyoy Siari

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